Her-2/neu statusのスクリーニングアーカイブ乳癌組織サンプルにおける新規代替案は、サザンブロッティング、PCR、またはFISHによリンクされた免疫吸着アッセイ、またはIHC。 現在最も広く使用されている二つの方法は、ホルマリン固定パラフィン包埋アーカイブ組織におけるHer-2/neuを評価することができるため、IHCとFISHです。
ほとんどのHer-2/neu研究は、腫瘍細胞の細胞膜上のHer-2/neuタンパク質産物の過剰発現を検出するIHCによって行われている。 この研究では、標準化されたポリクローナルハーセプテストのように、HER2/neu分子の細胞質内ドメインに対して向けられているCB11モノクローナル抗体を使
IHCは広くアクセス可能で、合理的なコストで実行するのが簡単です。 しかし、この半定量的手順は、技術的な成果物、異なる抗体間の感度の違い、および病理学者間のobserver間の変動が生じ、主観的解釈に悩まされています。 調査は50%高い偽陽性率の米国の食品医薬品局公認のHercepTestのoversensitivityを、明らかにします。 Thomsonたちは、IHC染色強度が1+または2+の場合、observer間の合意は悪く、予測値は臨床的使用には不十分であると結論づけた; 彼らは、好ましくは魚で、追加のテストをお勧めします。
FISHは、腫瘍細胞の核におけるHer-2/neu遺伝子増幅を検出する上で、かなり客観的かつ定量的な手順です。 この手順の欠点は、その急なコスト（IHCの10倍）、洗練された、蛍光顕微鏡の必要性、一時的な信号（特別なカメラが必要）、および腫瘍組織形態を検出および評価
Ihcによって検出されたHer-2/neu過剰発現は、FISHによって検出された遺伝子増幅と非常に相関している（98％の一致）。 ただし、乳癌の3-15%は拡大の証拠なしで穏健派のHer-2/neuの膜の汚損を示します。 それらは、ほとんどの場合、高感度の非特異的染色（偽陽性）を表し、まれに、増幅またはin situハイブリダイゼーション法の検出レベル以下の遺伝子増幅の非
Kakarらは、ihcは最初のHer-2/neu評価には適切であるが、腫瘍のスコアが3+未満の患者（特に2+と解釈される患者）は、HER-2/neuの状態をより正確に評価し、不正確な
CISHはHer-2/neu検出の最近の進歩です。 それはその場のハイブリダイゼーションのために開発される強い独特順序の調査を使用し、魚へ有望で実用的な代わりである。 Tannerらによる最初のCISH研究の後、他の7つの報告がCISHの結果を好意的に検証した。 CISHと魚の間の一致は85％から100％までの範囲であった。 これらの報告はすべて、魚よりもCISHの利点を指摘しました：それは通常の顕微鏡を必要とし、方法はあまり面倒でより経済的であり、信号強度は永久的であり、病理学者はIHCシグナルに精通しており、基礎となる腫瘍組織形態学と所見を相関させることができる。 CISHは、オブザーバーがher-2/neuが異なる臨床的意義を有する乳管内癌の病巣を回避し、浸潤性乳管癌のフィールドを選択することができます。 CISHはHer-2/neuの遺伝子の拡大の検出のための特定、敏感で、容易に適当な方法であり、乳癌の患者の評価のためにIHCとともに使用することができる。 Rossたちは最近、HER-2/neu試験の現在の状況を見直し、CISHは「翼で待っている」より便利な遺伝子ベースの技術であると結論づけた。
本研究では、3+IHCとCISH増幅例の間の一致は100％（40の40）であり、すべての遺伝子増幅例がHer-2/neuタンパク質を過剰発現していることを示しています。 対照的に、2+IHCおよびCISH増幅症例に関する合意はわずか45％であり、これは以前に報告された（93％）よりも低かった。 13.75％（160の22）IHC陽性/CISH非増幅腫瘍は、すべてが2+IHCスコアを有していたが、Tubbsらによって得られた17％の結果（IHC CB11対FISH）に匹敵するが、Zhaoらによる6％の偽陽性結果よりも高かった。 明らかに、CISHと比較した場合、2+IHCスコアはあいまいであることがわかります。 このサブセットは、さらなるCISH反射テストの恩恵を受ける可能性があります。 すべての陰性ＩＨＣ症例はＣＩＳＨ非増幅であり，すべての陰性結果と完全に一致した。 この研究におけるIHC（CB11抗体を使用）とCISHとの間の86.25％の全体的な一致は、以前の報告（94〜96％）よりも低い。 Sapinoらは、結果がIHCから予測可能であり、CISHと完全に一致するため、0、1+、および3+IHCのすべての症例で遺伝子増幅解析を回避できることに同意します。 したがって、CISHの有用性は、ihcにおけるあいまいな症例に対するHer-2/neuの変化をさらにテストすることにあり、これは主要なスクリーニング方法である。 結合されたIHC–CISHのアルゴリズムは処置の選択の地図を描くことの臨床医を導くために経済的な、広範囲Her-2/neuデータを提供する。
低増幅CISHカテゴリ（6-10シグナル）は、遺伝子コピーの正確な列挙を必要とする、解釈するのが最も困難でした。 シグナルクラスタリング、よりおそらく均質染色領域の染色体内増幅の結果は、高度に増幅されたケースではすぐに明らかであり、容易に評価された。
染色体17異数性のテストは、非増幅および低増幅CISHアッセイでは行われませんでしたが、最近の研究では、推奨される数の核アンプリコンを報告し、ハイブリダイゼーション反応のための内部制御の別の形態として機能することを除いて、関連するデータを追加することなく、分析がより高価で時間がかかることが示されたためです。 さらに、製造業者（Zymed）は、すべての遺伝子増幅された症例で17番染色体異数性を試験することを提案したが、Vera-Romanらは、ほとんどのポリソミー結果が3〜5個のシグナルの灰色の領域に入るため、カットオフシグナルポイントの閾値を6以上に設定すると（この研究のように）、ポリソミー変数が実質的に排除されることを正しく指摘した。
この研究では、IHC陰性のCISH増幅腫瘍は観察されなかった。 これは、腫瘍組織パラフィンブロックを均一に固定して処理した単一施設の研究であり、均一な抗原検索技術であり、高品質のIHCを容易にするという Zhaoたちは、時折IHC陰性のCISH増幅例を報告し、これらは過剰発現なしにHer-2/neuを増幅する未確定の割合が小さいと考えた。 同じ研究および他のFISH研究では、非増幅（偽陽性）であったまれな3+IHC腫瘍も認められた。 IHC–CISHの不一致の理由は、本報告書で以前に述べたように、IHCとFISHの間の理由と同様である。
以前のCISH研究によって提供された試験の失敗と偽陰性の原因は、セクションに腫瘍がないこと、高い背景によるスコアができないこと、反復試験にもかかわらず信号強度が低いこと、内部統制からの信号がないこと、アルコール–ホルマリン–酢酸固定剤の使用であった。 さらに、熱前処理とペプシンによる消化は、最適化されたCISH性能のための最も重要な手順であり、20歳の組織ブロックを使用したときにCISHの成功率が低今回、Sauerたちは、IHCとFISHの結果を臨床予後と相関させた。 彼らは、IHC/FISH陽性例とFISH陽性のみの例は生存に関して同じ予後を示したが、IHC陽性のみの例はIHC/FISH陰性腫瘍と同様の予後を示したことを指摘した。 対照的に，ＩＨＣ陰性／ＦＩＳＨ陽性例はｉｈｃ／ＦＩＳＨ陽性例と同様の生存確率を有していた。 同じ著者は、IHCのみを主要なツールとして使用すると、IHC陰性/FISH陽性の症例は見逃され、それらの女性はトラスツズマブの利益を得ず、生存に悪影響を及ぼ 対照的に、IHC陽性のみの腫瘍は、より良好な予後群に属するようであり、それらを検出しないことは、おそらく生存に悪影響を及ぼさないであろう。
臨床転帰研究は、低増幅および高増幅CISH結果の有用性、特に低増幅群の不確実な意義に対処するためには至っていないため、これらのカテゴリはまだ流 この制限にもかかわらず、現時点では、そのような増幅されたグループを別々に報告することにはまだ価値があり、将来どのような臨床関連が得られる CISHアッセイを解釈した病理学者は一貫してメーカーによって設定された基準を適用したが、低増幅および高増幅CISH結果を報告する上でobserver内およびobserver間の変動は、この研究に含まれていませんでした。
閉経前女性の乳がんは、高齢患者とは異なる生物病理学的プロファイルを有し、グレード3腫瘍の頻度が高く、Her2/neu過剰発現が頻繁であるなど、好ましくない予後パラメータが優勢である。 若年は、有害な予後プロファイルの代理尺度として機能する。 この研究では、50歳以上で任意に設定された更年期状態とHer2/neu変化との関連を確立することができなかった。
Her2/neu増幅は、乳癌の悪性度および組織型と直接相関していた。 Sapinoらは、腫瘍の悪性度と組織型に基づいて、病理学者は、どの乳癌がHer2/neu解析を必要とするかを腫瘍学者に示すことができるはずであることを示唆した。 しかし、四つの高分化腫瘍のいずれもHer2/neuの増幅または過剰発現を示さなかったが、有意な相関はHer2/neuの状態と組織学的グレードの面で本研究で収集されなかった;我々は、したがって、まだすべての新たに診断された乳がんにher2/neuをテストすることを購読しています。 全体として、乳癌患者および腫瘍組織学的グレードの年齢分布は、IHCおよびCISH Her2/neu状態を有意に予測しなかった。