Clazakizumab in ritardo rigetto anticorpo-mediato: protocollo di studio di uno studio pilota randomizzato controllato

Studio di progettazione e di prova di flusso

Questa prospettiva bi-centro di studio (Università Medica di Vienna e Charité University Medicine di Berlino) è un investigatore-ha avviato la fase 2 del progetto pilota di prova progettato per valutare la sicurezza, la tollerabilità e l’efficacia (valutazione preliminare) di umanizzato anti-IL-6 anticorpo monoclonale clazakizumab in ritardo ABMR. Lo sponsor di questo studio non commerciale è l’Università di Medicina di Vienna. Oltre alla progettazione dello studio, lo sponsor effettuerà la sperimentazione (in collaborazione con partner di ricerca), essendo responsabile di tutti i suoi aspetti scientifici, etici, normativi e legali. Il finanziatore (Vitaeris Inc., Vancouver, Canada) ha fissato condizioni di finanziamento e fornirà finanziamenti esterni.

Ipotizziamo che la somministrazione di clazakizumab in pazienti sottoposti a trapianto di rene in aggiunta all’immunosoppressione basale avrà un profilo di sicurezza accettabile, come riportato in precedenza per i pazienti con malattie autoimmuni. Inoltre, ipotizziamo che la somministrazione ripetuta di clazakizumab contrasterà l’infiammazione e le lesioni tissutali nell’ABMR in corso, in particolare l’infiammazione nel microcircolo, l’alloresponse delle cellule B specifiche dell’antigene leucocitario umano (HLA) e la lesione cronica da innesto alloanticorpo.

Un diagramma di flusso del processo è mostrato in Fig. 1. Un programma di eventi è fornito in Fig. 2, e una lista di controllo firmata SPIRIT 2013 è allegata come file supplementare (file aggiuntivo 1). Lo studio si compone di due sotto-parti successive. In una prima parte (parte A), i partecipanti saranno randomizzati a ricevere clazakizumab (iniezione sottocutanea da 25 mg) o placebo per un periodo di 12 settimane (somministrazione di clazakizumab/placebo al giorno 0 e dopo quattro e otto settimane). Dopo 11 settimane, i pazienti saranno sottoposti ad una prima biopsia di trapianto di follow-up. Alla settimana 12, la parte A sarà completata e la sequenza di randomizzazione sarà sbloccata per una prima analisi dei dati. Gli obiettivi primari di questa parte dello studio sono valutare la sicurezza e la tollerabilità di un breve ciclo di trattamento. Inoltre, la parte A consentirà una prima valutazione preliminare dell’impatto di clazakizumab sull’infiammazione associata all’ABMR rilevata nel sangue periferico e nell’allotrapianto di organi di rigetto. Dopo la settimana 12, tutti i pazienti dello studio entreranno in una parte dello studio in aperto (parte B) e riceveranno 25 mg di clazakizumab a intervalli di quattro settimane fino alla visita di fine studio dopo 52 settimane. Dopo 51 settimane, i pazienti saranno sottoposti a una seconda biopsia del protocollo. I principali obiettivi della parte B sono valutare la sicurezza e la tollerabilità di un periodo prolungato di trattamento con clazakizumab e l’impatto a lungo termine di questo anticorpo sull’evoluzione dell’ABMR, dei biomarcatori associati al rigetto e della funzione e sopravvivenza dell’allotrapianto renale per un periodo di 12 mesi.

anche se lo studio non è stato progettato per indagare qualsiasi effetto di rimbalzo dopo l’interruzione del trattamento con clazakizumab, dopo l’ultima visita di studio, tutti i partecipanti allo studio saranno monitorati per eventuali segni di peggioramento di trapianto renale funzione regolari visite di follow-up ogni quattro settimane per cinque mesi dopo l’ultima dose (5 × emivita) in ambulatori.

Prevediamo il completamento del reclutamento dei pazienti dopo 18 mesi e la conclusione dello studio dopo 30 mesi.

Partecipanti

Includeremo i pazienti sottoposti a trapianto di rene con DSA anti-HLA circolante e le caratteristiche bioptiche di ABMR in una biopsia indicativa eseguita per un risultato positivo di DSA post-trapianto e/o un lento deterioramento della funzione allotrapianto e/o proteinuria. Altri criteri chiave di inclusione sono un innesto funzionante a ≥ 365 giorni dopo il trapianto e una velocità di filtrazione glomerulare stimata (eGFR) > 30 mL/min/1.73 m2. Questa soglia di eGFR è stata scelta per evitare l’inclusione di trapianti con un alto grado di danno cronico irreversibile (per i pazienti con lesioni da trapianto molto avanzate non ci si può più aspettare un beneficio terapeutico sostenibile). I criteri di inclusione ed esclusione sono elencati nella tabella 1.

Procedura di randomizzazione

Per la parte A, i pazienti saranno randomizzati 1:1 in uno dei due bracci dello studio (clazakizumab versus placebo) utilizzando una piattaforma di randomizzazione basata sul web (https://www.meduniwien.ac.at/randomizer). La randomizzazione sarà stratificata per sito di studio e secondo le categorie ABMR (active ABMR versus chronic/active ABMR) per garantire un equilibrio di pazienti con questi due tipi istologici tra i due bracci.

Calcolo della dimensione del campione

Per questo studio pilota, non è stata eseguita una stima esatta della dimensione del campione, poiché la dimensione dell’effetto è sconosciuta (non ci sono informazioni preliminari su cui basare una dimensione del campione). L’endpoint primario sarà la sicurezza e la tollerabilità. Una valutazione preliminare dei risultati di efficacia in 20 pazienti sottoposti a trapianto di rene con ABMR tardivo fornirà i primi dati sull’effetto di clazakizumab sugli endpoint clinici, morfologici, immunologici e molecolari. I rispettivi risultati (ad esempio il confronto tra clazakizumab e placebo per quanto riguarda i punteggi di infiammazione del microcircolo e rigetto molecolare), inclusa una valutazione della variabilità, possono fornire una valida base per la progettazione di studi futuri.

Interventi

Clazakizumab o placebo saranno somministrati come singola iniezione sottocutanea di 1 mL ciascuno da personale qualificato in cieco dello studio. Clazakizumab sarà fornito in flaconcini monodose (25 mg/mL) per iniezione e fornito da Vitaeris Inc. Il farmaco placebo sarà somministrato con soluzione salina normale per iniezione e sarà fornito dallo sperimentatore. Nella parte A dello studio, clazakizumab o placebo saranno somministrati in dosi di quattro settimane come singola iniezione SC il giorno 0 e alle settimane 4 e 8. Durante la parte B, tutti i pazienti riceveranno quattro dosi settimanali di clazakizumab a partire dalla settimana 12, quindi a settimane 16, 20, 24, 28, 32, 36, 40, 44, e 48 (fine della visita di studio alla settimana 52).

Durante lo studio saranno vietati i seguenti farmaci: rituximab; eculizumab; inibitori del proteasoma; immunoglobuline per via endovenosa; scambio plasmatico o immunoadsorption; e altri farmaci/trattamenti sperimentali inclusi anticorpi monoclonali anti-IL-6/IL-6R disponibili in commercio come tocilizumab. Durante lo studio saranno consentiti i seguenti farmaci concomitanti: inibitori della calcineurina (tacrolimus o ciclosporina A); bersaglio mammifero dell’inibitore della rapamicina (mTOR) (everolimus o rapamicina); micofenolato mofetile (MMF)/micofenolato sodico; e corticosteroidi a basse dosi (prednisolone ≤ 5 mg/die).

Immunosoppressione basale

Al momento della diagnosi di ABMR tardivo, tutti i destinatari (entrambi i bracci nella parte A) in terapia con inibitori della calcineurina o un inibitore mTOR, senza azatioprina o MMF / acido micofenolico, riceveranno MMF (inizialmente 2 × 500 mg al giorno; aumento graduale a 2 × 1000 mg al giorno se tollerato) per evitare la sotto-immunosoppressione. Il nostro protocollo non consente dosi di MMF > 2000 mg al giorno. Vi è una mancanza di dati solidi sul dosaggio ottimale di MMF in ABMR; una preoccupazione a questo proposito può essere che dosi più elevate di MMF potrebbero aumentare notevolmente la tossicità ematologica del blocco di IL-6 (ad esempio leucopenia). Tacrolimus sarà aggiustato per raggiungere livelli di valle target compresi tra 5-10 ng / mL, CyA a 80-120 ng / mL. I destinatari che in precedenza erano stati svezzati fuori steroidi riceveranno prednisolone a bassa dose (5 mg/die). Per ogni partecipante, sarà documentato il tipo di immunosoppressione e le sue modifiche durante il periodo di studio.

Accecante e sbloccante

La randomizzazione (parte A) sarà condotta nei due siti di studio da farmacisti non accecati, che sono anche responsabili della preparazione di clazakizumab e placebo (0,9% di soluzione salina). Per mantenere e garantire l’accecamento e per evitare il potenziale sblocco dell’allocazione del gruppo, le preparazioni di farmaci reali e placebo saranno identiche per colore, aspetto e odore. I partecipanti, ricercatori, medici di interazione personale, e lo studio, i partecipanti saranno a conoscenza del gruppo di assegnazione; il team medico non sarà in grado di accedere all’area di sicurezza di allocazione elenco (limitato accesso protetto da password) fino a che l’ultimo paziente ha completato la parte A. Prematura apertura può essere necessario nei casi di emergenze mediche, condizioni mediche gravi, in cui i partecipanti non possono essere trattati adeguatamente, a meno che il personale medico sa allocato condizioni di trattamento, o segnalazioni di sospette imprevisti eventi avversi gravi (Sae). Lo sblocco può, se necessario, essere richiesto dal data and Safety Monitoring board (DSMB).

Parametri del risultato

Le misure del risultato primario e secondario sono dettagliate nella tabella 2. Un programma di eventi è fornito in Fig. 2. Le misure primarie di outcome sono la sicurezza e la tollerabilità di clazakizumab, valutate durante tutto il periodo di studio (19 visite fino alla visita EOS a 52 settimane, giorno 0, settimane 1, 2, 3, 4, 8, 11, 12, 16, 20, 24, 28, 32, 36, 40, 44, 48, 51, e 52). Secondo i principi statistici della Conferenza internazionale sull’armonizzazione (ICH), la sicurezza riguarda il rischio medico per i partecipanti, valutato da test di laboratorio, segni vitali e AEs, mentre la tollerabilità descrive il grado in cui AEs palese può essere tollerato dall’individuo (come riflesso dal tasso di abbandono dovuto a una mancanza di tollerabilità). Gli endpoint secondari sono la farmacocinetica (PK; concentrazione di clazakizumab) e la farmacodinamica (PD) di clazakizumab, valutate mediante misurazioni seriali della proteina C-reattiva (CRP). La soppressione di questa proteina di fase acuta derivata dagli epatociti è stata dimostrata in precedenza come un prezioso marcatore surrogato dell’efficacia anti-IL-6 . Per la valutazione preliminare dell’efficacia, i biomarcatori derivati dal sangue di ABMR (caratteristiche DSA, citochine e marcatori di attivazione/lesione endoteliale, modelli di sottopopolazioni di leucociti del sangue periferico) saranno valutati al giorno 0 e dopo 12 e 52 settimane. Inoltre, studieremo i trascritti IL-6/IL-6R (prima dell’inizio dello studio e alle settimane 12 e 52), per chiarire se e in che misura la neutralizzazione di IL-6 modula l’espressione genica. L’effetto immunosoppressivo complessivo di clazakizumab sarà valutato monitorando il carico di TTV nel plasma.

Lo studio comprende due biopsie di protocollo, uno dei primi biopsia dopo 11 settimane (prima della fine della parte A). principalmente per sezionare l’effetto di il-6 blocco sulla microcircolazione infiammazione in diretto confronto con il placebo, e un ritardo di biopsia dopo 51 settimane (prima della fine della parte B) valutare l’effetto di clazakizumab sulla progressione del danno cronico (misura di trapianto glomerulopathy, interstiziale fibrosi e atrofia tubulare). Le due biopsie saranno eseguite ciascuna poco (una settimana) prima della fine delle rispettive parti dello studio, per evitare interferenze con analisi farmacocinetiche dettagliate programmate rispettivamente per le settimane 12 e 52. Tutte le biopsie saranno valutate per modelli di espressione genica tipici di ABMR (ATAGC, Alberta University, Edmonton; lettura principale: punteggio ABMR molecolare). Inoltre, la funzionalità renale, l’escrezione di proteine, il fallimento dell’innesto e la morte saranno valutati durante l’intero periodo di studio. Infine, valuteremo l’impatto del blocco di IL-6 (rispetto al placebo) sulla PK del pantoprazolo come farmaco sonda del metabolismo epatico dipendente dal citocromo (CYP). Pantoprazolo è stato scelto, perché le singole dosi sono ben tollerate e l’attività del CYP2C19 è sensibile alla fenoconversione durante l’infiammazione . Al giorno 0 e alle settimane 12 e 52, il pantoprazolo sarà somministrato alla dose di 20 mg per via endovenosa e i livelli di farmaco saranno determinati ogni ora per un periodo di 6 ore. Nei pazienti in terapia continua con inibitori della pompa protonica, il trattamento orale verrà sospeso per tre giorni prima del test farmacocinetico e ripreso un giorno dopo.

Valutazione della sicurezza e segnalazione di eventi avversi

In qualsiasi situazione clinica, comprese le emergenze, sarà fornita un’adeguata assistenza medica. La valutazione della sicurezza comprenderà un attento monitoraggio di tutti gli eventi avversi (AES), comprese le SAEs. Non sono disponibili dati sulla sicurezza e sulla tollerabilità di clazakizumab nelle popolazioni trapiantate. Da studi precedenti, tuttavia, i risultati ottenuti in > 1000 pazienti/partecipanti trattati con clazakizumab sono disponibili per la valutazione dei modelli di sicurezza. La tabella 3 fornisce un riassunto delle AEs riportate per clazakizumab alla dose di 25 mg/mese in due studi rappresentativi di fase 2 condotti in pazienti con artrite.

Analisi intermedie

Questo studio sarà monitorato da un DSMB indipendente per valutare la sicurezza e la qualità dei dati. Per rilevare tempestivamente le principali differenze tra i gruppi in termini di aspetti di sicurezza, i membri del consiglio saranno incaricati di eseguire analisi intermedie dopo che 10 e 20 pazienti hanno finalizzato la parte A dello studio. Il DSMB analizzerà i risultati registrati di AEs e safety lab in relazione alla sequenza di randomizzazione.

Il DSMB può considerare di interrompere la sperimentazione se il modello complessivo di SAE correlate o le modifiche nei risultati del laboratorio di sicurezza supportano fortemente un segnale di sicurezza importante. Parte A: se sei partecipanti presentano livelli di SAES correlati (sicuramente e possibilmente) (common toxicity criteria > Grado 3 o gravi / clinicamente significativi ) e/o livelli sostanzialmente elevati di parametri epatici (alanina aminotransferasi , aspartato aminotransferasi e/o bilirubina > 3× limite superiore della norma) o neutropenia (< 0,5 G / L), il DSMB sbloccherà i risultati di sicurezza. Se cinque o tutti i partecipanti sono nel gruppo clazakizumab, lo studio verrà interrotto. Allo stesso modo, se sei SAE correlate e/o anomalie sostanziali degli enzimi epatici o della conta dei neutrofili si verificano nella stessa classificazione per sistemi e organi, il DSMB sbloccherà queste SAE e se cinque o tutte le SAE sono nel gruppo clazakizumab, lo studio verrà interrotto. Parte B (tutti i partecipanti al trattamento con clazakizumab): se ≥ 10 individui presentano SAE correlate al farmaco o si verificano SAE correlate ≥ 10 nella stessa classificazione per sistemi e organi, lo studio sarà interrotto (il numero totale di SAE correlate deve includere anche le SAE correlate che si verificano negli individui trattati con clazakizumab durante la parte A).

Per questo studio pilota, non sono definite definizioni statistiche esatte dei criteri per la conclusione prematura dello studio.

Controllo e garanzia della qualità

Le procedure di monitoraggio comprenderanno visite regolari predefinite nei due siti di studio. Gli investigatori concederanno l’accesso a tutti i documenti di origine, compresi i moduli di relazione del caso e altri documenti relativi al protocollo. La riservatezza dei partecipanti sarà mantenuta in accordo con le normative locali. Il monitor designato contatterà e visiterà regolarmente lo sperimentatore e avrà accesso a tutti i documenti di origine necessari per verificare le voci nei moduli di report del caso e altri documenti relativi al protocollo, a condizione che la riservatezza del partecipante sia mantenuta in accordo con le normative locali. Sarà responsabilità del monitor ispezionare il modulo di relazione del caso a intervalli regolari in base al piano di monitoraggio durante tutto lo studio, per verificare l’aderenza al protocollo e la completezza, la coerenza e l’accuratezza dei dati inseriti. Gli standard di monitoraggio richiedono una verifica completa per la presenza del consenso informato, l’adesione ai criteri di inclusione/esclusione, la documentazione di AE e la registrazione dei principali endpoint di efficacia, sicurezza e tollerabilità.

Metodologia

Funzionalità renale

L’eGFR sarà valutato utilizzando l’equazione Chronic Kidney Disease Epidemiology Collaboration (CKD-EPI) (mL/min/1, 73m2). L’escrezione di proteine sarà documentata come rapporto proteine / creatinina nelle urine spot (mg / g).

Biopsie di trapianto

Le biopsie di indice e di follow-up saranno eseguite utilizzando tecniche percutanee a ultrasuoni (1-2 core per biopsia, ago da 16 gauge). Dopo la biopsia, i pazienti saranno monitorati attentamente per 5-8 h per eventuali complicazioni (misurazioni seriali della pressione arteriosa, monitoraggio dell’ematuria, controllo dell’emoglobina 4 h dopo la biopsia). L’istomorfologia sarà valutata su sezioni incorporate in paraffina applicando la metodologia standard. Per la colorazione immunoistochimica C4d, useremo un anticorpo policlonale anti-C4d (BI-RC4D, Biomedica, Vienna, Austria) e la colorazione immunoistochimica minima (punteggio C4d Banff ≥ 1) lungo i capillari peritubulari sarà considerata positiva. Le biopsie saranno valutate anche mediante microscopia elettronica per il rilevamento di lesioni del microcircolo. I risultati morfologici saranno valutati da esperti patologi del trapianto renale in cieco per l’assegnazione del trattamento. Inoltre, le biopsie saranno analizzate utilizzando un metodo molecolare accuratamente validato (MMDx™), come proposto dallo schema Banff . Per ogni biopsia, una porzione di 3 mm di un nucleo verrà posizionata immediatamente in RNAlater, conservata a-20 °C e spedita a temperatura ambiente o ghiaccio secco all’Alberta Transplant Applied Genomics Centre (ATAGC, University of Alberta, Edmonton, AB, Canada) per l’analisi dell’array genico. I punteggi molecolari basati su classificatori basati sulla lesione derivati dall’apprendimento automatico relativi al rifiuto (ABMRpm, TCMRt, all Rejection) verranno generati utilizzando il set di riferimento di Edmonton di > 1200 biopsie. Inoltre, i modelli di espressione genica saranno valutati utilizzando analisi archetipiche imparziali . Per la classificazione di ABMR, tutti i risultati della biopsia saranno analizzati nel contesto dei risultati molecolari. Le categorie ABMR e le singole lesioni morfologiche saranno definite e valutate in seguito ai recenti aggiornamenti della classificazione Banff .

Rilevamento di anticorpi HLA

I sieri saranno inattivati dal calore per escludere artefatti in vitro dipendenti dal complemento (fenomeno prozone) e sottoposti a test a flusso di perle a singolo antigene (test a singolo antigene LABscreen; One Lambda, Canoga Park, CA, USA). I risultati dei test saranno documentati come intensità medie di fluorescenza; un’intensità media di fluorescenza (IFM) > 1000 sarà considerata positiva. La specificità del donatore sarà definita in base ai risultati della tipizzazione HLA del donatore e del ricevente a bassa o alta risoluzione. I livelli di anticorpi reattivi al pannello virtuale saranno calcolati utilizzando strumenti software specifici (http://www.eurotransplant.org/cms/).

Citochine e marcatori di attivazione/lesione endoteliale

I sieri raccolti alle settimane 0, 12 e 52 saranno analizzati per IL-6, IL-6R solubile e marcatori che riflettono l’infiammazione o l’attivazione e la lesione endoteliale utilizzando matrici di perline su una piattaforma Luminex o una tecnologia di analisi immunoassorbente legata agli enzimi. In parallelo, i campioni di urina saranno testati utilizzando la stessa metodologia. Per l’analisi basata su Luminex dei biomarcatori del siero e delle urine utilizzeremo immunodosaggi umani ProcartaPlex Simplex seguendo il protocollo del produttore (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA). I test saranno eseguiti su uno strumento Luminex 200. I pannelli di perline includeranno combinazioni di diversi marcatori che potenzialmente riflettono l’entità dell’infiammazione e della lesione, comprese le chemochine (ad esempio CXCL9 e CXCL10) e i marcatori endoteliali (ad esempio VCAM-1 e E-selectin), rispettivamente. I risultati urinari saranno normalizzati alle concentrazioni di creatinina urinaria.

Sottopopolazioni leucocitarie

I meccanismi sottostanti dell’ABMR, in particolare il ruolo dei sottoinsiemi periferici delle cellule T e B, non sono completamente chiariti. Pertanto, la fenotipizzazione immunitaria prospettica è un approccio promettente per chiarire ulteriormente l’impatto del blocco di IL-6 sulle vie di regolazione immunitaria. Per il monitoraggio delle popolazioni leucocitarie (sub-)utilizzeremo pannelli di monitoraggio immunitario riproducibili per la fenotipizzazione. Recentemente, il consorzio internazionale “The ONE study” ha progettato un pannello standardizzato (DuraClone®, Beckman Coulter, Marsiglia, Francia) per la fenotipizzazione immunitaria basata sulla citometria a flusso che ha dimostrato risultati robusti . Nei kit di monitoraggio immunitario DuraClone, le provette di dosaggio predefinite contengono uno strato con il pannello anticorpale essiccato pronto all’uso. Fino a 10 diversi anticorpi monoclonali per provetta consentono l’identificazione di sottopopolazioni di leucociti (ad esempio cellule T, cellule B, cellule natural killer) presenti in campioni di sangue intero.

Analisi dell’espressione genica

Per l’analisi dell’espressione genica, 5 mL di sangue saranno raccolti in provette di RNA del sangue PAXgene e conservati a – 80 °C fino all’analisi. Dopo lo scongelamento, l’RNA sarà isolato e trascritto in DNA complementare (cDNA). La quantità di RNA / cDNA di IL-6 o IL-6R sarà determinata mediante reazione a catena quantitativa in tempo reale della polimerasi (PCR) utilizzando il test TaqMan.

Torque Teno virus (TTV) quantificazione

TTV DNA sarà quantificato in campioni di plasma memorizzati utilizzando PCR in tempo reale, come descritto in precedenza .

Pantoprazolo PK

Cromatografia liquida la spettrometria di massa tandem sarà applicata per valutare i livelli e la cinetica del pantoprazolo .

Metodi statistici

Le analisi saranno condotte secondo il principio intention-to-treat. I dati continui saranno presentati come media e deviazione standard (SD) o intervallo mediano e interquartile (IQR), a seconda dei casi, e variabili categoriali come frequenze assolute e relative. Confronti di gruppo (al basale e dopo tre mesi) per dati continui (i livelli di CRP, eGFR, proteina/creatinina rapporto, i livelli di rifiuto biomarcatori nel siero e nelle urine, IL-6/IL-6R livelli di espressione, anticorpo HLA caratteristiche , morfologiche e / o molecolare (ad es. ABMR punteggio) biopsia punteggi) saranno analizzati utilizzando parametrici (test t) o non-parametrico (Mann–Whitney U test) test, come appropriato. Il test esatto di Fisher verrà utilizzato per confrontare i dati categoriali tra gruppi (presenza di AEs, categorie ABMR morfologiche/molecolari e rigetto acuto comprovato da biopsia al basale e dopo tre mesi). Il trapianto e la sopravvivenza del paziente o la sopravvivenza libera da AE saranno valutati utilizzando l’analisi Kaplan-Meier e il test Mantel Cox Log–rank sarà applicato per i confronti di gruppo. Per i dati accoppiati (ad esempio punteggi di biopsia morfologica e molecolare dopo 3 vs 12 mesi nella coorte complessiva), verrà utilizzato il test t accoppiato o il test di Wilcoxon. Un valore P a due lati < 0.05 sarà considerato statisticamente significativo. L’analisi della farmacocinetica di clazakizumab e pantoprazolo includerà una descrizione dell’evoluzione temporale della concentrazione anticorpale/farmaco. Emivita di eliminazione, Tmax, Cmax, clearance e volume di distribuzione saranno calcolati utilizzando software standard. Per l’analisi statistica, IBM SPSS Statistics 24 (IBM Corporation, Armonk, NY, USA) e SAS per Windows (SAS Institute Inc., Cary, NC, USA) sarà utilizzato.

Registrazione allo studio

Lo studio è stato approvato dalle autorità di regolamentazione austriache (Ufficio federale per la sicurezza sanitaria, Agenzia austriaca per la salute e la sicurezza alimentare) e tedesche (Istituto federale per i vaccini e le biomedicine, Istituto Paul-Ehrlich). Lo studio è stato registrato nel database degli studi clinici europei (numero EudraCT: 2017-001604-30; registrazione prospettica) e in un database pubblico di studi clinici (ClinicalTrials.gov NCT03444103; registrazione retrospettiva).