Clostripain(Endoproteinase-Arg-C)

I.U.B.:3.4.22.8
C.A.S.:9028-00-6

Enzymatic Reaction(画像は新しいウィンドウで開きます)

Clostripainはaです。システイン活性化プロテアーゼは，コラゲナーゼおよび他のプロテアーゼとともに，Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ Ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃｕｍの培養ろ液中に見出された。 これは、アルギニンのカルボキシルペプチド結合およびチオールおよびカルシウムイオンへの依存性に対する特異性において独特である。

履歴:

クロストリパインが最初に精製された細菌は、第一次世界大戦中に負傷者への深刻な影響のために注目を集めました（Mitchell and Harrington1971）。 Cl. hisolyticumは必然的な病原性を持つ生物の一つに過ぎないが、無細胞培養ろ液におけるそのタンパク質分解活性は、1917年にまで遡って注目を集めた（Weinberg and Ségun1917、Mitchell and Harrington1971）。

1931年、WeinbergとRandinによって馬の腱の消化が記述されました。 一年後、彼らは消化の原因として、彼らは”発酵線維溶解”と呼ばれる外毒素を同定した（WeinbergとRandin1932）。 後に、この消化は、システイン活性化プロテイナーゼ、クロストリパインを含む様々なタンパク質分解酵素によって引き起こされることが判明した（Kochalaty and Weil1938、およびMaschmann1938）。

1948年、KochalatyとKrejciは比較的純粋な形でクロストリパインを初めて単離することに成功した(Mitchell and Harrington1968)。 OgleとTytellは1953年に精製技術を洗練し、その特異性について最初に報告した（Ogle and Tytell1953）。

クロストリパインの狭い基質特異性が注目されるようになったとき、クロストリパインの同一性に関する文献に混乱が存在した(Mitchell and Harrington1971)。 1960年にLabouesseとGrosによってクロストリペインとして記載され、1968年にmitchellとHarringtonによってクロストリペインとして記載される以前は、g-プロテアーゼ(Bard and McClung1948,and Oakley and Warrack1950)、アミダーゼ-エステラーゼ(Nordwig and Strauch1963)、クロストリジオペプチダーゼB(mitchell and Harrington1968)と呼ばれていた。

クロストリパインの最近の研究には、細胞の単離と、クロストリジウム感染症の治療のためのプロテアーゼ阻害剤のモデル標的としての使用が含まれている(Wang et al. ２ ０ ０ ４、およびＧｕｓｍａｎ ｅ ｔ ａ ｌ． 2001).

特異性：

クロストリパインは、アルギニル結合およびリシル結合をより低い速度で選択的に加水分解する。 また、pH7.6〜9.0で最大活性を有するトランスペプチダーゼとして作用することもできる(Anderson1985,And Fortier and MacKenzie1986)。

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重鎖と軽鎖の両方が1581ヌクレオチドオープンリーディングフレーム（ORF）を持つ単一の遺伝子によってコードされています。 遺伝子の発現時に、全体のORF（シグナル領域、proregion、および9アミノ酸ペプチドリンカー）が転写される。 後翻訳処理は、ヘテロ二量体活性酵素を産生する（Ｄａｒｇａｔｚ ｅ ｔ ａ ｌ． 1993).

組成：

クロストリパインはヘテロ二量体である。 成熟鎖は526残基で構成される。 ２つの鎖は、強い非共有結合力によって一緒に保持される（Ｇｉｌｅｓ ｅ ｔ ａ ｌ． １ ９ ７ ９、およびＵｌｌｍａｎおよびＢｏｒｄｕｓａ２ ０ ０ ４）。 活性部位の触媒的スルフヒドリル残基は、Ｃｙｓ４ １（重鎖残基）であると考えられる。 この前駆体は、２ ７アミノ酸推定シグナルペプチド、２ ３アミノ酸プロペプチド、１ ３ １アミノ酸軽鎖サブユニット、９アミノ酸リンカーペプチド、および３ ３ ６アミノ酸重鎖サブユニットを含む（Ｕｌｌｍａｎ ａｎｄ Ｂｏｒｄｕｓａ２ ０ ０ ４）。

タンパク質受託番号：P09870

分子量:

• 53.0 ５ｋＤａ、重鎖：４ ５ｋＤａ（Ｇｉｌｅｓ ｅ ｔ ａ ｌ． 1979)

最適なpH:

• 7.4-7.8(a-ベンゾイル-アルギニンエチルエステルに対する活性)(Mitchell and Harrington1968)

等電点:4.8-4.9(Mitchell and Harrington1971)

消光係数:

• 87,890 cm-1M-1(理論値)
• E1%,280=16.57(理論値))

活性部位残基:

• システイン（C41、重鎖)

活性化剤:

• スルフヒドリル要件：ジチオトレイトール、システイン、または他の還元剤
• カルシウムイオンが必須である
• 還元剤

阻害剤:

• EDTA
• 酸化剤
• スルフヒドリル試薬（TLCKなど）（Porter et al. 1971)
• Co2+、Cu2+、Cd2+、および重金属イオン
• クエン酸塩、ホウ酸塩およびトリス陰イオンは部分的に

アプリケーションを阻害します:

• ペプチドマッピング
• 配列解析
• 細胞単離(Wang et al. 2004)
• アミド結合の加水分解/縮合
• ペプチド合成(Meiwes et al. 1991)