detta förslag addrsses struktur-funktionsförhållande av vitamin K-beroende blodkoagulationsproteiner, med särskild uppmärksamhet på gamma karboxyglutaminsyra. Detta program, som omfattar fyra separata men relaterade projekt, har utvecklats från tidigare arbete som utvecklats under föregående period. I projekt nr 1 kommer struktur-funktionsförhållandet mellan faktor IX och protrombin att studeras. Mutanta former av dessa proteiner, erhållna från patienter med ärftliga strukturella och funktionella abnormiteter hos dessa proteiner, kommer att renas med användning av konformationsspecifika antikroppar, fragmenterade genom proteolys och de mutanta peptiderna sekvenseras. Den molekylära defekten i varje mutantprotein kommer att etableras och korreleras med funktionella defekter. I projekt # 2 kommer det nyupptäckta KC4-blodplättmembranproteinet att karakteriseras fullständigt och lokaliseras till specifika subcellulära organeller. Funktionen och bindningsegenskaperna hos detta protein, uttryckt endast på aktiverade blodplättar, kommer att bestämmas. Projekt # 3 kommer att definiera Gla: s roll i protrombin. En ny modell av GLA -, metall-och membraninteraktion i protrombin med immunokemiska och spektroskopiska metoder kommer att utvärderas. Membranbindningsegenskaperna och gla-fördelningen av en serie partiellt karboxylerade protrombiner bör ge insikt i detta problem. Projekt # 4 är en direkt klinisk tillämpning av våra immunokemiska studier. Med hjälp av antikroppar specifika för det fullständigt karboxylerade protrombinet (NPT) och des-gamma-karboxiprotrombin (APT) fortsätter vi en klinisk prövning för att utvärdera dessa analyser som en förbättrad metod för övervakning av oral antikoagulantbehandling. K-vitaminbrist hos nyfödda och deras mödrar kommer att studeras, med hopp om att utveckla enkla rationella metoder för att eliminera hemorragisk sjukdom hos nyfödda. Vidare kommer analys av KC4-antigenet, specifikt för aktiverade blodplättar, att undersökas som en metod för detektering av pretrombotiskt tillstånd. Dessa grundläggande och kliniska projekt bör bidra till förståelsen av denna grupp av proteiner, tillhandahålla nya metoder för diagnos av prethrombotic state och vitamin K dificiency och utveckla ytterligare data för att motivera användningen av NPT-analysen över protrombintiden avsevärt minska sjukligheten/dödligheten i samband med oral antikoagulationsbehandling.