Her-2/neu status pode ser detectada pela análise do número de cópias do gene por Southern blotting, PCR, ou PEIXE, ou a quantidade de proteína expressa pode ser determinado por Western blotting, enzyme-linked immunosorbent assay, ou IHC. Actualmente, os dois métodos mais utilizados são o IHC e o peixe, uma vez que são capazes de avaliar o Her-2/neu em tecidos de arquivo de parafina fixos em formalina.
a maioria dos estudos Her-2/neu foram realizados pela IHC, que detecta sobre-expressão do produto proteico Her-2/neu na membrana celular das células tumorais. Este estudo utilizou o anticorpo monoclonal CB11, que, como o Hercepteto policlonal padronizado, é dirigido contra o domínio intracitoplasmático da molécula Her2/neu .
IHC é amplamente acessível e fácil de executar a um custo razoável. No entanto, este procedimento semi-quantitativo é afetado por artefatos técnicos, diferenças de sensibilidade entre diferentes anticorpos e interpretação subjetiva, resultando em variabilidade interobservadora entre patologistas . Os estudos revelam a hipersensibilidade do HercepTest aprovado pela Food and Drug Administration dos EUA, com uma taxa de falsos positivos de 50% . A Thomson e os colegas concluíram que, em casos com uma intensidade de coloração IHC de 1+ ou 2+, o acordo interobserver é fraco e o valor preditivo não é satisfatório para uso clínico.; recomendaram ensaios adicionais, de preferência com peixes .
FISH is a fairly objective and quantitative procedure in detecting Her-2/neu gene amplification on the nuclei of tumoral cells. As desvantagens deste procedimento são o seu custo íngreme (10 vezes maior que o IHC), sofisticação, a necessidade de um microscópio de fluorescência, o sinal temporário (que requer uma câmera especial), e sua incapacidade de detectar e avaliar a histomorfologia tumoral.
a sobre-expressão Her-2/neu detectada pelo IHC está altamente correlacionada com a amplificação genética detectada pelo peixe (Até 98% de concordância) . No entanto, 3-15% dos carcinomas da mama apresentam coloração moderada da membrana Her-2/neu sem evidência de amplificação. Eles mais frequentemente representam coloração não específica altamente sensível (falso positivo) e, raramente, ou melhor transcrição de mRNA na ausência de amplificação ou amplificação genética que está abaixo do nível de detecção de métodos de hibridização in situ .
Kakar e os colegas concluíram que o IHC é apropriado para a avaliação inicial do Her-2/neu, mas os doentes cujos tumores tinham uma pontuação inferior a 3+ (particularmente aqueles interpretados como 2+) beneficiariam de peixes para avaliar o seu estado-2/neu com mais precisão e para evitar prognósticos imprecisos e tratamento inadequado .
CISH é um avanço recente na detecção Her-2 / neu. Ele usa uma robusto sonda de sequência única desenvolvida para hibridização in situ e é uma alternativa prática promissora para os peixes. Após o primeiro estudo da CISH por Tanner e colegas , sete outros relatórios validaram favoravelmente os resultados da CISH . A concordância entre o peixe e o peixe variou entre 85% e 100% . Todos estes relatórios observaram as vantagens da CISH sobre os peixes: requer um microscópio comum; o método é menos pesado e mais econômico; a intensidade do sinal é permanente; e os patologistas estão familiarizados com os sinais IHC e são capazes de correlacionar os achados com a histomorfologia tumoral subjacente. O CISH permite que os observadores selecionem campos de carcinoma ductal invasivo, evitando focos de carcinoma intraductal para os quais o Her-2/neu tem um significado clínico diferente. O CISH é um método específico, sensível e facilmente aplicável para a detecção da amplificação do gene Her-2/neu, e pode ser utilizado em conjunto com o IHC para a avaliação de pacientes com carcinoma da mama . Ross e colegas revisaram recentemente o status atual dos testes Her-2/neu, e concluíram que a CISH é uma técnica baseada em genes mais conveniente que está “esperando nas asas”.
neste presente estudo, a concordância entre casos 3+ IHC e amplificados pela CISH foi de 100% (40 de 40), denotando todos os casos amplificados pelo gene a serem sobreexpressivos da proteína Her-2/neu. Em contrapartida, o Acordo relativo aos casos 2+ IHC e CISH amplificados foi de apenas 45%, o que é inferior ao anteriormente comunicado (93%) . Os 13,75% (22 de 160) de tumores IHC-positivos/CISH não amplificados neste estudo, todos os quais tinham pontuações 2+ IHC, é maior do que o resultado falso positivo de 6% por Zhao e colegas , embora comparável ao resultado de 17% (IHC CB11 versus peixe) obtido por Tubbs e colegas . Aparentemente, descobrimos que a pontuação 2+ IHC é equívoca quando comparada com a CISH. Este subconjunto pode beneficiar de mais testes de reflexo CISH. Todos os casos negativos foram CISH não amplificados, mostrando total concordância de todos os resultados negativos. A concordância global de 86,25% entre o IHC (utilizando anticorpos CB11) e o CISH neste estudo é inferior à dos relatórios anteriores (94-96%). Concordamos com Sapino e colegas que a análise de amplificação genética pode ser evitada em todos os casos 0, 1+, e 3+ IHC porque os resultados são previsíveis da IHC e são completamente concordantes com a CISH . A utilidade da CISH está, portanto, em continuar a testar a alteração Her-2/neu em casos equívocos na IHC, que continua a ser o método de rastreio primário. O algoritmo IHC–CISH combinado fornece dados económicos e exaustivos do Her-2 / neu para orientar os médicos nas opções de mapeamento do tratamento.
a categoria CISH de baixa amplificação (6-10 sinais) foi a mais difícil de interpretar, requerendo uma enumeração precisa da cópia genética. A aglomeração de sinais, mais provavelmente um resultado da amplificação intracromossómica de regiões de coloração homogénea, foi imediatamente aparente em casos altamente amplificados e foi facilmente avaliada .
Um teste para o cromossoma 17 aneuploidy não foi realizada em não-amplificado e baixa-amplificada CISH ensaios, porque estudos recentes mostraram que torna a análise mais cara e mais demorada, sem acrescentar dados relevantes, além de relatar o número recomendado de nuclear amplicons e agir como outra forma de controlo interno para a reação de hibridização . Além disso, embora o fabricante (Zymed) sugeriu que o cromossoma 17 aneuploidy ser testados em todos os genes amplificados casos, nós concordamos com Vera-Romana e colegas , que apontou corretamente que porque a maioria dos polysomy resultados cair dentro da área cinza de três a cinco sinais, a definição do limiar de corte de sinal aponta para uma alta de seis ou mais (como neste estudo) praticamente elimina o polysomy variável.
este estudo não observou tumores amplificados CISH negativos IHC. Este facto pode provavelmente ser explicado pelo facto de se tratar de um estudo de uma única instituição, susceptível de ter blocos de parafina tumoral uniformemente fixos e processados, bem como uma técnica uniforme de recuperação de antigénios, ambos os quais facilitam o IHC de alta qualidade. Zhao e colegas relataram casos ocasionais de CISH negativo IHC, e consideraram que estes representam uma pequena porcentagem indeterminada que amplificou Her-2 / neu sem sobreexpressão . O mesmo estudo e outros estudos com peixes também observaram tumores raros 3+ IHC que não foram amplificados (falso positivo) . As razões apresentadas para as discrepâncias entre a IHC e a FISH são semelhantes às apresentadas no presente relatório.
As causas de teste de falha e de falsa negatividade oferecidos pelo anterior CISH estudos foram uma ausência de tumor na seção, uma incapacidade de pontuação, devido a uma elevada interferência de fundo, um sinal de baixa intensidade, apesar de repetidos ensaios, uma ausência de sinais de controlo interno, e o uso de álcool, formol, ácido acético fixador . Observou-se ainda que o pré-tratamento térmico e a digestão com pepsina são os procedimentos mais críticos para o desempenho otimizado da CISH, e que as taxas de sucesso da CISH foram baixas quando os blocos de tecido de 20 anos de idade foram usados .
Sauer e colegas correlacionaram os resultados da IHC e dos peixes com o prognóstico clínico. Observaram que os casos IHC/FISH-positivos, bem como os casos FISH-positivos-apenas tinham o mesmo prognóstico em relação à sobrevivência, enquanto que os casos IHC-positivos-apenas tinham um prognóstico semelhante ao dos tumores IHC/FISH-negativos. Em contrapartida, os casos IHC-negativos/FISH-positivos tinham uma probabilidade de sobrevivência semelhante à dos casos IHC/FISH-positivos. Os mesmos autores concluíram que se apenas o IHC fosse utilizado como ferramenta primária, os casos IHC-negativo/positivo para peixes seriam perdidos; essas mulheres não teriam o benefício do trastuzumab e a sua sobrevivência seria adversamente afectada. Em contraste, os tumores IHC-positivos-apenas parecem pertencer a um melhor grupo prognóstico, e a falha em detectá-los provavelmente não teria um efeito negativo na sobrevivência .
uma vez que os estudos dos resultados clínicos ainda não abordaram a utilidade dos resultados da CISH com baixa amplificação e alta amplificação, especialmente o significado incerto do grupo com baixa amplificação, estas categorias ainda estão em fluxo. Não obstante esta limitação, ainda há valor na notificação de tais grupos amplificados separadamente no momento, enquanto se aguarda qualquer associação clínica será obtida no futuro. Intraobserver e variabilidade interobservador no relatório de baixo-amplificado-alta e amplificado CISH resultados não foram incluídos no presente estudo, embora o patologista que interpretou a CISH ensaios aplicados de forma consistente com os critérios estabelecidos pelo fabricante.
o cancro da mama em mulheres pré-menopáusicas tem um perfil biopatológico diferente do dos doentes mais velhos, com predominância de parâmetros prognósticos desfavoráveis, incluindo uma maior frequência de tumores de grau 3 e uma sobre-expressão Her2/neu mais frequente . A idade jovem serve como medida substituta dos perfis prognósticos adversos . Este estudo não conseguiu estabelecer a associação entre o estado de menopausa, que foi arbitrariamente definido em 50 anos ou mais, e alteração Her2/neu.A amplificação Her2 / neu foi diretamente correlacionada com o grau e tipo histológico do câncer de mama . Sapino e colegas sugeriram que, com base no grau tumoral e tipo histológico, o patologista deve ser capaz de indicar ao oncologista qual o câncer de mama que requer análises Her2/neu . No entanto, embora nenhum dos quatro tumores bem diferenciados, mostrou Her2/neu amplificação ou sobreexpressão, nenhuma correlação significativa foi recolhida neste estudo, em termos de Her2/neu estado e histológicos grau; nós, portanto, ainda se inscrever para o teste de Her2/neu em todos os recém-diagnosticado cancro da mama. Globalmente, a distribuição etária dos doentes com cancro da mama e o grau histológico do tumor não previram significativamente o estado da IHC e da CISH Her2/neu.