monoklonal antikropp (mAb) läkemedel har väckt betydande intresse på grund av deras starka terapeutiska styrka och specificitet för att behandla inflammatoriska, onkologiska och autoimmuna sjukdomar. På grund av deras inneboende komplexitet på grund av ett stort antal mikro-heterogeniteter finns det ett avgörande behov av analysmetoder för att ge en omfattande djupgående karakterisering av kandidatmolekyler.
en uppsjö av analytiska tekniker tillhandahålls av Creative Biolabs för antikroppskarakterisering och homogenitetsbedömning vid alla stadier av MAB-upptäckt, preklinisk och klinisk utveckling. Här introducerar vi tillämpningen av kapillär isoelektrisk fokusering (cIEF) för antikroppsladdning heterogenitet analys. Det används ofta för karakterisering av terapeutiska mAbs. Genom att bestämma pI för Mab-laddningsisoformer ger cIEF information som är avgörande för att fastställa identitet, renhet, post-translationella modifieringar och stabilitet.
introduktion till cIEF
cIEF bygger på principen om kapillärgelelektrofores. Elektrofores är en separationsteknik baserad på differentialhastigheten för laddade arter i ett elektriskt fält, mot elektroden med motsatt laddning. För att separera molekyler baserade på isoelektrisk punkt (pI) upprättas en pH-gradient inuti gelen genom användning av amfolytblandningar. Under det elektriska fältet migrerar molekylerna längs det elektriska fältet tills de når pH som motsvarar pI, där de positiva och negativa laddningarna i molekylerna balanseras. UV-absorptionen över hela kapillären mäts under hela separationen, vilket möjliggör observation i realtid och en slutlig kvantifiering.
Fig.1 princip för isoelektrisk fokusering. (Pergande, 2017)
cIEF för Charge heterogenitet karakterisering
mAbs är mottagliga för olika Post-translationella modifieringar (t. ex., glykosylering, fosforylering, oxidation och lysinklippning), vilket leder till laddningsvarianter. Några av dessa laddningsvarianter kan ha en möjlig effekt på molekylens biologiska aktivitet och säkerhet i varierande grad. Till exempel påverkar glykosyleringsprofilen för mAbs starkt proteinets biologiska aktivitet. Följaktligen är rutinmässig övervakning av MAB charge heterogenitet en integrerad del av alla produktkvalitets-och livscykelhanteringsplaner. Det är också en av de viktigaste analytiska aspekterna av biosimilar utvecklings-och jämförbarhetsstudier. Som en laddningsbaserad separationsteknik är cIEF ett kraftfullt verktyg för att karakterisera mAbs laddningsprofil, eftersom olika laddningsvarianter kan särskiljas enligt deras pI med intern kalibrering. Eftersom cIEF ger mycket hög reproducerbarhet och specificitet är detta ett av de mest populära verktygen för mAb-analys.
funktioner i våra tjänster
- karakterisering av storlek och laddningsvarianter av intakta och reducerade mAbs med cIEF
- analys av laddningsvarianterna av mAbs med hjälp av ett ortogonalt tillvägagångssätt
- cief-separation följt av masspektrometri (MS) analys
- anpassade tjänster enligt de specifika kraven
Creative Biolabs erbjuder också ett brett utbud av Antikroppsfunktionsanalyser för att förstå effekterna av Laddningsvarianter på antikroppsaktivitet och egenskaper, såsom effektorfunktioner, fcrn och antigenbindning affinitet och PK, vilket belyser struktur-funktionsförhållandena. Om du är intresserad av vår tjänst, kontakta oss för att diskutera dina krav.