テキサス州獣医診断研究所、テキサスA&M獣医医学診断研究所、TVMDLは、毎年数十万のサンプルを検査しています。 しかし、毎年の鹿狩りの季節の瀬戸際に、慢性消耗性疾患、CWD、テストの需要が増加するにつれて、テスト番号が急増し始めます。
慢性消耗病とは何ですか？
CWDは、いくつかのcervid種に影響を与える進行性神経疾患である。 CWD感受性の種は、シロ尾鹿、クロ尾鹿、ラバ鹿、ヘラジカ、赤鹿、トナカイ、シカとムースです。 1967年に初めて報告されて以来、25の州とカナダの三つの州で捕獲されたと自由範囲のcervid種の両方で文書化されています。
CWDは、”ゾンビ鹿の病気”の報告が浮上し、様々なメディアに広がったことから、近年注目を集めています。 Cwdに罹患した動物は死んでいないので、キャッチーですが、「ゾンビ鹿病」は実際には誤った名称です。 一度罹患すると、感染した動物が臨床徴候を示し始めるのに2〜4年かかることがあり、これは病気が進行するにつれて「ゾンビのような」行動を模倣す 影響を受けた動物は、体重減少、よだれ、つまずき、昏迷などの徴候を示す。 この臨床徴候の組み合わせは、病気の実際の名前を造語して、「無駄になる」ように見える動物で最高潮に達する。
牛の海綿状脳症、BSE、羊やヤギのスクレイピーと同様に、CWDは自然に発生する伝染性海綿状脳症、TSE、またはプリオン病です。 プリオンは異常なタンパク質であり、破壊することは非常に困難です。 感染すると、プリオンは最初に動物のリンパ節に影響を与え、体を通って広がった後、最終的に脳に感染します。
2012年、Cwdはテキサス州でHueco山脈の放し飼いのラバシカで初めて発見されました。 それ以来、この病気は、ラバシカ、ホワイトテールディカ、ヘラジカの西テキサス州およびパンハンドル地域で検出され続けています。
テキサス州のCWDの歴史は他の州に比べて短かったが、州の機関が病気をコントロールしようとするにつれて診断検査は増加し続けている。 テキサス州では、TVMDLはCWDのテストに承認された唯一の実験室です。
CWD提出者：彼らは誰ですか？
昨年、TVMDLは約26,500のCWDテストを実施しました。 試験の総数のうち、ほぼ半分が10月から12月まで行われました。 CWDの提出のこの増加は、テキサス州の鹿狩りの季節と一致しています。
ハンターは、Cwdの普及を軽減することを目的としたテキサス州公園野生生物局、TPWD、プログラムのために、鹿のシーズン中に特定のガイドラインを遵守しなけ たとえば、cwd検疫ゾーンで鹿が殺された場合、サンプルを収集し、cwdテストのために提出する必要があります。 サンプル収集は、ハンターチェックステーション、鹿加工施設、時には剥製師で行われます。
CWDテスト要求は、Tpwdやテキサス動物衛生委員会、TAHC、鹿飼育員などの州機関によって提出されています。 TVMDLは、CWDのような病気の広がりを追跡するための継続的な努力を支援するために、これらの機関や鹿産業にサービスを提供しています。
病気を検出する
実験室で一度、TVMDLは二つの方法のいずれかを介してサンプルをテストします：酵素結合免疫吸着アッセイ、ELISA、または免疫組織化学、IHC。 どちらの検査法も、鹿のリンパ節またはobexのいずれかから採取された組織を必要とする。
ELISAテスト
最も要求された方法はELISAテストです。 この方法は、防腐剤に固定された組織とは対照的に新鮮な組織を使用するため、より敏感な選択肢である。 サンプルの調製時間を除いて、プロセス全体は、典型的には約三時間かかります。 サンプルがTVMDLの血清学セクションに到着すると、3つのフェーズの最初の段階が開始されます：サンプル準備。
サンプル調製中に、リンパ節および/またはobex組織の正確な体積および解剖学的位置を切断し、独自の粉砕チューブに配置する。 管はティッシュを溶かし、テストの第2段階、浄化のために準備するホモジナイザーの器械に置かれます。
精製段階は半自動化されています。 液体の処理の器械はサンプルの処理から始まります。 このプロセスは、プロテイナーゼKを使用して正常なプリオンを消化し、いずれかが存在する場合は、病気の原因となるプリオンを残します。 その後、精製プロセスの液体最終生成物を遠心分離してペレットを形成する。 餌は二度目扱われ、次に薄くなります。 ペレットはその後、テストの最終段階に進み、CWDプリオンが存在するかどうかを判断します。
検出はELISA検査プロセスの最終段階です。 この段階では、希釈された試料ペレットをサンドイッチＥＬＩＳＡを用いて試験する。 サンドイッチELISAは、特定の抗原、この場合はCWDプリオンの濃度を決定するために2層の抗体を使用する。 色変更の基質はサンプルのCWDのプリオンの存在の視覚表示器としてプロセスの間に加えられます。 サンプルが著しい色変化を起こす場合、それは「初期反応器」IRとみなされ、再試験されます。 再試験後にまだCWDプリオンの存在を示すIRサンプルは、米国農務省–動物および植物健康検査サービス、USDA-APHIS、National Veterinary Services Laboratoryに転送されます。
IHCテスト
TVMDLの第二のCWDテストオプションであるIHCは、固定または保存された組織を使用します。 組織がTVMDLに新鮮に到着した場合、または十分に固定されていない場合は、検査の準備が整うまで組織をホルマリンで固定する時間を可能にするために、
十分に固定されると、組織は個別にラベルされたプラスチックカセットに入れられます。 カセットは、組織が約13時間処理される以下のステップに必要である。 この間、組織は脱水され、すべての水はパラフィンワックスで置換され、組織の細胞構造を維持する。
加工後、組織をパラフィンワックス型に埋め込み、ミクロトームを使用して切断する準備をします。 この器械は人間の毛髪の繊維より薄い5ミクロンの厚いセクションにワックスのティッシュのブロックを切ります。
組織の薄い部分はガラススライドに取り付けられている。 一晩乾燥した後、ガラススライドを染色のために調製する。 スライドはパラフィンを取除き、抗原結合場所が汚損プロセスの間に利用できることを保障するために扱われます。 このプロセスは、抗プリオン分子を陽性組織中のCWD抗原に結合し、次いで赤色色原体をその分子に結合することによって、組織中のCWD抗原を同定する。
この半自動染色プロセスには、手作業で2時間、自動化された4時間の合計約6時間がかかります。 この時間枠の間に、3つの汚損の器械は90のガラススライドを汚すことができます。 染色が完了すると、すべてのスライドがカバースリップされ、顕微鏡的にCWDの存在のために各スライドを検査するTVMDL病理学者に与えられる。
ELISA試験法と同様に、cwdを有する疑いがあるサンプルは、確認試験と最終診断のためにアイオワ州エイムズの国立獣医サービス研究所に送られます。
TVMDLの違い
米国の他の研究所ではCWDテストを提供していますが、TVMDLはテキサス州の鹿業界の個人への献身を通じて離れています。 代理店は、労働関係や個人的な接続を確立するために、他の州の機関や鹿のブリーダーと緊密に連携しています。
TVMDLでのCWDテストの詳細については、以下を参照してくださいtvmdl.tamu.edu または1-888-646-5623で大学駅の実験室を呼びなさい。