cromosoma walking

L’isolamento sequenziale di cloni che trasportano frammenti di restrizione sovrapposti per coprire un segmento di cromosoma che è più grande di quello che può essere trasportato in un fago o in un vettore cosmico. La tecnica è generalmente necessaria per isolare un locus di interesse per il quale non è disponibile alcuna sonda ma che è noto per essere collegato a un gene che è stato identificato e clonato. Questa sonda viene utilizzata per schermare una libreria del genoma. Di conseguenza, tutti i frammenti contenenti il gene marcatore possono essere selezionati e sequenziati. I frammenti vengono quindi allineati e quei segmenti più lontani dal gene marcatore in entrambe le direzioni vengono succlonati per il passaggio successivo. Queste sonde sono utilizzate per riscrivere la libreria del genoma per selezionare nuove collezioni di sequenze sovrapposte. Quando il processo viene ripetuto, vengono identificate le sequenze nucleotidiche di aree sempre più lontane dal gene marcatore e alla fine si incontrerà il luogo di interesse. Se è disponibile un’aberrazione cromosomica che sposta un particolare gene che può servire come marcatore molecolare in un’altra posizione sul cromosoma o su un altro cromosoma, allora la camminata cromosomica può essere spostata in un’altra posizione nel genoma. L’uso di aberrazioni cromosomiche in esperimenti di questo tipo è indicato come salto cromosomico. Vedi Cronologia, 1978, Bender, Spierer e Hogness.

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