Abstrakt
vi har använt ett tvåstegs klonkultursystem för att otvetydigt visa att enskilda primitiva lymfohemopoietiska stamceller har kapacitet för differentiering längs antingen myeloid eller B-lymfoid härstamning. Mycket berikade murina märgceller pläterades individuellt i odling genom mikromanipulation i närvaro av pokeweed mitogenstimulerad mjältcell konditionerat medium, erytropoietin, stålfaktor (SF) och interleukin (IL) 7. Fyrtiofem procent av de enskilda cellerna bildade primära kolonier som uttryckte flera hemopoietiska linjer. När alikvoter från enskilda kolonier replikerades i sekundär metylcellulosakultur innehållande SF och IL-7 gav 41% av de primära kolonierna upphov till lymfocytkolonier. Celler i lymfocytkolonierna var blastliknande och B220+, sig -, Mac-1 -, Gr-1 -, Ly-1 -, L3T4 -, Ly-2-och CD3 -. Trettio till 70% av cellerna var Thy-1+. mu-kedja mRNA detekterades i de flesta cellerna genom in situ hybridisering med en antisense RNA-sond. När lymfocytkolonier härledda från en enda cell poolades och injicerades individuellt i scid-möss, var IgM av Givartyp mätbar i serum hos möss och mjältar innehöll donator-Typ B-celler. Vi genomförde sedan initial screening av tillväxtfaktorer för att identifiera tillväxtfaktorer som kan ersätta pokeweed mitogen-stimulerad mjältcell konditionerat medium i primärkulturen. Kombinationer av två faktorer som inkluderade SF plus IL-6, IL-11 eller granulocytkolonistimulerande faktor var alla effektiva i den primära kulturen vid upprätthållandet av B-lymfoidpotentialen. Intressant nog kunde IL – 3 varken ersätta eller agera synergistiskt med SF för att stödja lymfoidpotentialen hos de primära kulturerna. Våra observationer visar att många primitiva förfäder som tidigare tros vara myeloid-engagerade också har B-lymfoid potential. Detta kultursystem bör vara värdefullt för att belysa mekanismerna som reglerar tidiga stadier av lymfohemopoiesis.