5650人の無症候性女性における高リスクヒトパピローマウイルスの検出のためのCobas4800システムの適用

要約

高リスクパピローマウイルス（HR-HPV）検査と細胞診 人口ベースのHR-HPV調査では、テストの自動化が非常に必要です。 Cobas4800HPVの試験制度は同時にHPV16、HPV18および他の12のプールされたHR-HPVの遺伝子型を検出できる十分に自動化された試金である。 このシステムはいくつかの国のHR-HPVのスクリーニングのために用いられました;しかし、中国の大きい人口のそのような適用は文書化されていません。 本研究では、中国南部の地域から5650無症候性女性の合計から収集された子宮頸部細胞診標本におけるHR-HPVを検出するためにCobas4800HPVテストシステムを採用 我々は、以下を報告した：（1）HR-HPVの14遺伝子型の有病率は12.96％であった;（2）HR-HPV感染を有するもののために、2.25％がHPV16、0.50％HPV18、プールされた12HPV型の9.15％、および複数のHPV感染のための1.06％; そして(3)異なる年齢層の間でHR-HPV有病率に有意差はなかった。 HPV16およびHPV18はCobas4800HPVの試験制度のような十分に自動化された試金がこの試金がHPV16およびHPV18を同時に検出できるのでこれらの地域の人口ベースのHR-HPV

1. はじめに

ヒトパピローマウイルス(HPV)は、パピローマウイルス科の二本鎖DNAウイルスです。 同定されているHPVの200以上の遺伝子型があり、その中で15 (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68, 73, および82）は子宮頸癌と非常に関連付けられています。 子宮頸がんは、世界中の女性で4番目に一般的ながんであり、中国の女性で6番目に一般的ながんです。 子宮頸がんの負担を軽減するためには、浸潤性がんに進行する可能性のある子宮頸部病変の早期同定が最も重要です。 子宮頸部細胞診は、子宮頸がんの予防に重要な役割を果たしています。 HPV検査を細胞診に追加すると、高悪性度の子宮頸部病変の検出が増加するため、高リスクHPV（HR-HPV）のスクリーニングを細胞診に組み込むことが推奨され、疾患の検出を改善し、スクリーニング間隔の長さを増加させることができる。

これまでに、HPV遺伝子型決定および検出のための様々な方法が報告されている。 母集団ベースのスクリーニングでは、自動化は大量のサンプルを短時間で処理し、手動操作で発生する可能性のあるヒューマンエラーを低減する能力を有 Ｃｏｂａｓ４ ８ ０ ０ＨＰＶ試験システム（Ｒｏｃｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃ．、Rotkreuz、スイス連邦共和国）は、十分に自動化されて、同時に合計14HR-HPVのタイプを検出するように設計されている:それぞれHPV16、HPV18、および12のプールされたHR-HPVの(31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, および６ ８）。 このシステムはHR-HPVのスクリーニングのための米国の食品医薬品局によって承認された。 Cobas4800HPVの試験制度は2部、すなわちから成っている。 核酸精製およびＰＣＲ試料ピペッティングの自動化のために使用されるＣｏｂａｓ ｘ４ ８ ０装置、および自動リアルタイムＰＣＲ増幅およびその後の型特異的ハイブリダイゼーションのためのＣｏｂａｓ ｚ４ ８ ０分析装置を含む。 HR-HPVテストのためのCobas4800システムの使用がいくつかの国で報告されたが、中国の大きい人口のそのような適用は文書化されていない。 本研究では、Cobas4800HPVテストシステムを採用し、合計5650人の無症候性女性から収集した子宮頸部細胞診標本におけるHR-HPVを検出しました。

2. メソッド

この研究は、伝統的な中国医学の中山病院の医学研究レビュー委員会によって承認されました。 すべての参加者からインフォームドコンセントを得た。

2.1. 子宮頸部サンプル収集

20-65歳の無症候性女性が、この研究のために2018年1月から2018年12月までに登録され、試験費用は研究対象またはその雇用主 包含基準には、20歳以上であること、妊娠していないこと、無傷の子宮を有すること、性的に活発であること、または性的活動の歴史を有することが含ま すべての被験者は、子宮頸部サンプリングの前に48時間膣薬、膣避妊薬、または潤滑剤を使用しないことを知らされた。 子宮頸部細胞診標本は、Cervex-Brush Combiデバイス（Rovers Medical Devices）を使用して以下のように収集されました：デバイスの子宮頸部サンプリング部分を子宮頸部管に挿入し、側毛が外頸部に完全に接触することを可能にし、デバイスを時計回りに完全に回転させた。 回収後、回収された細胞を有するデバイスを、直ちに、PreservCyt溶液を含有するバイアル（Hologic Inc.、ベッドフォード、マサチューセッツ州、米国）と激しく渦巻いた。 試料を、以下に記載するように、ＨＰＶ ＤＮＡ検出のために使用した。

2.2. Ｃｏｂａｓ４ ８ ０ ０ＨＰＶ Ｔｅｓｔ Ｓｙｓｔｅｍ＜５ ８ ０ ２＞＜６ ４ ０ １＞溶解緩衝液、洗浄緩衝液、溶出緩衝液、ＨＰＶ陽性および陰性対照キット、および他のすべての試薬を使用して、Ｒｏｃｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃから購入した。 各サンプルは、細胞の妥当性を監視するための内部対照β-グロビンを有し、各実行には、HPV陽性および陰性対照のセットが含まれていた。 ＤＮＡ抽出および精製は、製造業者の説明書に従って、Ｃｏｂａｓ ｘ４ ８ ０装置を用いて行った。 簡単に説明すると、PreservCyt溶液試料をボルテックスし、試料担体上に置き、試薬、例えば、溶解緩衝液、洗浄緩衝液、および溶出緩衝液を、それぞれの試薬貯蔵担体中に サンプルおよび試薬のローディングの後で、DNAの準備は自動的に完了し、最終的なDNAプロダクトはmicrowellの版に集められました。 続いて、DNAを含んでいるmicrowellの版はCobas z480の検光子で手動で密封され、荷を積まれ、拡大およびハイブリダイゼーションは自動的に完了した。

2.3. ０（ＩＢＭ Ｃｏｒｐ．，Ａｒｍｏｎｋ，ＮＹ，ＵＳＡ）を用いて、統計分析を行った。 Ε2検定は、カテゴリ変数を評価するために使用されました。 すべての統計的検定は2面であり、0.05未満の値は統計的に有意であると考えられた。

3. 結果

平均年齢の20-65歳の合計5650人の無症候性女性が研究要件を満たし、この研究に含まれました。 これらの参加者の732(12.96%)HR-HPV陽性として検出された127(2.25%)HPV16感染、28(0.50%)HPV18、517(9.15%)プール12HPV型、60(1.06%)複数HPV感染(HPV16HPV18と混合、HPV16 12プール型、HPV18 12プール型、hpv18 12プール型、hpv18 12プール型、hpv18 12プール型、hpv18 12プール型、hpv18 12プール型、hpv18 12プール型、hpv18 12プール型、hpv18 12プール型、hpv18 12プール型、hpv18 12プール型、hpv18 12プール型、hpv18 12プール型、hpv18 12プール型、またはhpv16とhpv18および12のプールタイプの混合)表1。

年齢に応じて、参加者は4つのグループに分かれていました：20-30、31-40、41-50、および>51歳。 表2に示すように、31-40年のグループは、15.32％の最も高いHR-HPV感染率を有し、次いで>50年、41-50年、および20-30年のグループが続いたが、これらのグループの感染率の間で統計的有意性は観察されなかった。

4. ディスカッション

本研究では、Cobas4800システムを使用して5650無症候性女性におけるHR-HPVを検出し、以下を発見した：（1）HR-HPVの14遺伝子型の有病率は12.96％であった;（2）732HR-HPV陽性女性の2.25％がHPV16に対して陽性、0.50％がHPV18に対して9.15％がプールされた12HPVタイプに対して陽性であった。多数hpvの伝染のための1.06%; そして(3)異なる年齢層の間でHR-HPV有病率に有意差はなかった。

Abbott Molecular Inc.のリアルタイム高リスクHPVテストの両方。 （Ｄｅｓ Ｐｌａｉｎｅｓ、ＩＬ、ＵＳＡ）およびＣｏｂａｓ４ ８ ０ ０ＨＰＶ試験システムは、臨床的に検証され、ＨＲ−ＨＰＶの検出のための完全に自動化されたＰＣＲベースのアッセイである。 これらの2つのアッセイの利点の1つは、HPV16とHPV18を同時に検出して区別できることであり、hpv16とHPV18は世界的に子宮頸がんの約70％を占めるため、子宮頸がんスクリーニングにとって重要である。 少数の調査は臨床サンプルのHR-HPVの検出のこれらの2つの試金を比較しました。 パクら 365の頚部綿棒の標本をテストし、実時間危険度が高いHPVテストがCobas4800システムの感受性そして特定性が91.7%および97.0%、それぞれだった間、99.2%の特定性と78.3%の感受性を示したことを報告した。 Cuzick et al. 6000人の女性をスクリーニングし、16.0％がCobas4800システムによってHR-HPV陽性であることが検出され、13.4％がリアルタイム高リスクHPVテストによってHR-HPV陽性であることが検出されたことを明らかにした。 これらのデータはCobas4800システムがより大きい検出の感受性を所有していることを示す。

HR-HPV DNAの検出のためのいくつかの臨床的に検証された分子システムは、2016年に世界保健機関によってManual Integrating HPV Testing in子宮頸癌Screening Programs-A Manual for Program Managers(https://www.paho.org/hq/dmdocuments/2016/manual-VPH-English—FINAL-version.pdf)に含まれています。 これらのテストはハイブリダイゼーションベースの試金、すなわち、雑種の捕獲2技術およびCareHPVテスト、およびPCRベースの試金、例えばから成っています。、Cobas HPVテスト、Abbottの実時間危険度が高いHPVテスト、Cervista HPV HRテストおよびBD HPVの試金。 すべてのPCRベースの試金はハイブリダイゼーションベースの試金がない間、DNAの分離を要求します。 すべての方法のうち、Cervista HPV HRテストは6-7時間かかり、Abbott RealTime High Risk HPV assayは6-8時間かかりますが、これは同じ日に”見て治療する”という目標を達成しない可 対照的に、Cobas4800システムを含むすべてのrestメソッドは、しかし、患者が一度の訪問で”見て、治療”を完了するのに適した、約5時間の最大実行時間を必要と

世界的に、HR-HPVの有病率は大陸から大陸に変化しています。 中国では、HR-HPV有病率の調査のために、異なる方法が使用されている。 呉他 １ ３種類のプールされたタイプ（ＨＰＶ１ ６）のＨＲ−ＨＰＶの検出のために、Ｈｙｂｒｉｄ Ｃａｐｔｕｒｅ２アッセイ（Ｑｉａｇｅｎ，Ｈｉｌｄｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いた。, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, そして68）4215人の女性の合計で17-54歳の中国の5つの異なる地理的地域から、HR-HPVの有病率が12.4％であることを発見しました。 Ｗｕ ｅ ｔ ａ ｌ． 、Ｚｈａｏ ｅ ｔ ａ ｌ． その15を発見しました。中国北部の地域の1274人の女性の2％がHR-HPV陽性であった。 Chen et al. HPVジェノタイピングキット（Yaneng Biotechnology Limited Corp.、深セン、中国）を採用し、中国南東部から961,029歳の女性のためのHPVテストの合計16-83歳のために、16.61％のHR-HPV感染率を明らかにした。 Jing et al. 中国南部出身の18歳から75歳の78,355人の女性にHPV-DNA検査の質量分析法を適用し、<7.3％のHR-HPV有病率を報告した。 これらの研究は、中国人女性の約10〜15％のHR-HPV感染率を示しており、これは私たちの発見と一致しています。 しかし，本研究で使用した方法は，以前の調査で使用した方法と比較して簡単で手間がかからなかった。

中国で実施されたサンプルサイズが最も大きい二つの研究は、年齢層間のHR-HPV有病率を比較しました。 Zengら。 遡及的に分析671,163Hpvテストは、ハイブリッドキャプチャ2法を使用して2007年から2014年に行われ、36の最高のHR-HPV有病率を実証しました。9％の年齢層の<20年一方、HR-HPV陽性率20-30、30-40、および40-50年の年齢層のそれぞれ24.4％、19.7％、および19.9％であった。 Ｃｈｅｎらによって実施された最大の試料サイズ（９ ６ １，０ ２ ９試料）を有するＨ Ｒ−ＨＰＶ試験。 また、HR-HPVの有病率は20歳以上<の年齢層で最も高い（22.3％）が、20-30歳、30-40歳、40-50歳の年齢層ではそれぞれ16.8％、15.2％、15.9％であった。 これらの研究は、20-30年のグループでは30-40および40-50年のグループよりもわずかに高い有病率を明らかにし、これは20-30年のグループで最も低いHR-HPV有病率を観察したため、私たちの結果とは対照的である。 (1)最近の若い女性は、健康教育プログラム、特に電子機器を使用したオンラインプログラムへのアクセスが増えており、(2)若い女性は衛生と性的健康

HPV16は、北部（北京、河南、山西、新疆）、南東部（上海、浙江省）、中国南部（広東省）の女性の子宮頸部サンプルに見られる最も一般的なタイプのHR-HPVであり、陽性率は1.5-3.6％であり、これは中国南部の被験者で観察されたHPV16感染率2.25％と一致している。 HPV16は子宮頸癌のおよそ50%に全体的に責任があります。 中国の子宮頸がん患者におけるHR-HPV遺伝子型分布に関する情報はまだ限られているが、Li et al. 中国西部からの2309人の子宮頸がん患者（78.7％）のうち1818人がHPV16陽性であり、これらの患者の約90％がHPV16およびHPV18陽性であったことが報告されている。 HPV16およびHPV18の53.2％の感染率は、中国南東部の福建省からの326人の子宮頸癌患者でも示された。 これらのデータは、HPV16およびHPV18が、これらの地域の子宮頸がん患者に見られる優勢なHPV型であることを示している。 Hpv16およびHPV18を同時に検出し、区別できるCobas4800HPVの試験制度のような十分に自動化された試金はHPV16およびHPV18伝染の支配がある地域の人口ベースのHR-HPV

データの入手可能性

この研究の調査結果を支持するために使用されたデータは、要求に応じて対応する著者から入手可能です。

利益相反

著者は、利益相反がないことを宣言しています。

著者の貢献

SW、XH、QP、およびLZは参加者を募集し、サンプルを収集し、テストを行った。 SWとJZが記事を書いた。 FMは文献をレビューし、統計分析を行った。 JZは研究を設計し、データを分析し、最終的に原稿を承認しました。