omvandling av kolesterol till pregnenolon medieras av kolesterol sidokedja klyvning (SCC) enzym, p450scc. Bristande SCC-aktivitet orsakar medfödd lipoid adrenal hyperplasi (även känd som 20,22 desmolasbrist), en potentiellt dödlig defekt i syntesen av alla steroidhormoner. För att söka efter möjliga genetiska defekter som orsakar denna sjukdom syntetiserade vi fyra oligodeoxiribonukleotider innehållande 63 till 72 baser motsvarande delar av bovint komplementärt DNA (cDNA) sekvens för P450scc. De bovina oligonukleotiderna märktes och användes direkt för att sondra Södra blottar av normalt humant genomiskt DNA, vilket avslöjar ett mönster som indikerar att det finns en enda P450scc-gen i det mänskliga genomet. Hybridisering till norra blottar av normalt humant och bovint adrenal messenger RNA indikerar att p450scc messenger RNA är cirka 2,0 kilobaser långa i båda arterna. Hybridiseringar av oligonukleotiderna till genomiskt DNA från tre orelaterade patienter med SCC-brist upptäckte inte en deletion i den humana p450scc-genen. Bovinsekvensoligonukleotiderna användes sedan för att isolera en human P450scc cDNA-klon. Det isolerade p450scc cDNA-fragmentet innehåller 818 baser som kodar för 239 aminosyror i proteinet, translationstermineringssignalen och 98 baser i den 3′ oöversatta regionen. Sekvensen för denna karboxiterminala hälft av det humana p450scc-proteinet är 72% homologt med bovinsekvensen och innehåller en ytterligare aminosyra som inte finns i bovin p450scc; de humana och bovina nukleotidsekvenserna är 81% homologa. Upprepning av de genomiska DNA-blottningsstudierna med cDNA-sonden gav samma resultat som erhölls med bovin-sekvensoligonukleotidproberna, vilket bekräftar att SCC-brist inte beror på en deletion i regionerna i p450scc-hybridiseringen med sonderna. Långa, kemiskt syntetiserade heterologa sekvensoligonukleotider innehållande okänt antal basmatchningar med humana sekvenser kan således användas för att studera mänskliga gener så att åtkomst till ett cDNA inte är nödvändigt för sådana studier.