diskussion
vuxna C. sinensis maskar som inkuberades i buljongmedier producerade mer än 4000 ägg/mask/dag i början. Därefter minskade äggantalet till strax över 1000 vid Dag 7 och till 300-400 vid 14-dagen. Räkningarna blev lägre än 100 vid 28-dagen i buljongmediet. Räkningarna liknade varandra bland 3 buljongmedier. I motsats till detta, räkningarna i Lockes soultion var 220 44 och 1023 64 på dag 1 respektive 3. Dessa räkningar var lägre än de i buljongmedier i början, men maskarna producerade fler ägg på dag 21 och senare. Maskarna i buljongmedier producerade sina ägg mer kraftfullt vid tidig inkubationsfas medan de i Lockes lösning producerade mindre ägg dagligen men under en längre period. De dagliga äggantalen på 4000 av en vuxen mask var förenliga med det uppskattade genomsnittliga antalet 3770 ägg från en infekterad människa .
baserat på antalet ägg uppskattades det totala antalet ägg som producerats av en inkuberad vuxen mask, som återfanns från kaniner efter 8 veckors infektion, i genomsnitt 37 274 2 988 kcal. Dessa totala äggantal var lika oavsett odlingslösning eller media. Det dagliga antalet ägg minskade snabbt och livmodern blev Tom under odlingen. Därför representerade de nuvarande dagliga äggräkningarna att de in vitro odlade maskarna endast producerade intrauterina ägg som förformades i livmodern medan de bodde på kaniner före odlingen. Baserat på data uppskattas det att en gravid C. sinensis innehåller cirka 37 000 ägg i livmodern och producerar cirka 4 000 ägg varje dag. Följaktligen kan äggen stanna i livmodern cirka 10 dagar för intrauterin mognad. De flesta äggen i livmodern hittades mogna och miracidium utvecklades redan, men några av dem var omogna främst i den proximala livmodern. Dessa omogna ägg kunde inte utvecklas ytterligare under odlingen. Dessa fynd tyder på att de odlade maskarna inte kan formulera nya livskraftiga ägg och mognad av förformade omogna ägg är också omöjligt genom in vitro-odling.
C. sinensis ägg varierar 28-31 23-16 13-16 i storlek, med en operculum vid sin koniska ände och en liten abopercular knopp . I den aktuella studien visade de utvisade äggen onormal kontur när masken överlevde längre. Den genomsnittliga längden av ägget minskades gradvis och signifikant i Lockes lösning(27,49 0,48 0,48 OC) och alla buljongmedier. Längdreduktionen resulterade i minskning av FMI-värdet. FMI föreslogs som en parameter för biometrisk analys för att approximera volymen ägg för heterofyid och opisthorchiid flukes . I den aktuella undersökningen minskade FMI-värdena dag 60 i Lockes lösning och dag 90 i buljongmedier. De minskade FMI-värdena antyder minskning av äggvolymen genom krympning av längd och degenerering av innehållet. De flesta ägg som producerades efter 60 dagars in vitro-odling deformerades och deras längd/breddförhållande var mindre än 1,7 och FMI-värdet var mindre än 7000. De flesta av dessa ägg bestämdes icke-livskraftiga när de färgades med trypanblått. Odling i 60 dagar kan vara den maximala perioden för äggviabilitet.
lätt mikroskopisk observation avslöjade ackumulering av vakuoler och mörka massor inuti äggskalet eftersom odlingen varade längre än 60 dagar. Vakuolerna och de mörka massorna verkade vara deformerade vitellinceller som visas i O. viverrini . Dessa material i äggen föreslog att vitellinceller eller andra äggbildande material degenererades och äggen var abortiva. De mogna äggen som bildar miracidium kan överleva länge men avbrutna gör det inte. Degenerationen av inre material kan ha inducerat deformitet och minskning av äggvolymen. En studie fann deformerade ägg när mogna Echinostoma caproni gravid vuxna lagras i Lockes lösning upp till 4 månader vid 4 kcal C . En möjlig förklaring till ovanstående förändringar kan vara felaktig kinon garvning som är associerad med processen för äggskal bildning . Långvarig in vitro-odling kan ha påverkat denna fenol-oxydasmedierade enzymatiska process som resulterar i deformerat äggskal . Således kan långvarig in vitro-odling av C. sinensis deformera äggen såväl som deras livskraft.
mogna ägg av C. sinensis innehåller en mycket obetydlig abopercular knopp. O. viverrini, en närbesläktad leverfluke, visar också mycket liten till något utvecklad abopercular knopp av äggen . I den aktuella studien, abopercular knopp av äggskalet blev mer framträdande i de flesta ägg efter 60 dagars inkubation. Utseendet på en sådan framträdande omoperkulär knopp var uppenbar i de flesta degenererade ägg. Krejci och Fried visade att abopercular knopp kan vara grunt eller djupt infolded i äggskalet vid Echinostoma caproni respektive E. trivolvis. Infolding av abopercular knopp omgivande skal observerades inte i den aktuella studien. Den framträdande abopercular knopp kan vara en förlängning av existerade normal diskret knopp som svar på den förändrade fysiologi döende maskar. Sammantaget är det svårt för flukorna att producera normala livskraftiga ägg genom in vitro-odling.
äggens ytstruktur, observerad av SEM, verkade vara en lämplig morfologisk egenskap för att förstå äggskalets status. Bland opisthorchiids är C. sinensis äggyta extremt skulpterad för att göra interlaced rynkor av varierande höjd vilket hjälper förmågan att ackumulera naturliga vattenfibrer och öka risken för kontakt med blötdjursvärdar , . I den aktuella studien observerades minskad ytrynkla av SEM av de avbrutna äggen. Denna minskade rynkning med den framträdande abopercular knoppen kan vara ett resultat av degenererande process av äggskalet.
den aktuella studien hade några begränsningar. Det fanns inga direkta data om äggviabilitet att jämföra med morfologiska förändringar. In vitro kläckning av ägg kan ge korrekt information om äggets livskraft, men C. sinensis-ägg kan fortfarande inte. Även data om morfologi och fysiologi hos de inkuberade maskarna var begränsade.
Sammanfattningsvis odlas C. sinensis maskar i buljongmedier passerar livskraftiga ägg i 60 dagar som är förformade i livmodern under deras överlevnad hos kaniner. De förformade omogna äggen kan inte utveckla miracidium genom in vitro-odling. En mogen C. sinensis vuxen innehåller cirka 37 000 ägg i livmodern och producerar cirka 4 000 ägg dagligen. De deformerade äggen med FMI-värdet mindre än 7000 och längd/breddförhållandet lägre än 1,7 är icke-livskraftiga.