quando pensa em separar as proteínas, pensa em separá-las usando um gel? Usando especificamente a SDS-PAGE? Se você respondeu “sim”, é por uma boa razão. SDS-PAGE é onipresente em laboratórios de biologia molecular porque é bom em separar proteínas. No entanto, SDS-PAGE leva muito tempo e é trabalhoso. Então vamos expandir sua caixa de ferramentas e olhar para outra maneira de separar proteínas: eletroforese em gel capilar.
electroforese em gel capilar (CGE) t. c. p.electroforese em peneiro capilar t. c. p. A. a electroforese em gel SDS-capilar separa as proteínas num gel através de colunas cheias com um meio de separação.
Requisitos de equipamento
na electroforese em gel capilar os seus analitos (as proteínas que pretende estudar) migram através de uma solução electrolítica através de capilares pela força de tracção de um campo eléctrico – não ao contrário da página SDS mais familiar. Para realizar a CGE é necessário: um frasco de amostra, frascos de origem e destino, matriz de peneiração, coluna capilar, um detector na coluna, um dispositivo de saída e manuseamento de dados e uma fonte de alimentação de alta tensão.Numa experiência de CGE, a sua amostra começa no frasco de origem e dirige-se para o frasco de destino. Aqui está o protocolo em resumo:
Passo 1: Os frascos da fonte e do Destino, bem como o capilar que os liga, são preenchidos com uma solução electrolítica e a amostra introduzida no capilar.
Passo 2: Uma vez aplicado o campo eléctrico, os analitos migram do lado do frasco de origem para o lado do frasco de destino.
Step 3: O detector em coluna (não surpreendentemente) permite a detecção em coluna. O detector envia dados para um dispositivo de saída e manipulação de dados, como um computador.
Passo 4: estes dados são então apresentados como um electroferograma. Seus analitos são lidos como picos de vários tempos de retenção.
para encontrar mais detalhes sobre como isso funciona visite o material útil de UC Davis.
mais sobre a matriz
a sua matriz de peneiração pode ser composta por vários materiais polimerizados, incluindo poliacrilamida, dextrano e poli(etilenoglicol ou óxido de etileno). As suas colunas são feitas de polímeros de peneiração substituíveis. Cabe – lhe então a si fazer as suas próprias colunas ou comprá-las. Beckman Coulter, a Agilent Tech e os Laboratórios Bio-Rad vendem kits de peneiração, mas saibam que estes requerem que vocês usem os seus instrumentos de CGE também.
por que deve utilizar CGE
agora que já ouviu falar sobre o que é CGE, por que deveria usá-lo?
- tem um tempo de operação mais curto. Executar um CGE leva 10-100 vezes menos tempo para completar do que a electroforese em gel de laje.
- há menos passos em uma experiência CGE do que em uma experiência SDS-PAGE. Isto porque os resultados finais do experimento CGE são dados por um computador conectado ao aparelho.
- CGE também é mais adequado para pequenas proteínas do que a SDS-PAGE tradicional.Pode analisar as suas proteínas em tempo real com CGE.O equipamento CGE pode ser usado repetidamente, sem necessidade de fazer géis intermináveis.Por último, grande parte do processo é automático. Depois de ter adicionado a sua amostra, está feito! Isso significa que você não tem que supervisionar o processo como você faz um gel ou trazê-lo para Equipamento de detecção especial, assim que o gel tem executado.
Por que Você NÃO Deve Usar CGE
Bem, verdade seja dita, mesmo que a CGE tem sido em torno de sua forma atual por mais de uma década, e muitos avanços foram feitos, CGE, ainda sofre de problemas de reprodutibilidade. Outro problema é que as separações CGE são realizadas em série. Isso significa que com CGE você não pode convenientemente comparar faixas. Finalmente, quando se trata de gels 2D, o CGE simplesmente não pode competir com a tradicional separação 2D.
em resumo, enquanto alguns pesquisadores estão orgulhosamente exclamando os usos da tecnologia CGE, ainda há uma série de problemas com ela. Mas não demitas já a CGE! O último impulso nesta área é o microchip CGE, que mostra muita promessa para a análise de proteína de alta velocidade. Para a próxima vez que pensares na separação de proteínas, não te esqueças da CGE.Já experimentou CGE? O que achas disto comparado com a SDS-PAGE?