I. U. B.: 3.4.22.8
C. A. S.: 9028-00-6
Reação Enzimática (imagem irá abrir em uma nova janela)
Clostripain é uma cisteína ativado por protease encontrado, juntamente com colagenase e outras proteases, na cultura filtrados de Clostridium histolyticum. É único na sua especificidade para a ligação peptídica carboxila da arginina e na sua dependência de tiol e iões de cálcio.
história:
a bactéria da qual clostripain é purificada primeiro ganhou atenção durante a Primeira Guerra Mundial devido às suas graves consequências para os feridos (Mitchell e Harrington 1971). Cl. hisolyticum é apenas um dos organismos com propriedades patogênicas consequentes, mas sua atividade proteolítica em filtrados de cultura sem células ganhou atenção já em 1917 (Weinberg e Ségun 1917, e Mitchell e Harrington 1971).Em 1931, a digestão dos tendões dos cavalos foi descrita por Weinberg e Randin. Um ano depois, eles identificaram uma exotoxina, que eles denominaram “ferment fibrinolytique”, como a causa da digestão (Weinberg e Randin 1932). Mais tarde, descobriu-se que esta digestão foi causada por uma variedade de enzimas proteolíticas, incluindo uma proteinase activada por cisteína, clostripain (Kochalaty e Weil 1938, e Maschmann 1938). Em 1948, Kochalaty e Krejci isolaram clostripain de forma relativamente pura (Mitchell e Harrington 1968). Ogle and Tytell refined the purification technique in 1953 and first reported on its specificity (Ogle and Tytell 1953).
Quando a estreita especificidade de substrato de clostripain tornou-se de interesse, confusão existia na literatura sobre a identidade do clostripain (Mitchell e Harrington 1971). Antes de sua descrição como clostripain por Labouesse e Gros, em 1960, e, mais tarde, Mitchell e Harrington, em 1968, ele era conhecido como g-protease (Bard e McClung de 1948, e Oakley e Warrack 1950), amidase-esterase (Nordwig e Strauch 1963), e clostridiopeptidase B (Mitchell e Harrington, 1968).
o trabalho recente com clostripain incluiu isolamento celular e a sua utilização como alvo modelo de inibidores da protease para o tratamento de infecções clostridiais (Wang et al. 2004, and Gusman et al. 2001).Especificidade:
especificidade:
Clostripain hidrolisa selectivamente as ligações arginilosas e as ligações lisilosas a uma taxa mais baixa. Ele também pode atuar como uma transpeptidase com atividade máxima em pH 7.6-9.0 (Anderson 1985, e Fortier e MacKenzie 1986).
Características Moleculares:
ambas as cadeias pesadas e leves são codificadas por um único gene com um nucleótido de leitura aberta (ORF) de 1581. Após a expressão do gene, toda a ORF (região do sinal, região da proregião, e 9 linker peptídeo de aminoácidos) é transcrita. O processamento postranslacional produz a enzima heterodimérica activa (Dargatz et al. 1993).
composição:
Clostripain é um heterodímero. A cadeia madura é composta por 526 resíduos. As duas cadeias são mantidas juntas por fortes forças Não-populares (Gilles et al. 1979, e Ullman e Bordusa 2004). Acredita-se que o resíduo de sulfidril catalítico do local ativo seja Cys41 (resíduo de cadeia pesada). O precursor contém um peptídeo de sinal putativo de 27 aminoácidos, um propeptídeo de 23 aminoácidos, uma subunidade de cadeia leve de 131 aminoácidos, um peptídeo de 9 aminoácidos linker e uma subunidade de cadeia pesada de 336 aminoácidos (Ullman e Bordusa 2004).
> Proteína de Adesão Número: P09870
Peso Molecular:
- 53.0 kDa (Teórica)
- corrente de Luz: de 12,5 kDa, cadeia Pesada: 45 kDa (Gilles et al. 1979)
pH óptimo:
- 7.4-7.8 (atividade de contra-benzoyl-arginina etil éster) (Mitchell e Harrington 1968)
Ponto Isoeléctrico: 4.8-4.9 (Mitchell e Harrington, De 1971)
Coeficiente de Extinção:
- 87,890 cm-1 M-1 (Teórico)
- E1%,280 = 16.57 (Teórica)
Active Site Resíduos:
- Cisteína (C41, cadeia pesada)
Ativadores de:
- Sulfhydryl requisito: dithiothreitol, cisteína, ou outros agentes redutores
- íons Cálcio é essencial
- agentes redutores
Inibidores:
- EDTA
- agentes oxidantes
- reagentes Sulfidrílicos (tais como TLCK) (Porter et al. De 1971)
- Co2+, Cu2+, Cd2+, metais pesados e íons
- Citrato, Tris borato e ânions parcialmente inibir
Aplicações:
- Peptídeo de mapeamento
- análise da Sequência
- isolamento Celular (Wang et al. 2004)
- hidrólise / condensação de ligações amida
- síntese de péptidos (Meiwes et al. 1991)