cromossoma walking

o isolamento sequencial de clones que transportam fragmentos de restrição sobrepostos para abranger um segmento do cromossoma que é maior do que pode ser transportado em uma praga ou um vetor cósmico. A técnica é geralmente necessária para isolar um locus de interesse para o qual nenhuma sonda está disponível, mas que é conhecido por estar ligado a um gene que foi identificado e clonado. Esta sonda é usada para rastrear uma biblioteca de genomas. Como resultado, todos os fragmentos que contêm o gene marcador podem ser selecionados e sequenciados. Os fragmentos são então alinhados, e aqueles segmentos mais distantes do gene marcador em ambas as direções são subclonados para o próximo passo. Estas sondas são usadas para refazer a biblioteca do genoma para selecionar novas coleções de sequências sobrepostas. À medida que o processo é repetido, as sequências de nucleótidos de áreas cada vez mais distantes do gene marcador são identificadas, e eventualmente o locus de interesse será encontrado. Se uma aberração cromossômica está disponível que muda um determinado gene que pode servir como marcador molecular para outra posição no cromossomo ou para outro cromossomo, então a caminhada cromossômica pode ser deslocada para outra posição no genoma. O uso de aberrações cromossômicas em experimentos deste tipo é referido como salto cromossômico. See Chronology, 1978, Bender, Spierer, and Hogness.

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