rezumat
am folosit un sistem de cultură clonală în două etape pentru a demonstra fără echivoc că celulele progenitoare limfohemopoietice primitive individuale au capacitatea de diferențiere fie de-a lungul liniei mieloide, fie de-a lungul liniei limfoide B. Celulele măduvei murine foarte îmbogățite au fost placate individual în cultură prin micromanipulare în prezența mediului condiționat al celulelor splinei stimulate de mitogen, eritropoietină, factor de oțel (SF) și interleukină (IL) 7. Patruzeci și cinci la sută din celulele unice au format colonii primare care exprimă mai multe linii hemopoietice. Când alicote din colonii individuale au fost replatate în cultura secundară de metilceluloză care conține SF și IL-7, 41% din coloniile primare au dat naștere coloniilor de limfocite. Celulele coloniilor de limfocite au fost blast-like și B220+, sIg -, Mac-1-, Gr-1-, Ly-1 -, L3T4-, Ly-2-și CD3 -. Treizeci până la 70% din celule au fost Thy-1+. ARNm cu lanț mu a fost detectat în majoritatea celulelor prin hibridizare in situ cu o sondă ARN antisens. Când coloniile de limfocite derivate dintr-o singură celulă au fost grupate și injectate individual la șoareci scid, IgM de tip donator a fost măsurabil în serul șoarecilor, iar splinele conțineau celule donatoare de tip B. Apoi am efectuat screeningul inițial al factorilor de creștere pentru a identifica factorii de creștere care ar putea înlocui mediul condiționat al celulelor splinei stimulat de mitogenul pokeweed în cultura primară. Combinațiile a doi factori care au inclus SF plus IL-6, IL-11 sau factorul de stimulare a coloniilor granulocitare au fost toate eficiente în cultura primară în menținerea potențialului limfoid B. Interesant este că IL-3 nu ar putea nici să înlocuiască, nici să acționeze sinergic cu SF pentru a susține potențialul limfoid al culturilor primare. Observațiile noastre demonstrează că mulți progenitori primitivi despre care se credea anterior că sunt angajați mieloizi posedă, de asemenea, potențial limfoid B. Acest sistem de cultură ar trebui să se dovedească valoros pentru elucidarea mecanismelor care reglementează stadiile incipiente ale limfohemopoiezei.