Conversione di colesterolo in pregnenolone è mediata dal colesterolo catena laterale di clivaggio (SCC), enzima, P450scc. L’attività SCC carente causa l’iperplasia surrenalica lipoide congenita (anche conosciuta come deficit di desmolasi 20,22), un difetto potenzialmente letale nella sintesi di tutti gli ormoni steroidei. Per sondare eventuali difetti genetici che causano questa malattia abbiamo sintetizzato quattro oligodeossiribonucleotidi contenenti da 63 a 72 basi corrispondenti a porzioni della sequenza di DNA complementare bovino (cDNA) per P450scc. Gli oligonucleotidi bovini sono stati etichettati e utilizzati direttamente per sondare le macchie meridionali del normale DNA genomico umano, rivelando un modello che indica che esiste un singolo gene P450scc nel genoma umano. L’ibridazione a macchie settentrionali di normale RNA messaggero surrenale umano e bovino indica che l’RNA messaggero P450scc è lungo circa 2,0 kilobasi in entrambe le specie. Ibridazioni degli oligonucleotidi al DNA genomico da tre pazienti non correlati con deficit di SCC non hanno rilevato una delezione nel gene P450scc umano. Gli oligonucleotidi di sequenza bovina sono stati quindi utilizzati per isolare un clone di cDNA P450scc umano. Il frammento di cDNA P450scc isolato contiene 818 basi che codificano 239 aminoacidi della proteina, il segnale di terminazione di traduzione e 98 basi della regione non tradotta 3′. La sequenza di questa metà carbossi-terminale della proteina umana P450scc è omologa al 72% con la sequenza bovina e contiene un amminoacido aggiuntivo non trovato nel P450scc bovino; le sequenze nucleotidiche umane e bovine sono omologhe all ‘ 81%. La ripetizione degli studi di blotting del DNA genomico con la sonda cDNA ha dato gli stessi risultati ottenuti con le sonde oligonucleotide di sequenza bovina, confermando che la carenza di SCC non è dovuta a una delezione nelle regioni del P450scc che si ibridano con le sonde. Gli oligonucleotidi di sequenza eterologa lunghi e sintetizzati chimicamente contenenti un numero sconosciuto di disallineamenti di base con sequenze umane possono quindi essere utilizzati per studiare i geni umani in modo che l’accesso a un cDNA non sia necessario per tali studi.