embora a maior parte do trabalho sobre infecções clamídicas de pequenos ruminantes diz respeito a ovelhas, a clamidiose tem um impacto económico e de saúde pública em numerosas explorações de cabras em todo o mundo. Os abortos clamidianos foram relatados pela primeira vez na Alemanha em 1959.Depois disso, a doença foi diagnosticada na Bulgária, Espanha, EUA, França, Índia, Japão, Reino Unido, Chade, Grécia e Tunísia. Em muitas áreas, por clamídias o aborto é a segunda causa de doenças infecciosas de abortos após a brucelose, e a principal causa na maioria dos países onde a brucelose é controlado
Etiologia
A doença é devido a uma pequena Gram-negativos bactéria Chlamydia psittaci, que cresce no citoplasma de as células eucarióticas em um único ciclo de desenvolvimento no qual um resistentes a forma infecciosa, o ensino fundamental corpos (EB) alternativo com um metabolicamente ativo não-infecciosas forma o reticulado corpos (RB). O EB liga-se à membrana da célula hospedeira e promove a sua própria endocitose num vácuo limitado de membrana chamado de inclusão, que não se funde com lisossomas. Em seguida, o EB se transforma em RB, que se replica por fissão binária. Depois de várias divisões, A RBs, que preenche toda a inclusão, volta a transformar-se em EBs infeccioso. Estes EBs são liberados através da lise da célula hospedeira ou extrusão da inclusão da célula hospedeira . Chlamydia psittaci é uma das quatro espécies do género Chlamydia, que também inclui Chlamydia trachomatis, Chlamydia pneumoniae e Chlamydia pecorum.Chlamydia trachomatis e Chlamydia pneumoniae são patógenos humanos. C. psittaci infecta uma grande variedade de aves, mamíferos e ocasionalmente humanos e C. pecorum contamina ruminantes, suínos e coalas. Em ovelhas e cabras C. pecorum causa pneumonia, conjuntivite e artrite, mas é muito frequentemente isolado de infecções intestinais assintomáticas .
excepto em casos muito raros, as estirpes que induzem o aborto em caprinos pertencem ao serotipo 1 do C. psittaci, que também é responsável por pneumonia, conjuntivite e artrite e, por vezes, infecções intestinais sem quaisquer sinais clínicos. A espécie C. psittaci é muito heterogênea e antes da quarta espécie C. pecorum aparecer .
análises filogenéticas dos genes 16S e 23S rRNA sugerem a existência de nove espécies diferenciadas nas Chlamydiaceae, e lead Everett et al., para propor a criação de dois novos gêneros Chlamydia e Chlamydophila. O gênero Chlamydia, que corresponde à antiga Chlamydia trachomatis denominação inclui 3 espécies: C. trachomatis humano (cepas), C suis (suínos estirpes relacionadas com C. trachomatis isolado de abortos espontâneos, infecções vaginais, e pneumoniae) e C. muridarum (mouse-hamster estirpes).
O gênero Chlamydophila reúne 6 espécies: C. pneumoniae, C. pecorum, C. psittaci (anterior Chlamydia psittaci aviária cepas), C. caviae, o agente de cobaia a conjuntivite de inclusão (GPIC), C. felis (C. psittaci cepas que infectam gatos) e C. abortus (estirpes de serótipo clássico-1 da clamídia psittaci). Os resultados estão de acordo com os obtidos através de análises filogenéticas de outros cinco genes codificadores (GroEL, KDO-transferase, MOMP, proteína rica em cisteína 60-kDa e lipoproteína rica em cisteína) e as propriedades biológicas das estirpes . A restriction length polimorphism analysis (RFLP) of the ribosomal intergenic Spacer domain of 16S-23S rRNA genes provides a rapid and reproducible method for identifying and classifying the chlamydial strains in the new species . No entanto, alguns memebers da comunidade científica não concordam com a proposta de uma nova taxonomia clamidiana, uma vez que não leva em conta todo o genoma da bactéria.
sinais clínicos
a clamidiose é clinicamente caracterizada pelo aborto durante os últimos meses de gravidez, nados-mortos ou nascimentos prematuros de crianças fracas com baixo peso à nascença. Os abortos ocorrem sem sinais clínicos específicos anteriores, mesmo que algumas cabras possam desenvolver tosse persistente sem falta de ar, ou artrite e ceratoconjuntivite. Em infecções experimentais, observou-se corrimento vaginal ligeiro no dia anterior ao aborto em algumas cabras . Placentas retidas e metrite não são usuais, mesmo que sejam mais frequentes do que em ovelhas . Após o aborto, As cabras podem recuperar rapidamente ou apresentar descarga marrom da vagina. Em infecções experimentais ou em algumas infecções naturais com uma elevada taxa de abortos, apenas 50% ou menos de caprinos que abortaram, recuperaram rapidamente, enquanto doença pós-abortiva em ovelhas é incomum. Isto pode ser devido a diferenças de virulência entre as estirpes, uma vez que muito pouco se sabe sobre os mecanismos de virulência das estirpes. Em modelos de ratinhos , não foi possível apresentar diferenças na virulência entre as estirpes ovina e caprina, mas o polimorfismo do comprimento dos fragmentos amplificados (AFLP) revelou diferenças genómicas entre as estirpes caprina AC1 e ovina serotipo 1 C. psittaci .
embora tenhamos demonstrado que a manutenção de caprinos infectados pode resultar em Siros infectados , até agora nenhuma epiddimite devida a C. psittaci foi descrita em sires. Isto deve-se provavelmente ao número muito pequeno de estudos sobre a clamidiose caprina, em vez de uma maior susceptibilidade de carneiros e touros a infecções clamidianas.
num bando recentemente infectado, a taxa de aborto é grave. Frequentemente 30% ou mais, por vezes 90% das grávidas podem abortar e a produção de leite pode diminuir. A alta taxa de aborto é observada por 2 ou 3 anos após o qual a doença assume uma natureza cíclica: 10% das fêmeas grávidas abortarão a cada ano por vários anos até que um novo surto ocorra e, em seguida, todos os filhotes abortarão. O elevado nível de imunidade produzido após o aborto é responsável pela evolução cíclica da doença no rebanho: é excepcional para uma cabra abortar duas vezes. Papp e Shewen mostraram que algumas das ovelhas que abortaram podem se tornar cronicamente infectadas. Antígenos e DNA clamidianos podem ser detectados na vagina, útero e tubos uterinos durante o período peri-ovulatório de ovelhas que abortaram. Não foram realizadas pesquisas para determinar a incidência de infecções crônicas em manadas de caprinos.
o feto não apresenta lesão macroscópica específica. As crianças entregues perto do termo podem ser cobertas por material castanho. Edema difuso claro ou manchado de sangue, fluidos manchados de sangue nas cavidades abdominal e pleural e petéquias na língua, na cavidade bucal e nos cascos são frequentemente observados.
a transmissão da doença
infectada excretou um grande número de Chlamydiae na placenta e nos fluidos fetais no momento da brincadeira e no momento do aborto. Algumas cabras podem derramar clamídia em fluidos vaginais de mais de duas semanas antes do aborto para mais de duas semanas após o aborto. Isto pode explicar a maior incidência de aborto em rebanhos de cabras recém-infectados, uma vez que a susceptibilidade à infecção varia em relação ao estado fisiológico do animal. As cabras com menos de 100 dias de gravidez são mais suscetíveis do que as que estão no final da gestação ou as que são estéreis. Pequenas quantidades de Chlamydiae também podem ser derramadas na urina, leite e fezes durante vários dias após o aborto.Os caprinos jovens nascidos de mães infectadas podem manter a infecção no efectivo ou transmiti-la a outros efectivos. O levantamento de um grupo de 27 filhotes em um rebanho infectado durante seu primeiro ano de vida demonstrou como eles poderiam propagar a doença por não serem detectados por sua resposta serológica. Estas cabras jovens poderiam ser divididas em 3 grupos de acordo com a gestação/parto. O primeiro grupo era normalmente um garoto vivo, o segundo grupo era estéril ou tinha abortado muito cedo na gravidez para ser detectado e no terceiro grupo as cabras tinham abortado. Os anticorpos de fixação do complemento (CF) dos dois primeiros grupos aumentaram para atingir um máximo (1/80 – 1/160) no momento da reprodução, em seguida, os níveis de anticorpos diminuíram até o momento da brincadeira . O terceiro grupo tinha um título de anticorpos CF o papel da transmissão venérea de clamidiose por machos ainda precisa ser investigado. No entanto, infecções genitais em machos e touros resultam em infertilidade masculina e esterilidade em vez de aborto em fêmeas. O papel que a doença desempenha na infecção intestinal inaparente e sua influência na epidemiologia do aborto clamidioso precisa ser explorado. A recente identificação de marcadores moleculares para estirpes intestinais caprinas permitiria tais estudos.
diagnóstico
o diagnóstico é geralmente realizado pela detecção de bactérias em esfregaços ou impressão da placenta, em combinação com uma análise serológica de pelo menos dez amostras de soros.
a coloração da clamídia por meio do carimbo, Gimenez ou Maquiavelo é rápida e pode ser realizada facilmente na maioria dos laboratórios, mas sua interpretação é muitas vezes complicada, pois requer uma pessoa experiente para diferenciar a clamídia de Brucella e Coxiella. A imunofluorescência utilizando conjugados de imunoglobulina marcados com isotiocianato marcado com fluorescência, aumenta a sensibilidade e especificidade da detecção de clamídia em esfregaços ou impressões placenta.
a presença de antigénios clamidianos na placenta moída ou em esfregaços vaginais colhidos imediatamente após o aborto pode ser detectada por ELISA com kits de diagnóstico desenvolvidos para infecções por C. trachomatis humana .
em medicina humana, a reação em cadeia da polimerase (PCR) ou sua variação, a reação em cadeia da ligase (LCR) são considerados os métodos de diagnóstico mais sensíveis disponíveis para o diagnóstico de clamídia. Vários primários comuns a todos os tipos de clamídia, como Omp1, o gene que codifica a principal proteína da membrana externa , ou específico de C. psittaci ou C. pecorum ou das estirpes do serótipo-1 C. psittaci foram desenvolvidos para aplicação veterinária. Mas esta tecnologia continua a ser cara.
o teste de fixação do complemento (CFT) é o mais utilizado e considerado o padrão-ouro para o diagnóstico serológico. No entanto, o CFT não é muito sensível e não é específico porque o teste usa um antígeno I comum com C. pecorum, que a maioria das cabras abrigam em seu intestino. Por conseguinte, as reacções positivas com títulos entre 1: 10 e 1: 40 não são específicas para o aborto, mas podem estar relacionadas com uma infecção intestinal com C. pecorum. O teste de TFC deve ser realizado, de preferência, 3 a 6 semanas após o aborto ou a borra, quando a resposta aos anticorpos atingir o seu nível máximo. O teste de TFC não pode ser usado para diagnóstico individual ou para detectar infecções em jovens ou em homens .
várias tentativas foram realizadas para desenvolver técnicas mais específicas, que iriam distinguir entre infecções por C. psittaci e C. pecorum. No entanto, nenhum destes testes foi suficientemente sensível e específico. Recentemente, foi desenvolvido um novo teste de imunoabsorção enzimática indirecta (ELISA) baseado num antigénio recombinante que exprime uma parte de uma proteína de 80-90 kDa . O teste reage com anticorpos séricos induzidos precocemente contra estas proteínas familiares multigénicas altamente imunogénicas . Este teste tem alta sensibilidade e alta especificidade .
o tratamento
as tetraciclinas afectam a replicação da clamídia e podem ser eficazes na prevenção dos abortos. A injecção de 20 mg/kg de oxitetraciclina administrada por via intramuscular aos 105 e 120 dias de gravidez pode prevenir o aborto, mas não pode impedir o derramamento clamidioso a brincar.As vacinas mortas podem reduzir a incidência de aborto, mas não a excreção de Chlamydiae a brincar. O aborto induz uma imunidade forte o suficiente para suportar desafios posteriores , uma vacina viva constituída com um mutante sensível à temperatura das estirpes de C. psittaci foi desenvolvida . As cabras susceptíveis foram vacinadas antes do acasalamento e não se observou qualquer interferência com a subsequente gestação. As cabras foram protegidas contra o aborto clamidioso e o clamidiano derramado na brincadeira foi impedido. No entanto, quando todos os caprinos de uma manada infectada são vacinados no primeiro ano e todos os animais de substituição são vacinados nos anos seguintes, pode levar cerca de 3 anos até que os abortos parem. Isto é devido a infecção latente em caprinos, caprinos que foram infectados antes da vacinação, mas não abortaram. A vacinação não alterará o curso de uma infecção latente. Estas cabras podem abortar ou criar filhotes saudáveis ou infectados no Termo e podem ou não largar Chlamydiae. Enquanto as cabras com uma infecção latente estiverem presentes em um rebanho, não é aconselhável parar de vacinar (ou então os abortos começariam de novo), nem é possível vender animais vacinados, exceto aos criadores que vacinam seu rebanho regularmente.
perspectivas futuras
o desenvolvimento de uma vacina, tão eficaz como a vacina viva mencionada, que protegeria e permitiria a detecção serológica de caprinos infectados em bandos vacinados, seria muito útil para o controlo da doença. A depleção do” antigénio específico do diagnóstico ” da vacina viva não é actualmente uma opção, uma vez que ainda não estão disponíveis metodologias genéticas e moleculares adequadas e parece difícil eliminar esta família de proteínas. Por estas razões, seria interessante uma vacina acelular, que protege contra o aborto e a excreção. Estudos anteriores demonstraram que tanto os linfócitos T como B estão envolvidos na imunidade protectora . Nos modelos murinos, as células T CD8+ (Lyt 2+ em ratinho) desempenham um papel importante na protecção após a transferência de células biliares primadas . Até à data, C. os antigénios das células T e epitópios psittaci são desconhecidos. Embora se deva ter cuidado na extrapolação dos resultados de C. trachomatis para C. psittaci, foram identificados vários epítopos de células T na proteína principal da membrana externa da C. trachomatis (MOMP)
o papel dos anticorpos na prevenção da infecção placentária e fetal por C. psittaci foi demonstrado em ratinhos. A transferência passiva de soros policlonais específicos induz imunidade significativa, embora inferior à protecção mediada pelas células T. Anticorpos monoclonais (Mabs) que neutralizam C. a infecciosidade do psittaci in vitro confere uma notável imunidade a ratinhos prenhes após provocação intravenosa desde que o aborto e a colonização fetal são eliminados . A imunidade Humoral está envolvida na protecção. A sua eficácia depende da concentração de anticorpos específicos contra o epítopo apropriado. Todas as placas protectoras isoladas até à data reagem com epítopos conformacionais termossensíveis localizados em um oligômero MOMP .
assim, o oligómero MOMP pode ser um potencial componente da vacina . No entanto, não é viável produzir este antigénio por extracção a partir de chlamydiae, uma vez que o custo de produção excederia largamente o que um agricultor consideraria acessível para uma vacina caprina ou ovina. Por conseguinte, devem ser investigados métodos alternativos de produção de vacinas.
a geração de oligómero MOMP recombinante pode ser difícil. O gene que codifica o MOMP, Omp1, é bem caracterizado, mas a expressão de alto nível do gene de comprimento total de um promotor não regulamentado é tóxica para E. coli. Por esta razão, foram desenvolvidas diferentes estratégias experimentais para a geração dos epítopos protectores. Tentámos imitar os epítopos protectores com anticorpos anti-idiotípicos monoclonais, ou um mimotópio peptídico confinado em conformidade, mas nenhum deles foi eficiente. Decidimos avaliar a vacinação de ratinhos com vacina de ADN como vacinação de ADN com ratinhos protegidos pelo gene MOMP contra C. trachomatis e perus contra C. psittaci . Até à data, só se obteve uma protecção parcial, mas mais investigação (no gene-alvo, concentração de ADN, via de vacinação, etc.).) é necessário saber se os ratinhos podem ser protegidos com uma vacina de ADN tão eficientemente como com a vacina viva.