Capillaria Óvulos e Diagnóstico de Trichuris trichiura Infecção em seres Humanos pelo Kato-Katz Mancha, Libéria | Anne Marie

Estudo

Para avaliar o efeito da administração de medicamentos em massa usando ivermectina e albendazole para a eliminação da filariose linfática no HTS prevalência e intensidade, foram coletadas amostras de fezes ao longo de um período de 3 anos em 2 diferentes áreas Foya distrito (Lofa Condado) no noroeste da Libéria e em Harper distrito (Maryland Condado) no sudeste da Libéria (10). Examinámos uma única amostra de fezes por cobaia por microscopia (ampliação ×100) com esfregaços Kato-Katz duplicados (modelo de 41 mg). Nós preservadas as alíquotas dos selecionados aleatoriamente amostras em cartões FTA (GE Healthcare, Little Chalfont, reino UNIDO) ou em RNAlater (ThermoFisher, Waltham, MA, EUA) e enviou-os para Washington University School of Medicine (St. Louis, MO, EUA) para análise de acordo com pcr. Dois microscopistas experientes (L. G., A. T. Momolu) examinaram as amostras por esfregaço de Kato-Katz em ambas as áreas de estudo. Para detecção de STH por qPCR, extraímos ADN de ≈100 mg de fezes e testámo-lo conforme descrito por Pilotte et al. (5) with a Quantstudio 6 Flex Thermocycler (Applied Biosystems, Carlsbad, CA, USA) and TaqMan Fast Advanced Mastermix (Applied Biosystems). Usámos os seguintes iniciadores e sondas para detectar o ADN de Schistosoma mansoni: primer 5′-TGTGGAGTCTTTGTTGT-3′, primer 5′-CAACATGGGAACAGGA-3′, probe 5′-AGGTTCAGGGG/ZEN/GTGTTACGAA-31ABkFQ-3′.

testámos 353 amostras de fezes de Foya pelo esfregaço de Kato-Katz; 31 (8,8%) foram positivas para A. ovos de lumbricoides, 231 (65,4%) para os ovos de ancilostomídeos, 27 (7,6%) para os ovos semelhantes a T. trichiura e 276 (78,2%) para os ovos de S. mansoni. Testamos 225 amostras do Distrito de Harper por esfregaço de Kato-Katz; 163 (72,4%) foram positivos para ovos de A. lumbricoides, 65 (28,9%) para ovos de minhoca, e 51 (22,7%) para ovos de T. trichiura (Tabela 1). Houve um bom acordo entre os resultados dos testes Kato-Katz e qPCR para os espécimes de Harper (80,5% -91,6%), mas geralmente qPCR tinha maior sensibilidade. Nossos resultados foram consistentes com Resultados previamente relatados com amostras de outras áreas (3,11). O Acordo entre os 2 testes de diagnóstico para amostras de Foya variou de 77,3% a 92,9%, mas a sensibilidade do qPCR foi inesperadamente baixa, um achado que foi especialmente verdadeiro para a infecção por Ascaris e Trichuris (Tabela 1). Considerando que as amostras positivas para Ascaris por Kato-Katz, mas negativas para o qPCR, apresentavam uma baixa contagem de ovos, as amostras positivas para o Trichuris por Kato-Katz, mas negativas para o qPCR apresentaram uma contagem mais elevada; 7 amostras continham >1000 ovos em forma de barril/g de fezes (Quadro 2). Nós repetimos a extração de DNA e qPCR e também usamos um qPCR alternativo para T. trichiura (3), mas estes testes não melhoraram o Acordo entre os resultados de microscopia e qPCR.

para verificar se as amostras de fezes Kato-Katz–positivas, qPCR-negativas continham ovos de T. trichiura, examinámos os esfregaços directos das amostras de fezes preservadas em RNAlater por microscopia (ampliação ×100 e ×400) (figura). As amostras positivas por qPCR continham ovos (6 medidos)com morfologia típica de T. trichiura; estes ovos tinham um comprimento médio (±DP) de 52 µm (±2,4 µm) e uma largura de 25,5 µm (±1,3 µm). Em contraste, as amostras qPCR-negativas continham ovos (31 medidos) com um comprimento médio (±DP) de 51,8 µm (±1,5 µm) e uma largura de 32,7 µm (±2,1 µm). As amostras qPCR-negativas também tinham tampas menos pronunciadas e uma espessa casca estriada, características que são consistentes com ovos de Capillaria hepatica (sin. Calodium hepaticum) e algumas outras espécies de Capillaria (Trichuridae). Ovos de C. philippinensis ou C. aerophila que foram observadas em amostras de fezes humanas anteriormente eram menores ou maiores que os ovos de Capillaria encontrados em Lofa (12,13). Porque as tampas polares destes ovos são menos proeminentes do que as de T. trichiura, e porque suas formas são às vezes mais ovais ou redondas, eles também podem ser confundidos com ovos A. lumbricoides por microscopia de baixa potência, especialmente se apenas alguns ovos foram detectados (figura).

ovos de Helminth encontrados em amostras de fezes de pessoas no Condado de Lofa, Libéria. A, B) ovos de Trichuris trichiura em amostras positivas para T. trichiura por esfregaço de Kato-Katz e por qPCR. C-F) ovos de Capillaria spp. em amostras positivas para T. trichiura por Kato-Katz smear, mas negativas para T. trichiura por qPCR. G) ovos de Capillaria spp. na amostra positiva para Ascari lumbricoides por Kato-Katz smear, mas negativa para A. lumbricoides por qPCR. H) ovo de A. lumbricoides na amostra positiva para A. lumbricoides por esfregaço de Kato-Katz e qPCR. Barras de escala indicam 20 µm. qPCR, PCR quantitativo.

os membros da subfamília Capillaridae são parasitas animais com ciclos de vida algo divergentes, e a maioria não infecta os seres humanos. Ocorrem pseudoinfecções com C. hepatica; ovos encontrados nas fezes estão presentes porque foram consumidos no fígado animal infectado. No entanto, as infecções reais com C. hepatica não levam à passagem de ovos nas fezes (9). Outras espécies, como a C. philippinensis, causam infecções verdadeiras (e auto-infecção) com ovos encontrados nas fezes; a infecção está ligada ao consumo de peixe cru. A capilariose humana não foi relatada da Libéria, e apenas relatos de casos isolados foram publicados da África Subsaariana (7-9). Realizamos sequenciação de DNA para melhor caracterizar a espécie Capillaria encontrada em Foya. Utilizando os primers Kt875351.1 (5′-CCCTAGTTGCGACTTTAAACGA-3′) e Capillaria 18S1R (5′- TCCACCAACTAAGAACGGCC-3′), que foram capazes de amplificar e seqüenciar um 288-bp parte do 18S rDNA de T. trichiura de acordo com pcr negativo, as amostras que continham apenas os ovos morfologicamente identificado como Capillaria spp. (GenBank accession no. MG859285). O fragmento de DNA era 100% idêntico aos ortólogos de C. hepatica (adesão no. MF287972. 1), Aonchotheca putorii (C. putorii) (accession no. LC052356. 2), e Pearsonema plica (C. plica) (accession no. MF621034. 1), espécies de vermes de Capillaria que têm ciclos de vida variáveis e espécies hospedeiras, mas que são apenas 95% idênticos ao ortolog de T. trichiura.

o ciclo de vida e a importância médica das espécies de Capillaria encontradas em humanos no noroeste da Libéria continuam por elucidar. No nosso estudo, alguns indivíduos mostraram cargas elevadas de ovos de Capillaria que podem indicar uma verdadeira infecção em vez de pseudoinfecção. No entanto, foram notificadas contagens elevadas transitórias de ovos em pessoas com pseudoinfecções (7). Enquanto o consumo de carne de Mato em Foya é comum, o consumo de peixe cru ou mal cozido, que é necessário para a transmissão de C. philippinesis, é raro.