även om det mesta av arbetet med chlamydialinfektioner hos små idisslare berör tackor, har chlamydiosis en ekonomisk och folkhälsopåverkan i många getgårdar över hela världen. Chlamydiala aborter rapporterades för första gången i Tyskland 1959.Därefter diagnostiserades sjukdomen i Bulgarien, Spanien, USA, Frankrike, Indien, Japan, Storbritannien, Tchad, Grekland och Tunisien. På många områden är chlamydial abort den andra orsaken till smittsamma aborter efter brucellos och den främsta orsaken i de flesta länder där brucellos kontrolleras
etiologi
sjukdomen beror på en liten gramnegativ bakterie, Chlamydia psittaci, som växer i cytoplasman hos eukaryota celler i en unik utvecklingscykel där en resistent infektiös form, de elementära kropparna (EB) växlar med en metaboliskt aktiv icke-infektiös form de retikulära kropparna (RB). EB fäster vid värdcellens membran och främjar sin egen endocytos i en membranbegränsad vakuol som kallas inkludering, som inte smälter samman med lysosomer. Sedan omvandlas EB i RB, som replikeras genom binär fission. Efter flera divisioner omvandlas RBs, som fyller all inkludering, tillbaka till smittsamma EBs. Dessa EBs frigörs genom värdcelllys eller extrudering av inkluderingen ur värdcellen .
taxonomi
Chlamydia psittaci är en av de fyra arterna av släktet Chlamydia, som också inkluderar Chlamydia trachomatis, Chlamydia pneumoniae och Chlamydia pecorum.
Chlamydia trachomatis och Chlamydia pneumoniae är båda mänskliga patogener. C. psittaci infekterar en mängd olika fåglar, däggdjur och ibland människor och C. pecorum förorenar idisslare, svin och koalor. Hos tackor och getter orsakar C. pecorum lunginflammation, konjunktivit och artrit men isoleras ofta från asymptomatiska tarminfektioner .
förutom i mycket sällsynta fall tillhör stammar som inducerar abort hos getter C. psittaci serotyp-1, som också är ansvarig för lunginflammation, konjunktivit och artrit och ibland tarminfektioner utan några kliniska tecken. C. psittaci-arten är mycket heterogen och före den fjärde arten uppträdde C. pecorum .
fylogenetiska analyser av 16S och 23s rRNA-gener antyder förekomsten av nio differentierade arter i Chlamydiaceae och bly Everett et al., att föreslå skapandet av två nya släktingar Chlamydia och Chlamydophila. Släktet Chlamydia, som motsvarar den gamla Chlamydia trachomatis benämningen omfattar 3 arter: C. trachomatis (mänskliga stammar), C suis (svinstammar relaterade till C. trachomatis isolerade från spontana aborter, vaginala infektioner och pneumoniae) och C. muridarum (mus-hamsterstammar).
släktet Chlamydophila omgrupperar 6 arter: C. pneumoniae, C. pecorum, C. psittaci (tidigare Chlamydia psittaci fågelstammar), C. caviae, medlet för marsvininklusion konjunktivit (GPIC), C. felis (C. psittaci-stammar som infekterar katter) och C. abortus (klassisk serotyp-1 Chlamydia psittaci-stammar). Resultaten överensstämmer med de som erhållits genom fylogenetiska analyser av fem andra kodande gener (GroEL, KDO-transferas, MOMP, 60-kDa cysteinrikt protein och cysteinrikt lipoprotein) och de biologiska egenskaperna hos stammarna . Restriktionslängdspolymorfismanalysen (RFLP) för den ribosomala intergena distansdomänen för 16s-23s rRNA-gener ger en snabb och reproducerbar metod för att identifiera och klassificera chlamydialstammarna i den nya arten . Vissa medlemmar i det vetenskapliga samfundet håller emellertid inte med förslaget till en ny Chlamydial taxonomi, eftersom det inte tar hänsyn till bakteriens hela genom.
kliniska tecken
Klamydios kännetecknas kliniskt av abort under de sista månaderna av graviditeten, dödfödda eller för tidiga födslar av svaga barn med låg födelsevikt. Aborter sker utan tidigare kliniska specifika tecken även om vissa getter kan utveckla ihållande hosta utan andnöd, eller artrit och keratokonjunktivit. Vid experimentella infektioner observerades lätt vaginal urladdning dagen före abort på vissa getter . Behållna moderkakor och metrit är inte vanliga, även om de är vanligare än hos tackor . Efter aborten kan getter återhämta sig snabbt eller kan uppvisa brun urladdning från slidan. Vid experimentella infektioner eller i vissa naturliga infektioner med hög abortfrekvens återhämtade sig endast 50% eller mindre av getter som avbröts, medan Post abortiv sjukdom hos tackor är ovanlig. Detta kan bero på virulensskillnader mellan stammar eftersom mycket lite är känt om virulensmekanismer hos stammar. Ingen skillnad i virulens kunde visas i musmodeller mellan får-och getstammar , men förstärkt fragmentlängdspolymorfism (AFLP) avslöjade genomiska skillnader mellan getstam AC1 och får serotyp-1 C. psittaci-stammar .
även om vi har visat att service av infekterade getter kan leda till infekterade djur , har hittills ingen epiddymit på grund av C. psittaci beskrivits i djur. Detta beror förmodligen på det mycket lilla antalet studier på kaprinklamydios snarare än en större mottaglighet för rams och tjurar för chlamydialinfektioner.
i en nyinfekterad flock är abortfrekvensen svår. Ofta 30% eller mer, ibland kan 90% av gravida avbryta och mjölkproduktionen kan minska. Den höga aborthastigheten observeras i 2 eller 3 år, varefter sjukdomen tar en cyklisk natur: 10% av gravida kvinnor kommer att avbryta varje år i flera år tills ett nytt utbrott inträffar och då kommer alla åringar att avbryta. Den höga immunitetsnivån som produceras efter abort är ansvarig för den cykliska utvecklingen av sjukdomen i besättningen: det är exceptionellt för en get att avbryta två gånger. Papp och Shewen har visat att några av tackorna som avbrutits kan bli kroniskt infekterade. Klamydiala antigener och DNA kan detekteras i slidan, livmodern och livmoderrören under den peri-ovulatoriska perioden av tackor som avbröts. Ingen forskning har gjorts för att bestämma förekomsten av kroniska infektioner hos getbesättningar.
fostret visar inte specifik makroskopisk skada. Barn som levereras nära termen kan täckas av brunt material. Klart eller blodfärgat diffust ödem, blodfärgade vätskor i buk-och pleuralhåligheter och petechiae på tungan, i buckalhålan och på hovarna observeras ofta.
överföring av sjukdomen
infekterad utsöndras ett stort antal klamydier i moderkakan och fostervätskor vid skoj och vid abort. Vissa getter kan kasta klamydia i vaginala vätskor från mer än två veckor före abort till mer än två veckor efter abort. Detta kan förklara den högre förekomsten av abort hos nyinfekterade getbesättningar, eftersom mottagligheten för infektion varierar i förhållande till djurets fysiologiska status. Getter som är mindre än 100 dagar gravida är mer mottagliga än de i slutet av graviditeten eller de som är karga. Mindre mängder klamydia kan också kasta i urin, mjölk och avföring under flera dagar efter abort.
unga getter födda från infekterade mödrar kan behålla infektionen i besättningen eller överföra den till andra besättningar. Undersökningen av en grupp på 27 åringar i en infekterad besättning under deras första levnadsår visade hur de kunde sprida sjukdomen genom att inte upptäckas av deras serologiska svar. Dessa unga getter kan delas in i 3 grupper enligt dräktighet/förlossning. Den första gruppen killade normalt ett levande barn, den andra gruppen var karg eller hade avbrutit för tidigt under graviditeten för att upptäckas och i den tredje gruppen hade getter avbrutits. Komplementfixeringsantikropparna (CF) från de två första grupperna ökade för att nå ett maximum (1/80 – 1/160) vid tidpunkten för avel, sedan minskade antikroppsnivåerna fram till skämttiden . Den tredje gruppen hade en CF-antikroppstiter rollen den venerala överföringen av klamydios av män behöver fortfarande undersökas. Genitala infektioner hos ramar och tjurar resulterar emellertid i manlig infertilitet och sterilitet snarare än abort hos kvinnor. Den roll som sjukdomen spelar i oanvänd tarminfektion och dess inflytande i epidemiologin av chlamydial abort måste undersökas. Den senaste identifieringen av molekylära markörer för tarmstammar i getter skulle möjliggöra sådana studier.
diagnos
diagnosen utförs vanligtvis genom detektering av bakterier i smuts eller intryck av moderkakan i kombination med serologisk analys av minst tio sera-prover.
färgning av klamydia med stämpel, Gimenez eller Machiavello metoder är snabb och kan genomföras enkelt i de flesta laboratorier men dess tolkning är ofta svårt eftersom det kräver en erfaren person att skilja klamydia från Brucella och Coxiella. Immunofluorescens med användning av immunoglobulinkonjugat märkta med fluorescerande märkt isotiocyanat, ökar känsligheten och specificiteten av detektering av klamydia i utstryk eller placenta intryck.
närvaron av chlamydiala antigener i mark placenta eller vaginala swabs samplade strax efter abort kan detekteras av ELISA med diagnostiska kit utvecklade för humana C. trachomatis infektioner .
i humanmedicin anses polymeraskedjereaktion (PCR) eller dess variation, ligaskedjereaktion (LCR) vara de mest känsliga diagnostiska metoderna som finns tillgängliga för diagnos av klamydia. Flera primers som är gemensamma för alla typer av klamydia, som Omp1, genen som kodar för det huvudsakliga yttre membranproteinet , eller specifikt för C. psittaci eller C. pecorum eller av serotyp-1 C. psittaci-stammar har utvecklats för veterinär applikation. Men denna teknik är fortfarande dyr.
komplementfixeringstestet (CFT) är det mest använda och anses vara guldstandarden för serologisk diagnos. CFT är dock inte särskilt känsligt och inte specifikt eftersom testet använder ett antigen som jag brukar med C. pecorum, som de flesta getter hamnar i tarmen. Därför är positiva reaktioner med titrar mellan 1:10 och 1:40 inte specifika För abort men kan relatera till en tarminfektion med C. pecorum. CFT-testet bör helst göras 3 till 6 veckor efter abort eller lammning, när antikroppssvaret är på sin maximala nivå. CFT-testet kan inte användas för individuell diagnos eller för att upptäcka infektion hos unga eller hos män .
flera försök gjordes för att utveckla mer specifika tekniker, som skulle skilja mellan C. psittaci och C. pecorum infektioner. Ingen av dessa tester var dock tillräckligt känsliga och specifika. Nyligen har en ny indirekt enzymbunden immunosorbentanalys (ELISA) baserad på ett rekombinant antigen som uttrycker en del av ett protein på 80-90 kDa utvecklats . Testet reagerar med serumantikroppar som framkallas tidigt mot dessa mycket immunogena multigena familjeproteiner . Detta test har hög känslighet och hög specificitet .
behandling
tetracykliner påverkar replikationen av klamydia och kan vara effektiva för att förebygga aborter. Injektionen av 20 mg/kg oxytetracyklin ges intramuskulärt vid 105 och 120 dagar av graviditeten kan förhindra abort men kan inte förhindra chlamydial shedding vid skojar.
Vaccination
dödade vacciner kan minska förekomsten av abort men inte utsöndringen av klamydia vid skojar. Abort inducerar en tillräckligt stark immunitet för att klara senare utmaningar , Ett levande vaccin som utgörs av en temperaturkänslig mutant av C. psittaci-stammar utvecklades . Mottagliga getter vaccinerades före parning och ingen störning med den efterföljande dräktigheten noterades. Getter skyddades mot chlamydial abort och chlamydial shedding vid skojar förhindrades. Men när alla getter i en infekterad besättning vaccineras det första året och alla ersättningsdjur vaccineras på efterföljande år, kan det ta ungefär 3 år innan aborterna slutar. Detta beror på latent infektion hos getter, getter som smittades före vaccination men inte hade avbrutits. Vaccination kommer inte att förändra en latent infektion. Dessa getter kan avbryta eller kan kid friska eller infekterade barn på sikt och kan eller inte kan kasta klamydia. Så länge getter med latent infektion förekommer i en besättning, är det inte tillrådligt att sluta vaccinera (annars skulle aborter börja på nytt), och det är inte heller möjligt att sälja vaccinerade djur, med undantag för uppfödare som vaccinerar sin flock regelbundet.
framtidsutsikter
utvecklingen av ett vaccin, lika effektivt som det levande vaccinet som nämns, som skulle skydda och möjliggöra serologisk upptäckt av infekterade getter i vaccinerade flockar, skulle vara mycket användbart för att bekämpa sjukdomen. Utarmning av ”diagnosspecifikt antigen” från levande vaccin är för närvarande inte ett alternativ eftersom lämpliga genetiska och molekylära metoder ännu inte är tillgängliga och det verkar svårt att ta bort denna proteinfamilj. Av dessa skäl skulle ett acellulärt vaccin, som skyddar mot abort och utsöndring, vara av intresse. Tidigare studier har visat att både T-och B-lymfocyter är involverade i skyddande immunitet . I murina modeller spelar CD8 + T-celler (Lyt 2+ i mus) en viktig roll i skyddet efter överföring av primerade mjältceller . Hittills, C. psittaci t-cellantigener och epitoper är okända. Även om försiktighet måste iakttas vid extrapolering av C. trachomatis-resultat till C. psittaci, har flera t-cellepitoper identifierats på C. trachomatis major outer membrane protein (MOMP)
antikropparnas roll för att förhindra placenta-och fosterinfektion av C. psittaci har visats hos möss. Passiv överföring av specifika polyklonala sera inducerar signifikant immunitet om än lägre än t-cellmedierat skydd . Monoklonala antikroppar (Mabs) som neutraliserar C. psittaci infektivitet in vitro ger en anmärkningsvärd immunitet mot gravida möss efter intravenös utmaning eftersom abort och fosterkolonisering elimineras . Humoral immunitet är inblandad i skydd. Dess effektivitet beror på koncentrationen av specifika antikroppar mot lämplig epitop. Alla skyddande mAbs isolerade hittills reagerar med värmekänsliga konformationsepitoper belägna på en MOMP-oligomer .
därför kan MOMP-oligomeren vara en potentiell vaccinkomponent . Det är emellertid inte möjligt att producera detta antigen genom extraktion från chlamydiae, eftersom produktionskostnaden skulle överstiga det som en jordbrukare skulle överväga överkomligt för ett GET-eller fårvaccin. Därför måste alternativa metoder för vaccinproduktion undersökas.
genereringen av rekombinant MOMP-oligomer kan vara svår. Genen som kodar för MOMP, Omp1, är väl karakteriserad, men högnivåuttryck av fullängdsgenen från en oreglerad promotor är giftig för E. coli. Av denna anledning genomfördes olika experimentella strategier för generering av de skyddande epitoperna. Vi försökte efterlikna de skyddande epitoperna med monoklonala antidiotypiska antikroppar, eller konformationellt begränsad peptidmimotop, men ingen av dem var effektiva. Vi bestämde oss för att bedöma vaccinationen av möss med DNA-vaccin som DNA-vaccination med MOMP-genskyddade möss mot C. trachomatis och kalkoner mot C. psittaci . Hittills erhölls endast partiellt skydd men ytterligare forskning (på målgen, koncentration av DNA, vaccinationsväg etc.) behövs för att veta om möss kan skyddas med ett DNA-vaccin lika effektivt som med levande vaccin.