I. U. B.: 3.4.22.8
C. A. S.: 9028-00-6
enzymatisk reaktion (bilden öppnas i ett nytt fönster)
Clostripain är ett cysteinaktiverat proteas som tillsammans med kollagenas och andra proteaser finns i Odlingsfiltrat av Clostridium histolyticum. Det är unikt i sin specificitet för karboxylpeptidbindningen av arginin och dess beroende av tiol-och kalciumjoner.
historia:
bakterierna från vilka clostripain renas först fick uppmärksamhet under första världskriget på grund av dess allvarliga konsekvenser för de sårade (Mitchell och Harrington 1971). Cl. hisolyticum är bara en av organismerna med följdpatogena egenskaper, men dess proteolytiska aktivitet i cellfria kulturfiltrater fick uppmärksamhet så långt tillbaka som 1917 (Weinberg och S Exceptionalgun 1917, och Mitchell och Harrington 1971).
1931 beskrevs matsmältningen av hästsenor av Weinberg och Randin. Ett år senare identifierade de ett exotoxin, som de kallade ”ferment fibrinolytique”, som orsak till matsmältningen (Weinberg och Randin 1932). Det visade sig senare att denna matsmältning orsakades av en mängd proteolytiska enzymer, inklusive ett cysteinaktiverat proteinas, clostripain (Kochalaty and Weil 1938 och Maschmann 1938).
1948 isolerade Kochalaty och Krejci först framgångsrikt clostripain i relativt ren form (Mitchell och Harrington 1968). Ogle och Tytell förfinade reningstekniken 1953 och rapporterade först om dess specificitet (Ogle och Tytell 1953).
när clostripains smala substratspecificitet blev av intresse fanns förvirring i litteraturen om clostripains identitet (Mitchell and Harrington 1971). Innan dess beskrivning som clostripain av Labouesse och Gros 1960, och senare Mitchell och Harrington 1968, kallades det g-proteas (Bard och McClung 1948, och Oakley och Warrack 1950), amidas-esteras (Nordwig och Strauch 1963) och clostridiopeptidas B (Mitchell och Harrington 1968).
det senaste arbetet med clostripain har inkluderat cellisolering och dess användning som ett modellmål för proteashämmare för behandling av clostridiala infektioner (Wang et al. 2004, och Gusman et al. 2001).
specificitet:
Clostripain hydrolyserar selektivt arginylbindningar och lysylbindningar i en lägre takt. Det kan också fungera som ett transpeptidas med maximal aktivitet vid pH 7,6-9,0 (Anderson 1985 och Fortier och MacKenzie 1986).
Molekylära Egenskaper:
både de tunga och lätta kedjorna kodas av en enda gen med en 1581 nukleotid öppen läsram (ORF). Vid uttryck av genen transkriberas hela ORF (signalregionen, proregionen och 9 aminosyrapeptidlänkaren). Posttranslationell bearbetning producerar det heterodimera aktiva enzymet (Dargatz et al. 1993).
sammansättning:
Clostripain är en heterodimer. Den mogna kedjan består av 526 rester. De två kedjorna hålls samman av starka icke-kovalenta krafter (Gilles et al. 1979, och Ullman och Bordusa 2004). Den katalytiska sulfhydrylresten på det aktiva stället antas vara Cys41 (tung kedjerest). Föregångaren innehåller en 27 aminosyra förmodad signalpeptid, en 23 aminosyrapropeptid, EN 131 aminosyra lätt kedja subenhet, en 9 aminosyra linker peptid, och en 336 aminosyra tung kedja subenhet (Ullman och Bordusa 2004).
Proteinanslutningsnummer: P09870
Molekylvikt:
- 53.0 kDa (teoretisk)
- lätt kedja: 12,5 kDa, tung kedja: 45 kDa (Gilles et al. 1979)
optimalt pH:
- 7.4-7.8 (aktivitet mot A-bensoyl-argininetylester) (Mitchell och Harrington 1968)
isoelektrisk punkt: 4,8 – 4,9 (Mitchell och Harrington 1971)
Utrotningskoefficient:
- 87,890 cm-1 M – 1 (teoretisk)
- E1%, 280 = 16,57 (teoretisk)
rester av aktiva platser:
- cystein (C41, tung kedja)
aktivatorer:
- Sulfhydrylkrav: ditiotreitol, cystein eller andra reduktionsmedel
- kalciumjon är väsentlig
- reduktionsmedel
hämmare:
- EDTA
- oxidationsmedel
- Sulfhydrylreagenser (såsom TLCK) (Porter et al. 1971)
- Co2+, Cu2+, Cd2+ och tungmetalljoner
- Citrat, Borat och Tris-anjoner hämmar delvis
applikationer:
- peptid kartläggning
- sekvensanalys
- cellisolering (Wang et al. 2004)
- hydrolys/kondensation av amidbindningar
- peptidsyntes (Meiwes et al. 1991)