medicamentos para anticorpos monoclonais (mAb) têm atraído um interesse significativo devido à sua forte potência terapêutica e especificidade para o tratamento de doenças inflamatórias, oncológicas e auto-imunes. Devido à sua complexidade intrínseca devido a um grande número de micro-heterogeneidades, há uma necessidade crucial de métodos analíticos para fornecer uma caracterização abrangente em profundidade das moléculas candidatas.
uma infinidade de técnicas analíticas é fornecida por Biolabas criativas para a caracterização de anticorpos e a avaliação da homogeneidade em todas as fases da descoberta do mAb, desenvolvimento pré-clínico e clínico. Aqui, introduzimos a aplicação da focagem isoelétrica capilar (cIEF) para a análise da heterogeneidade da carga de anticorpos. É amplamente utilizado para a caracterização de mAbs terapêuticos. Ao determinar o IP das isoformas de carga mAb, o cIEF fornece informações cruciais para estabelecer a identidade, a pureza, as modificações pós-translacionais e a estabilidade.
Introdução ao cIEF
o cIEF baseia-se no princípio da electroforese em gel capilar. Eletroforese é uma técnica de separação baseada na velocidade diferencial de movimento de espécies carregadas em um campo elétrico, em direção ao eletrodo de carga oposta. Para separar moléculas com base no ponto isoelétrico (pI), um gradiente de pH dentro do gel é estabelecido usando misturas de ampholyte. Sob o campo elétrico, as moléculas migram ao longo do campo elétrico até atingirem o pH correspondente ao pI, onde as cargas positivas e negativas nas moléculas são equilibradas. A absorção UV em todo o capilar é medida durante a separação, permitindo a observação em tempo real e uma quantificação final.
princípio da focagem isoeléctrica.Fig.1 Princípio de focagem isoelétrica. (Pergande, 2017)
cIEF for Charge Heterogeneity Characterization
mAbs are susceptible to various post-translational modifications (e.g., glicosilação, fosforilação, oxidação e recorte de lisina), levando a variantes de carga. Algumas destas variantes de carga podem ter um possível efeito sobre a actividade biológica e a segurança da molécula em diferentes graus. Por exemplo, o perfil de glicosilação de mAbs influencia fortemente a atividade biológica da proteína. Consequentemente, a monitorização de rotina da heterogeneidade da carga mAb é parte integrante de qualquer plano de gestão da qualidade do produto e do ciclo de vida. É também um dos aspectos analíticos mais importantes dos estudos de desenvolvimento e comparabilidade biossimilares. Como uma técnica de separação baseada em carga, o cIEF é uma ferramenta poderosa para caracterizar o perfil de carga dos Embs, porque diferentes variantes de carga podem ser distinguidas de acordo com seus pI usando calibração interna. Como o cIEF fornece muito alta reprodutibilidade e especificidade, esta é uma das ferramentas mais populares para a análise do mAb.
Características dos Nossos Serviços
- Caracterização de tamanho e carga variantes de intactos e redução de mAbs com cIEF
- Análise da acusação de variantes de mAbs usando ortogonal abordagem
- cIEF separação seguido por espectrometria de massa (MS) análise
- serviços Personalizados de acordo com os requisitos específicos
Criativa Biolabs também oferece uma ampla gama de função de anticorpos ensaios para ajudar a entender os efeitos da carga variantes de anticorpos atividade e propriedades, tais como funções efetoras, FcRn, e antigen binding afinidade, e PK, elucidando assim as relações estrutura-função. Se estiver interessado no nosso serviço, por favor contacte-nos para discutir as suas necessidades.