Capillaria Ova och diagnos av Trichuris trichiura infektion hos människor genom Kato-Katz Smear, Liberia | Anne Marie

studien

för att bedöma effekten av massläkemedelsadministration med användning av ivermektin och albendazol för eliminering av lymfatisk filariasis på STH-prevalens och intensitet samlade vi avföringsprover under en period av 3 år i 2 olika områden i Foya district (Lofa County) i nordvästra Liberia och i Harper district (Maryland län) i sydöstra Liberia (10). Vi undersökte ett enda avföringsprov per ämne genom mikroskopi (förstoring 200) med dubbla Kato-Katz-utstryk (41 mg Mall). Vi bevarade alikvoter av slumpmässigt utvalda exemplar på FTA-kort (GE Healthcare, Little Chalfont, Storbritannien) eller i Rnalater (ThermoFisher, Waltham, MA, USA) och skickade dem till Washington University School of Medicine (St.Louis, MO, USA) för analys av qPCR. Två erfarna mikroskopister (L. G., A. T. Momolu) undersökte proverna med Kato-Katz-smet i båda studieområdena. För detektion av STH av qPCR, extraherade vi DNA från 100 mg av avföring från 100 mg och testade det som beskrivs av Pilotte et al. (5) med en Quantstudio 6 Flex Thermocycler (Applied Biosystems, Carlsbad, CA, USA) och TaqMan Fast Advanced Mastermix (Applied Biosystems). Vi använde följande primers och sonder för att detektera Schistosoma mansoni DNA: framåt primer 5′-TGTGGAGTCTTGGTTGTT-3′, omvänd primer 5′-CAACATGACTGGGAACAGGA-3′, sond 5′-AGGTTCAGGTGG/ZEN/GTGTGTTACGAA-31abkfq-3′.

vi testade 353 avföringsprover från Foya district av Kato-Katz smear; 31 (8.8%) var positiva för A. lumbricoides ägg, 231 (65,4%) för hookworm ägg, 27 (7,6%) för T. trichiura–liknande ägg och 276 (78,2%) för S. mansoni ägg. Vi testade 225 prover från Harper district av Kato-Katz smear; 163 (72.4%) var positiva för A. lumbricoides ägg, 65 (28.9%) för hookworm ägg och 51 (22.7%) för T. trichiura ägg (Tabell 1). Det fanns god överenskommelse mellan resultaten från Kato-Katz-och qPCR-testerna för proverna från Harper (80,5% -91,6%), men i allmänhet hade qPCR högre känslighet. Våra resultat överensstämde med resultat som tidigare rapporterats med prover från andra områden (3,11). Överenskommelse mellan de 2 diagnostiska testerna för prover från Foya varierade från 77,3% till 92,9%, men qPCR: s känslighet var oväntat låg, ett resultat som var särskilt sant för Ascaris-och Trichurisinfektion (Tabell 1). Medan prover positiva för Ascaris av Kato-Katz men negativa av qPCR hade låga äggantal, prover positiva för Trichuris av Kato-Katz men negativa av qPCR hade högre räkningar; 7 prover innehöll >1000 tunnformade ägg/g avföring (Tabell 2). Vi upprepade DNA-extraktion och qPCR och använde också ett alternativt qPCR för T. trichiura (3), men dessa tester förbättrade inte överenskommelsen mellan mikroskopi och qPCR-resultat.

för att ytterligare kontrollera om Kato-Katz-positiva, qPCR-negativa avföringsprover innehöll T. trichiura-ägg, undersökte vi direkta utstryk av avföringsprover bevarade i RNAlater genom mikroskopi (förstoring av 100 och 400 avföringsprover) (figur). Proverna positiva av qPCR innehöll ägg (6 uppmätta)med typisk T. trichiura-morfologi; dessa ägg hade medelvärdet (±SD) längd 52 µm (±2.4 µm) och bredd av 25.5 µm (±1.3 µm). I motsats, qPCR-negativa prover innehöll ägg (31 mätt) med medelvärdet (±SD) längd 51.8 µm (±1.5 µm) och bredd på 32,7 µm (±2.1 µm). De qPCR-negativa proverna hade också mindre uttalade pluggar och ett tjockt, strimmigt skal, funktioner som överensstämmer med ägg av Capillaria hepatica (syn. Calodium hepaticum) och några andra Capillaria-arter (Trichuridae). Ägg av C. philippinensis eller C. aerophila som har observerats i humana avföringsprover tidigare var antingen mindre eller större än Capillaria-äggen som hittades i Lofa (12,13). Eftersom polära pluggar av dessa ägg är mindre framträdande än T. trichiura, och eftersom deras former ibland är mer ovala eller runda, kan de också förväxlas med A. lumbricoides ägg med låg effektmikroskopi, speciellt om endast några ägg upptäcktes (figur).

helminthägg som finns i avföringsprover från personer i Lofa County, Liberia. A, B) ägg av Trichuris trichiura i prover som är positiva för T. trichiura av Kato-Katz-smet och av qPCR. C-F) ägg av Capillaria spp. i prover positiva för T. trichiura av Kato-Katz-smet men negativa för T. trichiura av qPCR. G) ägg av Capillaria spp. i prov positivt för Ascari lumbricoides av Kato-Katz smear men negativt för A. lumbricoides av qPCR. H) ägg av A. lumbricoides i prov positivt för A. lumbricoides av Kato-Katz smear och qPCR. Skala staplar indikerar 20 occurm. qPCR, kvantitativ PCR.

medlemmar av underfamiljen Capillaridae är djurparasiter med något avvikande livscykler, och de flesta smittar inte människor. Pseudoinfektioner med C. hepatica förekommer; ägg som finns i avföring är närvarande eftersom de konsumeras i infekterad djurlever. Faktiska infektioner med C. hepatica leder emellertid inte till att ägg passerar i avföring (9). Andra arter som C. philippinensis orsakar sanna infektioner (och autoinfektion) med ägg som finns i avföring; infektionen är kopplad till konsumtion av rå fisk. Human capillariasis har inte rapporterats från Liberia, och endast isolerade fallrapporter har publicerats från Afrika söder om Sahara (7-9). Vi utförde DNA-sekvensering för att bättre karakterisera Capillaria-arten som finns i Foya. Med hjälp av primers Kt875351.1 (5′-ccctagttgcgactttaaacga-3′) och Capillaria 18s1r (5′- TCCACCAACTAAGAACGGCC-3′) kunde vi förstärka och sekvensera en 288-bp-del av 18S rDNA från T. trichiura qPCR-negativa prover som endast innehöll ägg morfologiskt identifierade som Capillaria spp. (Genbank anslutning nr. MG859285). DNA-fragmentet var 100% identiskt med orthologs av C. hepatica (anslutning nr. MF287972. 1), Aonchotheca putorii (C. putorii) (anslutningsnummer. LC052356. 2) och Pearsonema plica (C. plica) (anslutningsnummer. Mf621034.1), Capillaria-maskarter som har olika livscykler och värdarter men som bara är 95% identiska med orthologen för T. trichiura.

livscykeln och den medicinska betydelsen av Capillaria-arterna som finns hos människor i nordvästra Liberia återstår att belysas. I vår studie visade vissa ämnen hög Capillaria äggbelastningar som kan indikera en sann infektion snarare än pseudoinfektion. Övergående höga äggantal har dock rapporterats hos personer med pseudoinfektioner (7). Medan konsumtion av buskkött i Foya är vanligt, är konsumtion av rå eller underkokt fisk, vilket är nödvändigt för överföring av C. philippinesis, sällsynt.