背景：慢性リンパ球性白血病（CLL）は、軽鎖制限、CD5+、CD19+、dim CD20、CD23+、CD43+、CD200+、CD10-およびCd79B-からなる古典的な免疫表現型を有する。 これは正常なB細胞および他のリンパ増殖性障害（Lpd）と区別されます。 これらの抗原を標的とする抗体は、B細胞LpdのワークアップのためにEuroflow consortiumによって開発された2つの8色フローサイトメトリパネルに含まれています。 これらの抗体を1つの10色のパネルに組み合わせることは、より費用対効果が高くなります。 さらに、新しいCLL療法は深い寛解を誘導することができ、白血球10,000個あたり1個以上の残存白血病細胞を有すると定義される最小残存疾患（MRD）を測定 Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｉｔｉａｔｉｖｅ ｏ ｎ ＣＬＬ（ＥＲＩＣ）によって確立されたＭＲＤ測定のための現在の国際標準化されたアプローチは、ＣＤ３、ＣＤ５、ＣＤ１ ９、ＣＤ２ ０、ＣＤ２ ２、ＣＤ４ ３、Ｃｄ７ ９ＢおよびＣＤ８ １を標的とする抗体 しかしながら、これらの抗体−蛍光色素の組み合わせは、Ｅｕｒｏｆｌｏｗ診断パネルによって使用されるものとは異なる。 従ってMRDのテストの実行を考慮する実験室は3つのパネル（2つの診断および1つのMRD）のための抗体を購入する必要があります。 我々は、Euroflow8色リンパ球スクリーニング管（LST）をCD200およびCD23を含むように拡張し、CLLを1つの10色管で0.01％の低いレベルで検出できるようにした。 この研究の目標は、この新しいパネルを実装する際の潜在的なコスト削減を決定し、それがMRDを検出するのに十分敏感であるかどうかを判断するこ
方法：2018年4月から2019年3月までに改良型10色LST管（凍結乾燥したMLST1）で分析したサンプル数を計算し、標準的な2管Euroflow法と比較して、この方法でlpdおよ また、液体抗体を使用して上記のパネル（MLST2）のバージョンを作成し、結果の一般化性を高め、CD38をCD43に置き換えて、MRD検出が改善されたかどうかを確認しました（下記のパネルを参照）。 MRDのテストのために、私達は白血病細胞のさまざまな集中で60MRDのサンプルを作り出すのに24の異なった患者からのCLLのサンプルを使用しました。 サンプルは、0.1％、0.01％および0.001％のおおよその濃度で正常白血球の懸濁液にCLL細胞をスパイクすることによって調製した。 各試料をアリコートし、３つのパネル：ＥＲＩＣ、ＭＬＳＴ１およびＭＬＳＴ２で染色した。 データは、Ｂ Ｄ Ｆａｃｓｃａｎｔｏ ＩＩまたはＢ Ｄ Ｆａｃｓａｒｉａ Ｆｕｓｉｏｎを使用して取得し、Ｂ Ｄ Ｆａｃｓｄｉｖａソフトウェアを使用して分析した。 ＣＬＬ細胞は、キーマーカーの差動発現に基づいて同定され、ＭＲＤは、ＣＬＬ細胞／全白血球の数として計算された。 MRD陽性は≤0.01％と定義した。 パネル間の一致は、Ｂｌａｎｄ−Ａｌｔｍａｎプロット法を用いて評価した。 また，ＭＲＤ陽性を同定する際のパネル間の一致率を計算した。
結果：1年間で、mlst1は474サンプルに対して行われ、このうち220サンプルはLPDであり、123（56％）は古典的なCLL表現型であり、さらなる試験の必要性を排除した。 これにより、476の抗体アリコットの純節約になった。 ＭＲＤ評価のために、ＣＤ５およびＣＤ２ ０の差動発現は、ＭＬＳＴ１およびＭＬＳＴ２を使用してＣＬＬを正常Ｂ細胞から区別する際の最も重要な寄与因子であった。 我々は、mLSTパネルを使用してゲートすることは困難であることが判明した非定型免疫表現型（薄暗いCD5、明るいCD20）と一つのCLLケースを同定した。 ＭｌｓｔパネルとＥＲＩＣパネルとのＭＲＤ結果に合意があった。 定量の限界を超える値については、95％の一致の限界は、ERIC対MLST1の比較では±0.3369log、ERIC対MLST2の比較では±0.3485logであった。 したがって、パネル間のＭＲＤレベルの変動は、ＭＲＤが指数スケールで測定されるので臨床的に許容されると考えられた時間の大部分の２倍未満であった。 ERICパネルとmlst1は、MRD陽性対MRD陰性サンプルを区別する際に88.3％の一致を持っていた。 ERICパネルとmlst2の間の合意は93.3％でした。
結論：CLLの診断とMRD測定の両方に修正された10色のLSTパネルを使用することは可能です。 利点は抗体との高められた精通度および潜在的な原価節約であり、MRDをより多くのcytometry実験室にとって入手しやすくさせる。 通常のCD5陽性と薄暗いCD20のない非定型CLLケースは、LSTパネルを使用してゲートすることは非常に困難です。 これらの場合、ＥＲＩＣパネルは、ｃｄ２ ２、Ｃｄ７ ９Ｂ、ＣＤ８ １およびＣＤ４ ３が依然として悪性リンパ球と正常リンパ球との間の分離を提供し得るので、明らかに優れている。
Bazinet:BD Biosciences:Other:このプロジェクトで使用される抗体のかなりの量を無償で提供しました。. ウェーバー：テバカナダイノベーション: 雇用。 Gimmig:BDバイオサイエンス:雇用. Johnson:Lundbeck:雇用、Honoraria、事業体の取締役会または諮問委員会の会員、その他:旅行料、贈答品、その他、研究資金、Merck:コンサルタント業、Honoraria;Roche:コンサルタント業、雇用、Honoraria、事業体の取締役会ま: このプロジェクトで使用されている抗体のかなりの割合を無償で提供しました。;Bms:コンサルタント業、Honoraria;シアトルの遺伝学:Honoraria。