キメリズム検査は、同種移植レシピエントの生着および移植後のフォローアップのルーチン文書化に使用されます。 ドナー細胞とレシピエント細胞は、移植前に決定された遺伝子マーカーを検査することによって区別することができます。2性差が一致しない移植では、レシピエントとドナーが性別が異なる場合、女性と男性の細胞の割合は、通常、性染色体マーカーの分析によって決定され、最も頻繁には魚で決定される。8,9PCRによるタンデムリピート（VNTR）または短いタンデムリピート（STR）の可変数の評価は、セックスマッチ移植におけるキメリズムの決定のための最も貴重なMRDの検出のために10の様々な方法が開発されている。 骨髄の形態素解析は、骨髄空間の5％以上を占める残留疾患を同定することができ、したがって、早期発見のために必要な感度を欠いている。 また、追加のマーカーを使用せずに骨髄を再増殖させる正常なドナー由来の造血芽球から小さな白血病芽球集団を区別することはしばしば困難である。 特定の細胞遺伝学的異常、FACSによって識別することができる特定のimmunophenotype、PCRによって増幅することができる特定のDNAまたはRNA配列またはclonogenic試金の特定の MRDのための特定の腫瘍マーカーの非存在下では、キメラ検査は、レシピエント由来の細胞を検出するために使用することができます。 レシピエント由来細胞の検出は、常に再発のリスクと相関しない可能性があります。 混合キメラ症（Ｍ Ｃ）に寄与するレシピエント細胞は、悪性クローンに属するか、または正常な造血細胞、あるいは間質細胞でさえあり得る。 標準的な同種異系移植後の最初の数週間の間に、感受性試験が使用される場合、レシピエント細胞は依然として検出され得る。9,11これらは調節の養生法を存続させる大抵Tの細胞です。 宿主細胞は、移植後の経過の後でさえも低レベル（＜６ ７ ６ ８＞１％）で検出され得る。 MCは、非骨髄破壊性コンディショニング後により頻繁に検出される。2したがって、腫瘍特異的マーカープローブは、おそらくMRDの検出のための性不一致プローブよりも優れており、より正確です。しかし、腫瘍特異的検査によるMRDの検出でさえ、再発のリスクと必ずしも相関していない可能性がある。 Bcr/ABLの陽性PCR試験は、健常者において報告されている。13t(14;18)転座は、非ホジキンリンパ腫患者のBリンパ球以外の系統で検出された。MRDが臨床的に有意であるための閾値が存在する可能性がある。 Tを有するAMLなどのいくつかの疾患では（8;PCRによって検出されたMRDの存在下では、長期の寛解が観察されているが、急性前骨髄球性白血病などの他のものでは、PCR陽性は再発を予測する。ここでもまた、これは、特異的ＰＣＲ試験の感度および臨床的有意性に対する閾値に関連し得る。 残存する悪性細胞は、第二の遺伝的変化の欠如または利得のために、再発に寄与する可能性を欠いている休眠状態にある可能性がある17。 いくつかの疾患では、より成熟した細胞への部分的な分化が起こり得、これらの細胞は増殖する可能性を欠いている可能性がある。 ＭＲＤは、免疫サーベイランス下にあり得るか、またはｍｒｄ細胞は、それらを疾患再発に無関係にするアポトーシス期にある。 高感度PCR試験は細胞形態を保存しないため、これらの異なる設定でどの細胞がMRDと相関するかは不明である。
複合同時形態学的および細胞遺伝学的マルチパラメトリック分析のためのDuet™システムは、MRD検出の関連性を開示するのに役立ついくつかの利点 このシステムは、独自の細胞遺伝学的または免疫表現型を有する小さな細胞サブセットのために、多数の細胞（スライドあたり約150000細胞）を自動的に検 小さい人口の検出のための感受性は高められます。 一連の希釈実験では、雌細胞集団における雄細胞の検出感度が1:50000よりも高いことが示されているが、この力価の特異性が限られているため、1:10000と1:50000の間で最良の検出が行われる（付録参照）。 患者１（最後の分析）および患者２からの骨髄試料の分析に見られるように、Ｄｕｅｔｔｍシステムは、日常的な魚によって検出されないＸ Ｙ受容細胞の非常に小 魚の定量的精度は、観察された頻度とスコアリングされた細胞の数に依存し、より多くの細胞をスコアリングすることによって改善される。18このような多数のセルのスコアリングは、手動FISHでは実用的ではありませんが、Duet™オートマチックシステムは、明視野顕微鏡では10000セル/分、蛍光顕微鏡では2000-10000セル/hをスキャンすることができるため、迅速かつ効率的なスキャンと感度の向上の必要性を支持しています。
高感度試験は、しばしば特異性の低下と偽陽性率の比較的高いことと関連している。 標準的な魚の偽陽性の記録と調査の非特異的なハイブリダイゼーションが原因で起こるかもしれません。 染色体転座に対する偽陽性スコアリングは、ランダムな空間的関連および光学的融合のために起こり得る。18Duet™システムは、検索された集団内の細胞の形態を同定することによって特異性を潜在的に改善することができる。 小さい集団のしかし均一Duet™の形態学的な出現の魚の陽性の検出は、肯定的な細胞が異なった、無関係な系統の内で分散するときより本当の陽性であ 非特異的キメラ試験によるＭＲＤの検出の特異性も改善される可能性がある。 上記のように、レシピエント細胞は、悪性クローンに属することができ（患者１のように）、正常な造血細胞（患者３、ＳＴＩ５ ７ １での処置後の患者１）または非造血／間質細胞（骨芽細胞、患者２のような）であり得る。 Duet™システムは形態学的な出現によってこれらの選択間の微分を可能にする。 我々は、患者1と二つの追加の患者（データは示されていない）の分析では、芽球または未熟細胞内のレシピエント特性（例えば、異性細胞遺伝学など）の同定は、あからさまな再発を予測し、数週間から数ヶ月でそれに先行することを示している。 患者1では、別々の魚の分析は、小さなXYレシピエント集団（0.6％）と、両方の魚の分析の偽陽性率内で考えることができる小さなBCR/ABL陽性集団（0.8％）を開示した。 しかし、Duet™システムは、XY受容細胞の大部分が芽球（および同じ細胞に対する2回目のFISH試験でもBCR/ABL陽性）であり、したがって患者が再発する運命にあ 成熟した造血細胞内の小さなレシピエント集団の同定は、再発を予測しない可能性があります。 3人の追加の患者（データは示されていない）において、我々は、成熟した形態を有する小さなレシピエント集団の存在下での連続的寛解を文書化した。 より長いフォローアップの大規模な調査は悪性のクローンのための他の独特なマーカーがない患者の残りの宿主細胞の形態と再発危険間の連合を確認す
このシステムは比較的操作が簡単で、ほとんどが自動であり、ターンアウト時間とコストは標準的なFISHやPCRなどのキメリズムやMRD検出のための他のシ システムのハードウェアおよびキット以外では、大規模な実験室で容易に入手できる標準的な装置のみが必要です（付録参照）。
近年、異なる細胞サブセット内のキメリズムの研究が関心と人気を集めています。19,20これは、非骨髄破壊性移植後に最も重要である。2いくつかのグループによって、Tリンパ球内の完全なキメリズムがGVLの誘導に必要であることが示されているため、この細胞サブセット内のMCは、特に積極的で急速に成長する悪性腫瘍の再発リスクの増加と関連している可能性がある。2,19細胞サブセットのキメラ試験は、そのプロセス中にいくつかの細胞を失う理論的な可能性を持つ細胞の面倒で時間のかかる選別を必要とする。 付録に記載されているように、Duet™分析用のスライドの調製は、細胞集団の喪失または減少を引き起こさない。 Duet™システムはリンパ球および他の細胞サブセットを見つけるのにmggによって汚されるスライドを使用し、またこれらの細胞を見つけるのにimmunocytochemical汚れを（反CD3モノクローナル抗体のような）使用することができる。 第二段階では、魚は性の不一致の移植のキメリズムのテストのために適用することができます。 患者3のケースプレゼンテーションは、システムが非骨髄破壊移植後の患者におけるキメリズムに従うために使用された方法を示し、シクロスポリン離脱後の完全なキメリズムへの変換は、GVHDとGVT応答の発生を予測した。
本報告書は、骨髄移植後のDuet™の使用に焦点を当てていますが、他にも多くの意味がある可能性があります。 このシステムはまた、BCR/ABL融合（患者1に見られるように）などのユニークな細胞遺伝学的または免疫表現型マーカーを保有し、標準的な化学療法後の再発リスクとその形態を相関させる細胞および系統を研究するのに役立つ可能性がある。 これは、異なる悪性腫瘍におけるMRDの性質を開示するのに役立ち、MRD検出が常に再発を予測するとは限らない理由を明らかにするのに役立ち得る。 特定の設定では、小さなドナー細胞集団またはマイクロキメリズムが求められ得る。 例えば、固形臓器移植後に検出された全身リンパ造血マイクロキメリズムは、移植された臓器への耐性を予測し、免疫抑制療法を指示する可能性があ臍帯血同種移植片を汚染する小さな母体集団も同様の方法で検出される可能性があり、GVHDの移植後のリスクに影響を及ぼす可能性がある。
結論として、悪性腫瘍またはレシピエント関連マーカーを有する小さな細胞集団の形態素解析を追加することにより、Duet™システムはキメリズムおよびMRD検査の精度を向上させ、その臨床的意義を描写することができる。 このシステムは、より大規模な試験でさらに研究するメリットがあります。