Abstract
Abbiamo utilizzato un sistema di coltura clonale in due fasi per dimostrare inequivocabilmente che le singole cellule progenitrici linfoemopoietiche primitive hanno la capacità di differenziazione lungo il lignaggio mieloide o B-linfoide. Le cellule del midollo murino altamente arricchite sono state placcate individualmente in coltura mediante micromanipolazione in presenza di un mezzo condizionato dalle cellule della milza stimolate da mitogeno, eritropoietina, fattore di acciaio (SF) e interleuchina (IL) 7. Il quarantacinque per cento delle singole cellule formava colonie primarie che esprimevano più lignaggi emopoietici. Quando le aliquote delle singole colonie sono state ripiantate in colture secondarie di metilcellulosa contenenti SF e IL-7, il 41% delle colonie primarie ha dato origine a colonie linfocitarie. Le cellule delle colonie linfocitarie erano blast-like e B220+, sIg -, Mac-1 -, Gr-1 -, Ly-1-, L3T4 -, Ly-2-e CD3 -. Trenta al 70% delle cellule erano Thy-1+. l’mRNA a catena mu è stato rilevato nella maggior parte delle cellule mediante ibridazione in situ con una sonda RNA antisenso. Quando le colonie linfocitarie derivate da una singola cellula sono state raggruppate e iniettate individualmente in topi scid, l’IgM di tipo donatore era misurabile nel siero di topi e le spleens contenevano cellule B di tipo donatore. Abbiamo quindi effettuato uno screening iniziale dei fattori di crescita per identificare i fattori di crescita che potrebbero sostituire il terreno condizionato dalle cellule della milza stimolate da mitogeno pokeweed nella coltura primaria. Le combinazioni di due fattori che includevano SF più IL-6, IL-11 o fattore stimolante le colonie granulocitarie sono state tutte efficaci nella coltura primaria nel mantenimento del potenziale linfoide B. È interessante notare che IL-3 non potrebbe né sostituire né agire sinergicamente con SF per supportare il potenziale linfoide delle colture primarie. Le nostre osservazioni dimostrano che molti progenitori primitivi precedentemente ritenuti mieloidi-impegnati possiedono anche potenziale B-linfoide. Questo sistema di coltura dovrebbe rivelarsi prezioso per la delucidazione dei meccanismi che regolano le prime fasi della linfoemopoiesi.