O estado de veterinária laboratório de diagnóstico, o Texas&M de Medicina Veterinária Laboratório de Diagnóstico, TVMDL, testes de centenas de milhares de amostras por ano. No entanto, à beira da temporada de caça de cervos de cada ano, os números de teste começam a aumentar à medida que a demanda por doença emaciante crônica, CWD, testes aumenta.O que é a doença Emaciante crónica?
a CWD é uma doença neurológica progressiva que afecta várias espécies de cervídeos. As espécies sensíveis à CWD são veados de cauda branca, veados de cauda preta, veados de mula, alces, veados vermelhos, renas, sika e alces. Desde que foi relatado pela primeira vez em 1967, foi documentado tanto em espécies de cervídeos em cativeiro quanto em liberdade em 25 estados e três províncias canadenses.
CWD ganhou alguma atenção nos últimos anos como relatos de uma” doença do veado zumbi ” emergiu e se espalhou por vários meios de comunicação. Embora cativante,” zombie deer disease ” é na verdade um nome errado, uma vez que os animais afligidos com CWD não estão mortos. Uma vez afetado, pode levar de dois a quatro anos para que o animal infectado comece a exibir sinais clínicos, que podem imitar o comportamento “zombie-like” À medida que a doença progride. Animais afetados apresentam sinais tais como perda de peso, Babando, tropeçando e estupor. Esta combinação de sinais clínicos culmina em um animal que parece “desperdiçar”, cunhando o nome real da doença.Semelhante à encefalopatia espongiforme bovina, EEB, em bovinos e tremor epizoótico em ovinos e caprinos, a CWD é uma encefalopatia espongiforme transmissível natural, EET ou doença de prião. Os priões são proteínas anormais e extremamente difíceis de destruir. Uma vez infectados, os priões inicialmente afetam os gânglios linfáticos do animal e depois de se espalhar através do corpo, eventualmente infectar o cérebro.
em 2012, a CWD foi descoberta pela primeira vez no Texas em veados de transporte livre nas Montanhas Hueco. Desde então, a doença continuou a ser detectada no oeste do Texas e nas regiões de Panhandle em veados de mula, veados de cauda branca e alces.Embora a história da CWD no Texas tenha sido curta em comparação com outros estados, os testes de diagnóstico continuam a aumentar à medida que agências do Estado tentam controlar a doença. No Texas, TVMDL é o único laboratório aprovado para testar a CWD.Submarinos CWD: quem são eles?
no ano passado, a TVMDL realizou aproximadamente 26.500 testes CWD. Do número total de testes, quase metade foram realizados de outubro a dezembro. Este aumento nas submissões da CWD coincide com a época de caça de veados no Texas.
os caçadores devem aderir a certas diretrizes durante a temporada de veados devido aos parques do Texas e ao Departamento de Vida Selvagem, TPWD, programas destinados a mitigar a propagação da CWD. Por exemplo, se um veado for morto numa zona de quarentena em CWD, as amostras devem ser recolhidas e submetidas a testes em CWD. A coleta de amostras é realizada em postos de controle de caçadores, instalações de processamento de veados e, às vezes, taxidermistas.
CWD test requests are submitted by state agencies, like TPWD and the Texas Animal Health Commission, TAHC, and deer breeders. A TVMDL presta serviço a essas agências e à indústria de cervos para ajudar com os esforços em curso para rastrear a propagação de doenças como a CWD.
Detecting the Disease
Once at the laboratory, TVMDL tests samples through one of two methods: enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA, or immunohistochemistry, IHC. Ambos os métodos de ensaio exigem a extracção dos tecidos dos gânglios linfáticos de um veado ou do obex.
teste ELISA
o método mais solicitado é o teste ELISA. Este método é a opção mais sensível porque usa tecidos frescos em oposição aos tecidos fixados em um agente conservante. Todo o processo, excluindo o tempo de preparação da amostra, normalmente leva cerca de três horas. Uma vez que uma amostra chega à seção de serologia na TVMDL, ela começará a primeira de três fases: preparação da amostra.Durante a preparação da amostra, os volumes precisos e a localização anatómica dos gânglios linfáticos e/ou dos tecidos obex são cortados e colocados em tubos de trituração únicos. Os tubos são colocados em um instrumento de homogeneização que liquefaz os tecidos e os prepara para a segunda fase de teste, purificação.
a fase de purificação é semi-automatizada. Um instrumento de manuseamento de líquido começa com o processamento da amostra. Este processo digere priões normais usando Proteinase K e deixa para trás priões causadores de doenças, se existirem. Depois disso, o produto final líquido do processo de purificação é centrifugado para formar um sedimento. O sedimento é tratado uma segunda vez e depois diluído. O pellet irá então passar para a fase final de testes e determinar se quaisquer priões CWD estão presentes.
a detecção é a fase final do processo de teste ELISA. Nesta fase, a amostra diluída é testada utilizando um teste ELISA em sanduíche. Um teste ELISA em sanduíche utiliza duas camadas de anticorpos para determinar a concentração de um determinado antigénio, neste caso o prião CWD. Um substrato de mudança de cor é adicionado durante o processo como um indicador visual da presença de priões CWD na amostra. Se uma amostra desenvolve uma mudança significativa de cor, ela é considerada um “reator inicial”, IR, e é reestabelecida. Amostras IR que ainda indicam a presença de priões CWD após a re-análise são enviadas para o Departamento de Agricultura dos EUA – Animal and Plant Health Inspection Service, USDA-APHIS, National Veterinary Services Laboratory.
IHC Testing
TVMDL’s second CWD testing option, IHC, uses fixed or preserved tissues. Se os tecidos chegarem à TVMDL frescos ou mal fixados, adiciona-se um dia ao processo para permitir que os tecidos sejam fixados em formalina até estarem prontos para análise.
uma vez bem fixados, os tecidos são colocados em cassetes de plástico etiquetadas individualmente. As cassetes são necessárias para o passo seguinte em que os tecidos são processados durante cerca de 13 horas. Durante este tempo, os tecidos são desidratados, e toda a água é substituída por cera de parafina para preservar a estrutura celular do tecido.
após processamento, os tecidos são incorporados em um molde de cera de parafina para prepará-los para a seccionamento usando um microtomo. Este instrumento corta o bloco de tecido de cera em secções de 5 mícrons de espessura, mais finas do que um fio de cabelo humano.
a fina secção de tecido é montada numa lâmina de vidro. Após secagem durante a noite, as lâminas de vidro são preparadas para coloração. As lâminas são tratadas para remover a parafina e assegurar a disponibilidade de locais de ligação do antigénio durante o processo de coloração. Este processo identifica antigénios CWD no tecido, ligando uma molécula anti-prião ao antigénio CWD no tecido positivo e, em seguida, ligando um cromogénio vermelho a essa molécula.
este processo de coloração semi-automatizado leva aproximadamente seis horas no total; duas horas de trabalho manual e quatro horas automatizadas. Durante este período, Os três instrumentos de coloração podem manchar 90 lâminas de vidro. Quando a coloração está completa, todos os slides são cobertos e dados a patologistas da TVMDL que inspecionam microscopicamente cada slide para a presença de CWD.
semelhante ao método ELISA, se uma amostra é suspeita de ter CWD, é enviado para o laboratório do Serviço veterinário Nacional em Ames, Iowa para testes de confirmação e um diagnóstico final.
The TVMDL Difference
Although other laboratories across the U. S. offer CWD testing, TVMDL sets itself apart through its dedication to the individuals in the Texas deer industry. A agência trabalha em estreita colaboração com outras agências estatais e criadores de veados para estabelecer relações de trabalho e conexões pessoais.
para mais informações sobre os testes CWD na TVMDL, visite tvmdl.tamu.edu ou ligue para o laboratório da estação Universitária em 1-888-646-5623.