I prodotti farmaceutici dell’anticorpo monoclonale (mAb) hanno attirato l’interesse significativo dovuto la loro forte potenza terapeutica e specificità per trattare le malattie infiammatorie, oncologiche ed autoimmuni. A causa della loro complessità intrinseca dovuta a un gran numero di micro-eterogeneità, c’è una necessità cruciale di metodi analitici per fornire una caratterizzazione completa e approfondita delle molecole candidate.
Una pletora di tecniche analitiche è fornita da Creative Biolabs per la caratterizzazione di anticorpi e la valutazione dell’omogeneità in tutte le fasi della scoperta di mAb, dello sviluppo preclinico e clinico. Qui, introduciamo l’applicazione della messa a fuoco isoelettrica capillare (CIEF) per l’analisi dell’eterogeneità della carica anticorpale. È ampiamente usato per la caratterizzazione di MAB terapeutici. Determinando il pI delle isoforme di carica mAb, cIEF fornisce informazioni cruciali per stabilire identità, purezza, modifiche post-traduzionali e stabilità.
Introduzione al cIEF
Il cIEF si basa sul principio dell’elettroforesi capillare su gel. L’elettroforesi è una tecnica di separazione basata sulla velocità differenziale di movimento delle specie cariche in un campo elettrico, verso l’elettrodo di carica opposta. Per separare le molecole basate sul punto isoelettrico (pI), viene stabilito un gradiente di pH all’interno del gel utilizzando miscele di anfoliti. Sotto il campo elettrico, le molecole migrano lungo il campo elettrico fino a raggiungere il pH corrispondente al pI, dove le cariche positive e negative nelle molecole sono bilanciate. L’assorbimento UV su tutto il capillare viene misurato durante tutta la separazione, consentendo un’osservazione in tempo reale e una quantificazione finale.
Fig.1 Principio di messa a fuoco isoelettrica. (Pergande, 2017)
cIEF for Charge Heterogeneity Characterization
I MAB sono suscettibili di varie modifiche post-traduzionali (ad es., glicosilazione, fosforilazione, ossidazione e ritaglio di lisina), portando a varianti di carica. Alcune di queste varianti di carica possono avere un possibile effetto sull’attività biologica e sulla sicurezza della molecola in vari gradi. Ad esempio, il profilo di glicosilazione di MABS influenza fortemente l’attività biologica della proteina. Di conseguenza, il monitoraggio di routine dell’eterogeneità della carica mAb è parte integrante di qualsiasi piano di gestione della qualità e del ciclo di vita del prodotto. È anche uno degli aspetti analitici più importanti dello sviluppo biosimilare e degli studi di comparabilità. Come tecnica di separazione basata sulla carica, cIEF è un potente strumento per caratterizzare il profilo di carica del mAbs, perché diverse varianti di carica possono essere distinte in base al loro pI utilizzando la calibrazione interna. Poiché il cIEF offre riproducibilità e specificità molto elevate, questo è uno degli strumenti più diffusi per l’analisi mAb.
Caratteristiche dei Nostri Servizi
- Caratterizzazione della dimensione e carica varianti di intatto e ridotto mAbs con cIEF
- l’Analisi della carica varianti di mAbs utilizzando un approccio ortogonale
- cIEF separazione seguita dalla spettrometria di massa (MS) analisi
- servizi Personalizzati secondo le esigenze specifiche
Creative Biolabs offre anche una vasta gamma di anticorpi funzione di analisi per aiutare a comprendere gli effetti di carica varianti sull’attività dell’anticorpo e proprietà, come ad esempio le funzioni effettrici, FcRn, e con l’antigene affinità e PK, chiarendo così le relazioni struttura-funzione. Se siete interessati al nostro servizio, vi preghiamo di contattarci per discutere le vostre esigenze.