material och metoder
efter att ha fått skriftligt informerat samtycke från patienter undersökte vi farmakokinetiken vid steady-state För oralt administrerat klonidin i plasma hos 17 gravida kvinnor som fick klonidin under mitten av graviditeten (22-26 veckors graviditet) eller sen graviditet (34-38 veckors graviditet). Sex av dessa kvinnor deltog i moder-och navelsträngsprovsamlingar (arteriella och venösa) vid tidpunkten för leverans för mätning av klonidinkoncentrationer. Gestationsålder baserades på den sista menstruationen eller tidig ultraljud dejting.
Ämnesval. Denna studie godkändes av University of Washington Investigational Review Board. Ämnen var berättigade att delta om de var gravida, 18 år, hade en hematokrit 28% och fick oral klonidin för maternell hypertoni.
Doseringsregim. Oral klonidinbehandling ändrades inte för studieändamål. Doserna varierade från 0,15 till 0,30 mg per dag, givet i uppdelade doser. Varaktigheten av den farmakokinetiska studien var beroende av patientens dosintervall, som varierade från 6 till 12 timmar. i 3 dagar före studien tillhandahölls orala klonidintabletter, från samma tillverkningsparti. Ämnen registrerade tiden för varje dos på en studiekalender. Ämnen tog sin morgon klonidin dos inom 30 min av 8: 00 AM. Efterföljande doser togs inom 30 minuter efter schemalagda administreringstider. På morgonen av den farmakokinetiska studien ombads försökspersonerna att fasta, med undantag av klara vätskor, i 5 timmar före klonidinadministrering till 1 timme efter dosering.
Provsamling. Seriella plasmaprover samlades in vid följande tidpunkter: 0, 0.5, 1, 1.5, 2, 3, 4, 6, 8, 10, och 12 timmar efter dosering eller trunkerad för att motsvara patientens doseringsintervall. Urin samlades in under ett doseringsintervall för att bestämma njurclearance för klonidin och kreatininclearance. Plasmaprover, moder-och navelsträng (arteriell och venös) samlades vid tidpunkten för leverans för kvantifiering av klonidinkoncentrationer. Alla prover lagrades vid -80 kcal C tills provanalys.
Klonidinkoncentrationer. Plasmaklonidinkoncentrationer kvantifierades med användning av en validerad vätskekromatografi/masspektrometri (LC/MS) – analys. I korthet blandades 250 oc plasmaprover med 500 pg intern standard (klonidin-d4) i 500 oc natriumkarbonat (0,1 M) (pH = 9,3) och 3 ml heptan/isoamylalkohol (98,5:1,5). Standarder framställdes genom spiking blank plasma med 0, 12.5, 25, 50, 100, 200, 250, 375, 500, och 750 pg klonidin. Prover skakades på en horisontell skakare i 15 minuter vid rumstemperatur. Efter centrifugering (1500 g i 10 min) frystes proverna på torris och det organiska skiktet dekanterades till ett rent odlingsrör. Två milliliter svavelsyra alikvoter (0,05 M) tillsattes till det organiska skiktet och skakades igen i 15 minuter. Efter centrifugering (1500 g i 10 min) frystes proverna på torris och det organiska skiktet kasserades. En alikvot på 200 oc-L på 29.29% vattenhaltig ammoniumhydroxid tillsattes till det vattenhaltiga skiktet tillsammans med 3 ml heptan/isoamylalkohol (98,5:1,5) och skakades i 15 minuter. Efter centrifugering (1500 g i 10 min) frystes proverna på torris och det organiska skiktet dekanterades till ett rent odlingsrör. Det organiska skiktet indunstades under en ström av kväve vid 40 kg C. återstoden rekonstituerades med 75 kg myrsyra (12 mM)/metanol (60:40), varav 10 kg injicerades på LC/MS-systemet.
urinprover av 250 oc blandades med 250 oc myrsyra (12 mM) och 50 ng av intern standard (klonidin-d4). Standarder framställdes genom spiking blank urin med 0, 1.25, 2.5, 6.25, 12.5, 18.75, respektive 25 ng klonidin. Proverna vortexed, och 1 acbil injicerades på LC/MS.
LC / MS-systemet var en Agilent 1100 MSD (Agilent Technologies, Santa Clara, CA) bestående av binär pump, autosampler, kolonnfack och masspektrometer. Den högpresterande vätskekromatografikolonnen var en Phenomenex Synergi Polar Rp80a, 250 mm 2.0 mm, 4 occurm (Phenomenex, Torrance, CA). Kolonnen bibehölls vid 40 CCG. mobila faskomponenter var 12 mM myrsyra (A) och metanol (B), med en initial flödeshastighet på 0,25 ml/min. Den initiala mobila fasen bibehölls i 1 min och bestod av 40% B för plasmaprover och 35% B för urinprover. Andelen B ökades linjärt under nästa 4 min till 90% för plasma och 60% för urin och hölls sedan konstant i 1 min med en linjär flödesökning till 0,3 ml/min för urin och plasma. För returgradienten minskade sedan andelen B linjärt över 1 min till 40% (plasma) eller 35% (urin), som sedan bibehölls konstant. Flödeshastigheten bibehölls vid 0,3 ml/min i 1 min och minskade sedan linjärt över 1 min till 0,25 ml / min och hölls sedan konstant. Den totala körtiden var 12,5 min. För både plasma-och urinanalyser användes masspektrometern i det positiva elektrosprayläget och ställdes in för selektiv jonövervakning av m/z 230 (klonidin) och m/z 236 (klonidin-d4) med uppehållstid på 289 MSEK för varje jon.
Farmakokinetiska Parametrar. Steady-state farmakokinetiska parametrar bestämdes med användning av standard icke-kompartmentala tekniker. Området under plasmaklonidinkoncentrationstidskurvan över ett doseringsintervall (AUCt) beräknades med hjälp av den linjära trapesformade regeln. Skenbart Oralt clearance (CL/F) beräknades med CL/F = dos/AUCt. Klonidin renal clearance (CLrenal) beräknades med CLrenal = ae,auct, där ae,auct = mängden klonidin som utsöndras oförändrat i urinen under ett doseringsintervall. Kreatininclearance beräknades med CrCl = (Volumeurin (Kreatininineurin) / (Kreatinineserum (Kreatininineserum)). Klonidin renal clearance justerat för glomerulär filtrationshastighet (GFR) beräknades av CLrenal justerat för GFR = CLrenal – fu crcl, där fraktionen obunden i plasma (fu) antogs vara 0,80 (Hulter et al., 1979). I alla våra försökspersoner tillät det relativt korta doseringsintervallet inte exakt uppskattning av klonidinhalveringstiden, vilket tidigare har rapporterats vara 11,1 3,3 och 10,8 2,2 timmar i icke-gravida friska vuxna (Cunningham et al., 1994; Fujimura et al., 1994).
statistik. Våra farmakokinetiska parametrar för klonidin under graviditeten jämfördes med tidigare publicerade parametrar hos friska, icke-gravida volontärer (CL/F, Porchet et al., 1992; Cunningham et al., 1994) (CLrenal, Fujimura et al., 1994). Linjär regression användes för att bestämma korrelationen mellan kreatininclearance och klonidin renal clearance. Oparad Studentens t-test användes för att jämföra de gravida och icke-gravida grupperna. Ett p-värde < 0,05 ansågs vara signifikant. Alla resultat redovisas som medelvärde för S. D. (9926)