Her-2/neu-status kan detekteras genom att analysera antalet genkopior genom Southern blotting, PCR eller FISH, eller mängden uttryckt protein kan fastställas av Western blotting, enzymbunden immunosorbentanalys eller IHC. De två mest använda metoderna för närvarande är IHC och FISH eftersom de kan utvärdera Her-2/neu i formalinfixerade paraffininbäddade arkivvävnader.
de flesta HER-2/neu-studier har utförts av IHC, som upptäcker överuttryck av HER-2/neu-proteinprodukten på cellmembranet i tumörceller. Denna studie använde CB11 monoklonal antikropp, som, liksom den standardiserade polyklonala Herceptesten, riktas mot den intracytoplasmiska domänen i Her2/neu-molekylen .
IHC är allmänt tillgänglig och lätt att utföra till en rimlig kostnad. Detta semikvantitativa förfarande är emellertid besatt av tekniska artefakter, känslighetsskillnader mellan olika antikroppar och subjektiv tolkning, vilket resulterar i interobservervariation mellan patologer . Studier avslöjar överkänsligheten hos US Food and Drug Administration-godkänd HercepTest, med en falsk positiv hastighet så hög som 50% . Thomson och kollegor drog slutsatsen att i fall med en IHC-fläckintensitet på 1 + eller 2+ är interobserver-avtalet dåligt och det prediktiva värdet är otillfredsställande för klinisk användning; de rekommenderade ytterligare testning, helst med fisk .
fisk är ett ganska objektivt och kvantitativt förfarande för att detektera Her-2/neu-genförstärkning på kärnorna i tumörceller. Nackdelarna med detta förfarande är dess branta Kostnad (10 gånger den för IHC), sofistikering, behovet av ett fluorescensmikroskop, den tillfälliga signalen (det kräver en speciell kamera) och dess oförmåga att upptäcka och bedöma tumörhistomorfologi.
Her-2/neu-överuttryck detekterat av IHC är starkt korrelerat med genförstärkning detekterad av fisk (så hög som 98% överensstämmelse) . Emellertid visar 3-15% av bröstkarcinom måttlig HER-2 / neu-membranfärgning utan bevis på förstärkning. De representerar oftast mycket känslig icke-specifik färgning (falskt positiv) och sällan antingen förbättrad mRNA-transkription i frånvaro av amplifiering eller genförstärkning som ligger under detektionsnivån för hybridiseringsmetoder in situ .
Kakar och kollegor drog slutsatsen att IHC är lämpligt för den initiala HER-2/neu-bedömningen, men patienter vars tumörer fick mindre än 3+ (särskilt de som tolkades som 2+) skulle dra nytta av fisk för att bedöma HER-2/neu-status mer exakt och för att undvika felaktig prognostisering och olämplig behandling .
CISH är en ny framsteg i HER-2/neu-detektering. Den använder en robust unik sekvenssond utvecklad för in situ hybridisering och är ett lovande praktiskt alternativ till fisk. Efter den första CISH-studien av Tanner och kollegor validerade sju andra rapporter positivt CISH-resultat . Överensstämmelsen mellan CISH och fisk varierade från 85% till så hög som 100% . Alla dessa rapporter noterade fördelarna med CISH över fisk: det kräver ett vanligt mikroskop; metoden är mindre besvärlig och mer ekonomisk; signalintensiteten är permanent; och patologer är bekanta med IHC-signaler och kan korrelera fynd med den underliggande tumörhistomorfologin. CISH tillåter observatörer att välja fält av invasivt duktalt karcinom, vilket undviker foci av intraduktalt karcinom för vilket Her-2 / neu har en annan klinisk betydelse. CISH är en specifik, känslig och lätt tillämplig metod för detektering av Her-2/neu-genförstärkning, och den kan användas tillsammans med IHC för utvärdering av patienter med bröstkarcinom . Ross och kollegor granskade nyligen den aktuella statusen för HER-2 / neu-testning, och de drog slutsatsen att CISH är en mer bekväm genbaserad teknik som väntar i vingarna .
i denna nuvarande studie var konkordansen mellan 3+ IHC och CISH-förstärkta fall 100% (40 av 40), vilket betecknar alla genförstärkta fall som överuttrycker HER-2/neu-proteinet. Däremot var avtalet om 2 + IHC och CISH-förstärkta fall endast 45%, vilket är lägre än tidigare rapporterat (93%) . 13,75% (22 av 160) IHC-positiva/CISH icke-förstärkta tumörer i denna studie, som alla hade 2+ IHC-poäng, är högre än 6% falskt positivt resultat av Zhao och kollegor , även om det är jämförbart med 17% – resultatet (IHC CB11 kontra fisk) erhållet av Tubbs och kollegor . Tydligen finner vi att 2+ IHC-poängen är tvetydig jämfört med CISH. Denna delmängd kan dra nytta av ytterligare cish-reflextestning. Alla negativa IHC-fall var CISH icke-förstärkta, vilket visar fullständig överenskommelse om alla negativa resultat. Den totala överensstämmelsen med 86,25% mellan IHC (med CB11-antikropp) och CISH i denna studie är lägre än tidigare rapporter (94-96%) . Vi instämmer med Sapino och kollegor att genförstärkningsanalys kan undvikas i alla 0, 1+ och 3+ IHC-fall eftersom resultaten är förutsägbara från IHC och är helt överensstämmande med CISH . Nyttan av CISH är därför vid ytterligare testning av HER-2 / neu-förändring i tvetydiga fall i IHC, som fortfarande är den primära screeningmetoden. Den kombinerade IHC-CISH-algoritmen ger en ekonomisk och omfattande Her-2/neu-data för att vägleda kliniker i kartläggning av behandlingsalternativ.
den lågförstärkta CISH-kategorin (6-10-signaler) var den svåraste att tolka, vilket krävde en exakt uppräkning av genkopia. Signalklustring, mer sannolikt ett resultat av intrakromosomal förstärkning av homogent färgningsregioner, var omedelbart uppenbart i mycket förstärkta fall och utvärderades lätt .
ett test för kromosom 17 aneuploidi utfördes inte på icke-förstärkta och lågförstärkta CISH-analyser, eftersom nya studier visade att det gör analysen dyrare och tidskrävande utan att lägga till relevanta data, förutom att rapportera det rekommenderade antalet nukleära amplikoner och fungera som en annan form av intern kontroll för hybridiseringsreaktionen . Dessutom, även om tillverkaren (Zymed) föreslog att kromosom 17 aneuploidi skulle testas på alla genförstärkta fall , instämmer vi med Vera-Roman och kollegor, som korrekt påpekade att eftersom de flesta polysomiresultat faller inom det grå området på tre till fem signaler, sätter tröskeln för avstängningssignalpunkter till en hög av sex eller mer (som i denna studie) eliminerar praktiskt taget polysomivariabeln.
denna studie observerade inte IHC-negativa CISH-förstärkta tumörer. Detta kan förmodligen förklaras av det faktum att detta var en studie med en institution som sannolikt skulle ha enhetligt fixerade och bearbetade tumörvävnadsparaffinblock samt en enhetlig antigenåtervinningsteknik, som båda gör IHC av hög kvalitet lättare. Zhao och kollegor rapporterade enstaka IHC-negativa CISH-förstärkta fall, och de ansåg att dessa representerar en liten obestämd procentandel som förstärkte Her-2/neu utan överuttryck . Samma studie och andra FISKSTUDIER noterade också sällsynta 3 + IHC-tumörer som inte förstärktes (falskt positiva) . Skälen till IHC-CISH-avvikelserna liknar dem mellan IHC och FISH, som tidigare nämnts i denna rapport.
orsakerna till testfel och falsk negativitet som erbjuds av tidigare CISH–studier var en frånvaro av tumör på sektionen, en oförmåga att göra poäng på grund av hög bakgrund, en låg signalintensitet trots upprepade försök, en frånvaro av signaler från den interna kontrollen och användningen av alkoholformalin–ättiksyrafixativ . Det noterades vidare att värmeförbehandling och matsmältning med pepsin är de mest kritiska procedurerna för optimerad CISH-prestanda, och att framgångsrika cish-hastigheter var låga när 20-åriga vävnadsblock användes .
Sauer och kollegor korrelerade IHC-och FISH-resultat med klinisk prognos. De noterade att IHC / fisk-positiva fall såväl som endast fisk-positiva fall hade samma prognos avseende överlevnad, medan IHC-positiva endast fall hade en prognos liknande den för IHC/fisk-negativa tumörer. Däremot hade IHC-negativa / FISKPOSITIVA fall en överlevnadssannolikhet liknande den för IHC / FISKPOSITIVA fall. Samma författare drog slutsatsen att om bara IHC användes som ett primärt verktyg, skulle IHC-negativa/FISKPOSITIVA fall missas; dessa kvinnor skulle inte ha nytta av trastuzumab och deras överlevnad skulle påverkas negativt. Däremot verkar IHC-positiva tumörer tillhöra en bättre prognostisk grupp, och misslyckande med att upptäcka dem skulle förmodligen inte ha en negativ effekt på överlevnaden .
eftersom kliniska resultatstudier ännu inte har tagit upp nyttan av de LÅGFÖRSTÄRKTA och högförstärkta CISH-resultaten, särskilt den osäkra betydelsen av den lågförstärkta gruppen, är dessa kategorier fortfarande i flöde. Trots denna begränsning finns det fortfarande värde i att rapportera sådana förstärkta grupper separat för närvarande, i avvaktan på vilka kliniska föreningar som kommer att erhållas i framtiden. Intraobserver och interobserver variabilitet vid rapportering av LÅGFÖRSTÄRKTA och högförstärkta CISH-resultat inkluderades inte i denna studie, även om patologen som tolkade CISH-analyserna konsekvent tillämpade kriterierna från tillverkarna.
bröstcancer hos premenopausala kvinnor har en annan biopatologisk profil än hos äldre patienter, med en övervägande av ogynnsamma prognostiska parametrar, inklusive en högre frekvens av grad 3-tumörer och mer frekvent Her2/neu-överuttryck . Ung ålder fungerar som ett surrogatmått av negativa prognostiska profiler . Denna studie misslyckades med att fastställa sambandet mellan menopausal status, som godtyckligt fastställdes till 50 år och högre, och Her2/neu-förändring.
Her2/neu-amplifiering var direkt korrelerad med grad och histologisk typ av bröstcancer . Sapino och kollegor föreslog att patologen på grundval av tumörkvalitet och histologisk typ skulle kunna indikera för onkologen vilken bröstcancer kräver Her2/neu-analyser . Men medan ingen av de fyra väl differentierade tumörerna visade HER2/neu-förstärkning eller överuttryck, samlades ingen signifikant korrelation i denna studie när det gäller Her2/neu-status och histologisk kvalitet; Vi prenumererar därför fortfarande på att testa Her2 / neu på alla nydiagnostiserade bröstcancer. Sammantaget förutsåg åldersfördelningen av bröstcancerpatienter och tumörhistologisk grad inte signifikant IHC och CISH Her2/neu-status.