Sebbene la maggior parte del lavoro sulle infezioni da clamidia dei piccoli ruminanti riguardi le pecore, la clamidiosi ha un impatto economico e sulla salute pubblica in numerosi allevamenti di capre in tutto il mondo. Gli aborti da clamidia sono stati segnalati per la prima volta in Germania nel 1959.Successivamente la malattia è stata diagnosticata in Bulgaria, Spagna, Stati Uniti, Francia, India, Giappone, Regno Unito, Ciad, Grecia e Tunisia. In molte aree, da clamidia aborto è la seconda causa di malattie infettive, aborti dopo la brucellosi e la causa principale nella maggior parte dei paesi in cui la brucellosi è controllata
Eziologia
La malattia è causata da un piccolo batterio Gram-negativo, Chlamydia psittaci, che cresce nel citoplasma delle cellule eucariote in un unico ciclo di sviluppo in cui il resistente forma infettiva, i corpi elementari (EB), si alternano con un metabolicamente attivo, camere non-infettive forma reticolare corpi (RB). L’EB si attacca alla membrana della cellula ospite e promuove il proprio endocitosio in un vacuolo limitato a membrana chiamato inclusione, che non si fonde con i lisosomi. Quindi l’EB si trasforma in RB, che si replica per fissione binaria. Dopo diverse divisioni, gli RBS, che riempiono tutta l’inclusione, si trasformano di nuovo in EBs infettivi. Questi EBs vengono rilasciati attraverso la lisi della cellula ospite o l’estrusione dell’inclusione dalla cellula ospite .
Tassonomia
Chlamydia psittaci è una delle quattro specie del genere Chlamydia, che comprende anche Chlamydia trachomatis, Chlamydia pneumoniae e Chlamydia pecorum.
Chlamydia trachomatis e Chlamydia pneumoniae sono entrambi patogeni umani. C. psittaci infetta un’ampia varietà di uccelli, mammiferi e occasionalmente umani e C. pecorum contamina ruminanti, suini e koala. Nelle pecore e capre C. pecorum causa polmonite, congiuntivite e artrite, ma è molto spesso isolato da infezioni intestinali asintomatiche .
Tranne in casi molto rari, i ceppi che inducono l’aborto nelle capre appartengono al sierotipo-1 di C. psittaci, che è anche responsabile di polmonite, congiuntivite e artrite e, talvolta, infezioni intestinali senza segni clinici. La specie C. psittaci è molto eterogenea e prima che comparisse la quarta specie C. pecorum .
Le analisi filogenetiche dei geni rRNA 16S e 23S suggeriscono l’esistenza di nove specie differenziate nelle Chlamydiaceae e portano Everett et al., per proporre la creazione di due nuovi generi Chlamydia e Chlamydophila. Il genere Chlamydia, che corrisponde alla vecchia denominazione Chlamydia trachomatis comprende 3 specie: C. trachomatis (ceppi umani), C suis (ceppi porcini correlati a C. trachomatis isolati da aborti spontanei, infezioni vaginali e pneumoniae) e C. muridarum (ceppi di criceto di topo).
Il genere Chlamydophila raggruppa 6 specie: C. pneumoniae, C. pecorum, C. psittaci (precedenti ceppi aviari di Chlamydia psittaci), C. caviae, l’agente della congiuntivite di inclusione della cavia (GPIC), C. felis (ceppi di C. psittaci che infettano i gatti) e C. abortus (sierotipo classico-1 Chlamydia psittaci ceppi). I risultati sono in accordo con quelli ottenuti attraverso analisi filogenetiche di altri cinque geni codificanti (GroEL, KDO-transferasi, MOMP, proteina ricca di cisteina 60-kDa e lipoproteina ricca di cisteina) e le proprietà biologiche dei ceppi . La restriction length polymorphism analysis (RFLP) del dominio distanziale intergenico ribosomiale dei geni rRNA 16S-23S fornisce un metodo rapido e riproducibile per identificare e classificare i ceppi di clamidia nelle nuove specie . Tuttavia, alcuni memebers della comunità scientifica non sono d’accordo con la proposta di una nuova tassonomia da clamidia, in quanto non tiene conto dell’intero genoma dei batteri.
Segni clinici
La clamidiosi è clinicamente caratterizzata da aborto durante gli ultimi mesi di gravidanza, nati morti o nascite premature di bambini deboli con basso peso alla nascita. Gli aborti si verificano senza precedenti segni clinici specifici anche se alcune capre possono sviluppare tosse persistente senza dispnea, o artrite e cheratocongiuntivite. Nelle infezioni sperimentali, è stata osservata una leggera scarica vaginale il giorno prima dell’aborto su alcune capre . Placente e metrite conservate non sono usuali, anche se sono più frequenti che nelle pecore . Dopo l’aborto, le capre possono recuperare rapidamente o possono presentare scarico marrone dalla vagina. Nelle infezioni sperimentali o in alcune infezioni naturali con un alto tasso di aborti solo il 50% o meno delle capre che hanno abortito, si è ripreso rapidamente mentre la malattia post abortiva nelle pecore è insolita. Ciò potrebbe essere dovuto alle differenze di virulenza tra i ceppi poiché si sa molto poco sui meccanismi di virulenza dei ceppi. Nessuna differenza nella virulenza potrebbe essere mostrata nei modelli murini tra ceppi ovini e caprini, ma il polimorfismo amplificato della lunghezza del frammento (AFLP) ha rivelato differenze genomiche tra ceppi caprini AC1 e sierotipi ovini-1 C. psittaci .
Sebbene abbiamo dimostrato che la manutenzione di capre infette potrebbe causare sires infetti , fino ad ora non è stata descritta alcuna epididimite dovuta a C. psittaci in sires. Ciò è probabilmente dovuto al numero molto piccolo di studi sulla clamidiosi caprina piuttosto che una maggiore suscettibilità di montoni e tori alle infezioni da clamidia.
In un gregge appena infetto il tasso di aborto è grave. Frequentemente il 30% o più, a volte il 90% delle donne incinte può abortire e la produzione di latte può diminuire. L’alto tasso di aborto si osserva per 2 o 3 anni dopo di che la malattia assume una natura ciclica: il 10% delle femmine gravide abortirà ogni anno per diversi anni fino a quando non si verifica un nuovo focolaio e quindi tutti i piccoli abortiranno. L’alto livello di immunità prodotto dopo l’aborto è responsabile dell’evoluzione ciclica della malattia nella mandria: è eccezionale che una capra aborti due volte. Papp e Shewen hanno dimostrato che alcune delle pecore abortite possono essere infettate cronicamente. Gli antigeni chlamydiali e il DNA possono essere rilevati nella vagina, nell’utero e nelle tube uterine durante il periodo peri-ovulatorio delle pecore che hanno abortito. Nessuna ricerca è stata fatta per determinare l’incidenza di infezioni croniche nelle mandrie di capre.
Il feto non mostra una lesione macroscopica specifica. I bambini consegnati vicino al termine possono essere coperti da materiale marrone. Edema diffuso chiaro o macchiato di sangue, fluidi macchiati di sangue nelle cavità addominali e pleuriche e petecchie sulla lingua, nella cavità buccale e sugli zoccoli sono spesso osservati.
Trasmissione della malattia
Infetto fa escreto un gran numero di clamidia nella placenta e fluidi fetali al momento di scherzare e al momento dell’aborto. Alcune capre possono gettare clamidia nei fluidi vaginali da più di due settimane prima dell’aborto a più di due settimane dopo l’aborto. Ciò può spiegare la più alta incidenza di aborto in branchi di capre recentemente infettati, poiché la suscettibilità alle infezioni varia in relazione allo stato fisiologico dell’animale. Le capre in stato di gravidanza inferiore a 100 giorni sono più sensibili di quelle alla fine della gestazione o di quelle sterili. Piccole quantità di clamidia possono anche essere versate nelle urine, nel latte e nelle feci durante diversi giorni dopo l’aborto.
Le giovani capre nate da madri infette possono trattenere l’infezione nella mandria o trasmetterla ad altri allevamenti. L’indagine di un gruppo di 27 yearlings in una mandria infetta durante il loro primo anno di vita ha dimostrato come potrebbero diffondere la malattia non essendo rilevati dalla loro risposta sierologica. Queste giovani capre potrebbero essere divise in 3 gruppi in base alla gestazione/parto. Il primo gruppo kidd normalmente un bambino vivo, il secondo gruppo era sterile o aveva abortito troppo presto in gravidanza per essere rilevato e nel terzo gruppo capre aveva abortito. Gli anticorpi di fissaggio del complemento (CF) dei due primi gruppi sono aumentati fino a raggiungere un massimo (1/80 – 1/160) al momento della riproduzione, quindi i livelli di anticorpi sono diminuiti fino al momento dello scherzo . Il terzo gruppo aveva un titolo anticorpale CF Il ruolo della trasmissione venerea della clamidiosi da parte dei maschi deve ancora essere studiato. Tuttavia, le infezioni genitali in montoni e tori provocano infertilità maschile e sterilità piuttosto che l’aborto nelle femmine. Il ruolo che la malattia svolge nell’infezione intestinale inapparente e la sua influenza nell’epidemiologia dell’aborto da clamidia deve essere esplorato. La recente identificazione di marcatori molecolari per ceppi intestinali caprini consentirebbe tali studi.
Diagnosi
La diagnosi viene solitamente eseguita mediante la rilevazione di batteri in strisci o impressione della placenta combinata con l’analisi sierologica di almeno dieci campioni di sieri.
La colorazione della clamidia con i metodi Stamp, Gimenez o Machiavello è rapida e può essere intrapresa facilmente nella maggior parte dei laboratori, ma la sua interpretazione è spesso complicata in quanto richiede una persona esperta per differenziare la clamidia da Brucella e Coxiella. Immunofluorescenza utilizzando coniugati di immunoglobuline contrassegnati con isotiocianato etichettato fluorescente, aumenta la sensibilità e la specificità del rilevamento della clamidia in strisci o impressioni di placenta.
La presenza di antigeni chlamydiali nella placenta macinata o nei tamponi vaginali campionati subito dopo l’aborto può essere rilevata da ELISA con kit diagnostici sviluppati per le infezioni umane da C. trachomatis .
Nella medicina umana, la reazione a catena della polimerasi (PCR) o la sua variazione, la reazione a catena della ligasi (LCR) sono considerati i metodi diagnostici più sensibili disponibili per la diagnosi di clamidia. Diversi primer comuni a tutti i tipi di clamidia, come Om1, il gene che codifica per la principale proteina della membrana esterna, o specifici di C. psittaci o C. pecorum o del sierotipo-1 ceppi di C. psittaci sono stati sviluppati per applicazione veterinaria. Ma questa tecnica rimane costosa.
Il test di fissazione del complemento (CFT) è il più utilizzato e considerato il gold standard per la diagnosi sierologica. Tuttavia, CFT non è molto sensibile e non specifico perché il test utilizza un antigene i comune con C. pecorum, che la maggior parte delle capre porto nel loro intestino. Pertanto, le reazioni positive con titoli compresi tra 1:10 e 1: 40 non sono specifiche per l’aborto, ma possono riguardare un’infezione intestinale con C. pecorum. Il test CFT deve essere eseguito preferibilmente 3-6 settimane dopo l’aborto o il parto, quando la risposta anticorpale è al suo livello massimo. Il test CFT non può essere utilizzato per la diagnosi individuale o per rilevare l’infezione nei giovani o nei maschi .
Sono stati intrapresi diversi tentativi per sviluppare tecniche più specifiche, che distinguerebbero tra infezioni da C. psittaci e C. pecorum. Tuttavia, nessuno di questi test era sufficientemente sensibile e specifico. Recentemente, è stato sviluppato un nuovo saggio immunoassorbente indiretto legato all’enzima (ELISA) basato su un antigene ricombinante che esprime una parte di una proteina di 80-90 kDa . Il test reagisce con gli anticorpi sierici suscitati precocemente contro queste proteine della famiglia multigenica altamente immunogeniche . Questo test ha alta sensibilità e alta specificità .
Trattamento
Le tetracicline influenzano la replicazione della clamidia e possono essere efficaci nel prevenire gli aborti. L’iniezione di 20 mg / kg di ossitetraciclina somministrata per via intramuscolare a 105 e 120 giorni di gravidanza può prevenire l’aborto ma non può impedire lo spargimento di clamidia a scherzare.
Vaccinazione
I vaccini uccisi potrebbero ridurre l’incidenza dell’aborto ma non l’escrezione di clamidia allo scherzo. L’aborto induce un’immunità abbastanza forte da resistere alle sfide successive, è stato sviluppato un vaccino vivo costituito da un mutante sensibile alla temperatura dei ceppi di C. psittaci . Le capre sensibili sono state vaccinate prima dell’accoppiamento e non è stata notata alcuna interferenza con la successiva gestazione. Le capre sono state protette contro l’aborto da clamidia e lo spargimento di clamidia a scherzare è stato impedito. Tuttavia, quando tutte le capre in una mandria infetta vengono vaccinate il primo anno e tutti gli animali sostitutivi vengono vaccinati negli anni successivi, potrebbero essere necessari circa 3 anni prima che gli aborti cessino. Ciò è dovuto all’infezione latente nelle capre, capre che erano state infettate prima della vaccinazione ma non avevano abortito. La vaccinazione non cambierà il corso di un’infezione latente. Queste capre possono abortire o possono kid bambino sano o infetto a termine e possono o non possono capannone clamidia. Finché le capre con un’infezione latente sono presenti in una mandria, non è consigliabile interrompere la vaccinazione (altrimenti gli aborti ricomincerebbero), né è possibile vendere animali vaccinati, ad eccezione degli allevatori che vaccinano regolarmente il loro gregge.
Prospettive future
Lo sviluppo di un vaccino, efficiente quanto il vaccino vivo menzionato, che protegga e consenta l’individuazione sierologica delle capre infette in greggi vaccinati, sarebbe molto utile per il controllo della malattia. L’esaurimento dell ‘”antigene specifico per la diagnosi” dal vaccino vivo non è attualmente un’opzione poiché non sono ancora disponibili metodologie genetiche e molecolari adeguate e sembra difficile eliminare questa famiglia di proteine. Per questi motivi, un vaccino acellulare, che protegge dall’aborto e dall’escrezione, sarebbe di interesse. Studi precedenti hanno dimostrato che sia i linfociti T che i linfociti B sono coinvolti nell’immunità protettiva . Nei modelli murini, le cellule T CD8+ (Lyt 2 + nel topo) svolgono un ruolo importante nella protezione dopo il trasferimento delle cellule della milza innescate . Ad oggi, C. gli antigeni e gli epitopi delle cellule T di psittaci sono sconosciuti. Sebbene si debba usare cautela nell’estrapolare i risultati di C. trachomatis a C. psittaci, diversi epitopi delle cellule T sono stati identificati su C. trachomatis major outer membrane protein (MOMP)
Il ruolo degli anticorpi nella prevenzione dell’infezione placentare e fetale da parte di C. psittaci è stato dimostrato nei topi. Il trasferimento passivo di sieri policlonali specifici induce un’immunità significativa anche se inferiore alla protezione mediata dalle cellule T. Anticorpi monoclonali (Mabs) che neutralizzano C. l’infettività psittaci in vitro conferisce una notevole immunità ai topi gravidi dopo la sfida endovenosa poiché l’aborto e la colonizzazione fetale sono eliminati . L’immunità umorale è coinvolta nella protezione. La sua efficacia dipende dalla concentrazione di anticorpi specifici contro l’epitopo appropriato. Tutti i Mab protettivi finora isolati reagiscono con epitopi conformazionali termosensibili situati su un oligomero MOMP .
Quindi, l’oligomero MOMP potrebbe essere un potenziale componente del vaccino . Non è fattibile, tuttavia, per produrre questo antigene per estrazione da clamidia come costo di produzione supererebbe di gran lunga che un agricoltore considererebbe conveniente per un vaccino caprino o ovino. Pertanto, devono essere studiati metodi alternativi di produzione di vaccini.
La generazione di oligomero MOMP ricombinante può essere difficile. Il gene che codifica MOMP, Om1, è ben caratterizzato, ma l’espressione ad alto livello del gene a lunghezza intera da un promotore non regolamentato è tossica per E. coli. Per questo motivo sono state intraprese diverse strategie sperimentali per la generazione degli epitopi protettivi. Abbiamo cercato di imitare gli epitopi protettivi con anticorpi anti-idiotipici monoclonali, o mimotopi peptidici conformazionalmente vincolati, ma nessuno di essi era efficiente. Abbiamo deciso di valutare la vaccinazione di topi con vaccino DNA come vaccinazione DNA con topi protetti dal gene MOMP contro C. trachomatis e tacchini contro C. psittaci . Fino ad ora è stata ottenuta solo una protezione parziale ma ulteriori ricerche (sul gene bersaglio, concentrazione del DNA, via di vaccinazione, ecc.) è necessario sapere se i topi potrebbero essere protetti con un vaccino a DNA in modo efficiente come con il vaccino vivo.