staten veterinary diagnostic laboratory, Texas A& m Veterinary Medical Diagnostic Laboratory, TVMDL, testar hundratusentals prover årligen. Men på randen av varje års hjortjaktsäsong börjar testnumren spika när efterfrågan på kronisk avfallssjukdom, CWD, ökar.
Vad är kronisk slösa sjukdom?
CWD är en progressiv neurologisk sjukdom som drabbar flera cervid arter. CWD-mottagliga arter är vitsvanshjort, svartsvanshjort, mulhjort, älg, kronhjort, ren, sika och älg. Sedan den först rapporterades 1967 har den dokumenterats i både fångna och frigående cervid-arter i 25 stater och tre kanadensiska provinser.
CWD har fått viss uppmärksamhet under de senaste åren som rapporter om en ”zombie rådjur sjukdom” dykt upp och spridda över olika medier. Även om catchy, ”zombie deer disease” är faktiskt en missvisande eftersom djur som drabbats av CWD inte är döda. När det har påverkats kan det ta två till fyra år för det infekterade djuret att börja visa kliniska tecken, vilket kan efterlikna ”zombieliknande” beteende när sjukdomen fortskrider. Berörda djur uppvisar tecken som viktminskning, drooling, snubbla och stupor. Denna kombination av kliniska tecken kulminerar i ett djur som verkar ”slösa bort”, myntar det faktiska namnet på sjukdomen.
liknar bovin spongiform encefalopati, BSE, hos nötkreatur och skrapie hos får och getter, CWD är en naturligt förekommande överförbar spongiform encefalopati, tse eller prionsjukdom. Prioner är onormala proteiner och extremt svåra att förstöra. När de är smittade påverkar prionerna initialt djurets lymfkörtlar och efter att ha spridit sig genom kroppen infekterar de så småningom hjärnan.
under 2012 upptäcktes CWD först i Texas i frigående mule deer i Hueco Mountains. Sedan dess har sjukdomen fortsatt att upptäckas i västra Texas och Panhandle-regionerna i mule deer, white-tailed hjort och älg.
även om Texas historia av CWD har varit kort jämfört med andra stater, fortsätter diagnostisk testning att öka när statliga myndigheter försöker kontrollera sjukdomen. I Texas är TVMDL det enda laboratoriet som godkänts för att testa för CWD.
CWD Submitters: Vem är de?
förra året utförde TVMDL cirka 26 500 CWD-tester. Av det totala antalet tester utfördes nästan hälften från oktober till December. Denna ökning av CWD inlagor sammanfaller med rådjur jaktsäsongen i Texas.
jägare måste följa vissa riktlinjer under hjortsäsongen på grund av Texas Parks and Wildlife Department, TPWD, program som syftar till att mildra spridningen av CWD. Till exempel, om en hjort dödas i en CWD-karantänzon, måste prover samlas in och skickas in för CWD-testning. Provsamling utförs vid jägarkontrollstationer, hjortbearbetningsanläggningar och ibland taxidermister.
CWD-testförfrågningar lämnas in av statliga myndigheter, som TPWD och Texas Animal Health Commission, TAHC och deer breeders. TVMDL tillhandahåller service till dessa byråer och hjortindustrin för att hjälpa till med pågående ansträngningar för att spåra spridningen av sjukdomar som CWD.
detekterar sjukdomen
en gång på laboratoriet testar TVMDL prover genom en av två metoder: enzymbunden immunosorbentanalys, ELISA eller immunhistokemi, IHC. Båda testmetoderna kräver vävnader som hämtas från antingen hjortens lymfkörtlar eller obex.
ELISA-testning
den mest efterfrågade metoden är ELISA-testet. Denna metod är det känsligare alternativet eftersom det använder färska vävnader i motsats till vävnader som är fixerade i ett konserveringsmedel. Hela processen, exklusive provberedningstid, tar vanligtvis cirka tre timmar. När ett prov anländer till serologisektionen vid TVMDL börjar den första av tre faser: provberedning.
under provberedningen skärs exakta volymer och anatomiska platser av lymfkörtel-och/eller obexvävnader och placeras i unika sliprör. Rören placeras på ett homogeniseringsinstrument som kondenserar vävnaderna och förbereder dem för den andra fasen av testning, rening.
reningsfasen är halvautomatisk. Ett flytande hanteringsinstrument börjar med att bearbeta provet. Denna process smälter normala prioner med Proteinas K och lämnar bakom sjukdomsframkallande prioner, om några är närvarande. Därefter centrifugeras den flytande slutprodukten av reningsprocessen för att bilda en pellet. Pelleten behandlas en andra gång och späds sedan ut. Pelleten går sedan vidare till slutfasen av testningen och bestämmer om några CWD-prioner är närvarande.
detektion är den sista fasen av ELISA-testprocessen. I denna fas testas den utspädda provpelleten med användning av en smörgås ELISA. En smörgås ELISA använder två lager antikroppar för att bestämma koncentrationen av ett visst antigen, i detta fall CWD-prionen. Ett färgförändrande substrat tillsätts under processen som en visuell indikator på närvaron av CWD-prioner i provet. Om ett prov utvecklar en signifikant färgförändring anses den vara en ”initial reaktor”, IR, och testas om. IR-prover som fortfarande indikerar närvaron av CWD – prioner efter omtestning vidarebefordras till US Department of Agriculture-Animal and Plant Health Inspection Service, USDA-APHIS, National Veterinary Services Laboratory.
IHC-testning
TVMDLS andra CWD-testalternativ, IHC, använder fasta eller konserverade vävnader. Om vävnader anländer till TVMDL färskt eller inte väl fixat, läggs en dag till processen för att ge tid för vävnaderna att fixas i formalin tills de är redo för testning.
när de är väl fixerade placeras vävnader i individuellt märkta plastkassetter. Kassetterna är nödvändiga för följande steg där vävnader bearbetas i ca 13 timmar. Under denna tid dehydreras vävnader och allt vatten ersätts med paraffinvax för att bevara vävnadens cellstruktur.
efter bearbetning är vävnader inbäddade i en paraffinvaxform för att förbereda dem för snittning med hjälp av en mikrotom. Detta instrument skär vaxvävnadsblocket i 5 mikron tjocka sektioner, tunnare än en sträng av mänskligt hår.
den tunna delen av vävnaden är monterad på en glasskiva. Efter torkning över natten förbereds glasskivorna för färgning. Glidbanorna behandlas för att avlägsna paraffinen och säkerställa att antigenbindningsställen är tillgängliga under färgningsprocessen. Denna process identifierar CWD-antigener i vävnaden genom att binda en antiprionmolekyl till CWD-antigenet i positiv vävnad och sedan binda en röd kromogen till den molekylen.
denna halvautomatiska färgningsprocess tar cirka sex timmar totalt; två timmars manuellt arbete och fyra automatiserade timmar. Under denna tidsram kan de tre färgningsinstrumenten fläcka 90 glasskivor. När färgning är klar täcker alla bilder och ges till TVMDL-patologer som mikroskopiskt inspekterar varje bild för närvaro av CWD.
i likhet med ELISA-testmetoden, om ett prov misstänks ha CWD, skickas det till National Veterinary Service Laboratory i Ames, Iowa för bekräftande testning och en slutlig diagnos.
Tvmdl-skillnaden
även om andra laboratorier över hela USA erbjuder CWD-testning, sätter TVMDL sig ifrån varandra genom sitt engagemang för individerna i Texas hjortindustrin. Byrån arbetar nära med andra statliga myndigheter och hjortuppfödare för att skapa arbetsrelationer och personliga kontakter.
för mer information om CWD-testning på TVMDL, besök tvmdl.tamu.edu eller ring College Station laboratory på 1-888-646-5623.