Abstract
usámos um sistema de cultura clonal de duas fases para demonstrar inequivocamente que as células progenitoras primitivas individuais linfohemopoiéticas têm a capacidade de diferenciação ao longo da linhagem mielóide ou linfóide B. As células da medula murina altamente enriquecidas foram platinadas individualmente em cultura por Micromanipulação na presença de meio condicionado, eritropoetina, factor de aço (SF) e interleucina (IL) estimulado pelas células do baço altamente enriquecidas. Quarenta e cinco por cento das células individuais formaram colônias primárias expressando múltiplas linhagens hematopoiéticas. Quando as alíquotas de colónias individuais foram replantadas em cultura secundária de metilcelulose contendo SF e IL-7, 41% das Colónias primárias deram origem a colónias de linfócitos. As células das colónias de linfócitos eram blast-like e B220+, Sig -, Mac-1 -, Gr-1 -, Ly-1-, L3T4 -, Ly-2 -, e CD3 -. 30 a 70% das células eram Thy-1+. o ARNm de cadeia mu foi detectado na maioria das células por hibridização in situ com uma sonda de RNA antissenso. Quando as colónias de linfócitos derivadas de uma única célula foram agrupadas e individualmente injectadas em ratinhos scid, a IgM do tipo dador foi mensurável no soro de ratinhos e os bípedes continham células do tipo B do dador. Procedemos então ao rastreio inicial dos factores de crescimento para identificar os factores de crescimento que possam substituir o meio condicionado de células do baço estimulado por uma erva-de-algas na cultura primária. As combinações de dois factores que incluíram SF mais IL-6, IL-11 ou factor estimulante de colónias de granulócitos foram todos eficazes na cultura primária na manutenção do potencial linfóide B. Curiosamente, IL-3 não poderia substituir nem agir sinergisticamente com SF para apoiar o potencial linfóide das culturas primárias. As nossas observações demonstram que muitas progenitoras primitivas anteriormente consideradas mielóides com Compromisso também possuem potencial linfóide B. Este sistema de cultura deve revelar-se valioso para elucidar os mecanismos que regulam as fases iniciais da linfohemopoiese.