materiale și metode
după primirea consimțământului scris informat de la pacienți, am examinat farmacocinetica la starea de echilibru a clonidinei administrate oral în plasma a 17 femei gravide cărora li s-a administrat clonidină în timpul sarcinii medii (22-26 săptămâni de gestație) sau în timpul sarcinii târzii (34-38 săptămâni de gestație). Șase dintre aceste femei au participat la prelevări de probe de plasmă materne și din cordonul ombilical (arterial și venos) la momentul livrării pentru măsurarea concentrațiilor de clonidină. Vârsta gestațională s-a bazat pe ultima perioadă menstruală sau pe datarea timpurie cu ultrasunete.
Selectarea Subiectului. Acest studiu a fost aprobat de Universitatea din Washington Investigational Review Board. Subiecții au fost eligibili să participe dacă erau gravide, cu vârsta de 18 ani, aveau un hematocrit de 28% și primeau clonidină orală pentru hipertensiunea maternă.
Regim De Dozare. Tratamentul cu clonidină orală nu a fost modificat în scopuri de studiu. Dozele au variat de la 0,15 la 0,30 mg pe zi, administrate în doze divizate. Durata studiului farmacocinetic a fost dependentă de intervalul de dozare al subiectului, care a variat de la 6 la 12 ore. timp de 3 zile înainte de studiu, au fost furnizate comprimate de clonidină orală, din același lot de fabricație. Subiecții au înregistrat timpul fiecărei doze într-un calendar de studiu. Subiecții au luat doza de clonidină de dimineață în decurs de 30 de minute de la ora 8:00. Dozele ulterioare au fost luate în decurs de 30 de minute de la orele de administrare programate. În dimineața studiului farmacocinetic, subiecții au fost rugați să postească, cu excepția lichidelor limpezi, timp de 5 ore înainte de administrarea clonidinei până la 1 oră după administrare.
Colectarea Probelor. Probele de plasmă în serie au fost colectate în următoarele momente: 0, 0.5, 1, 1.5, 2, 3, 4, 6, 8, 10, și 12 h postdosing, sau trunchiate pentru a corespunde intervalului de dozare al subiectului. Urina a fost colectată pe parcursul unui interval de administrare pentru a determina clearance-ul renal al clonidinei și clearance-ul creatininei. Probele de plasmă, cordonul matern și ombilical (arterial și venos), au fost colectate la momentul livrării pentru cuantificarea concentrațiilor de clonidină. Toate probele au fost depozitate la -80 centimetric C până la analiza probei.
Concentrații De Clonidină. Concentrațiile plasmatice de clonidină au fost cuantificate utilizând un test validat de cromatografie lichidă/spectrometrie de masă (LC/MS). Pe scurt, 250 de probe de plasmă au fost amestecate cu 500 pg de standard intern (clonidină-d4) în 500 de unqql de carbonat de sodiu (0,1 m) (pH = 9,3) și 3 ml de alcool heptan/izoamilic (98,5:1,5). Standardele au fost pregătite prin creșterea plasmei goale cu 0, 12.5, 25, 50, 100, 200, 250, 375, 500, și 750 pg de clonidină. Probele au fost agitate pe un agitator orizontal timp de 15 minute la temperatura camerei. După centrifugare (1500g timp de 10 min), probele au fost înghețate pe gheață uscată și stratul organic decantat într-un tub de cultură curat. Două mililitri de alicote de acid sulfuric (0,05 M) au fost adăugate la stratul organic și agitate din nou timp de 15 minute. După centrifugare (1500g timp de 10 min), probele au fost înghețate pe gheață uscată și stratul organic a fost aruncat. O alicotă de 200-unqutl de 29.29% hidroxid apos de amoniu a fost adăugat la stratul apos împreună cu 3 ml de alcool heptan/izoamilic (98,5:1,5) și agitat timp de 15 min. După centrifugare (1500g timp de 10 min), probele au fost înghețate pe gheață uscată și stratul organic decantat într-un tub de cultură curat. Stratul organic s-a evaporat sub un curent de azot la 40 centimetrii C. reziduul a fost reconstituit cu 75 centimetrii de acid formic (12 mm)/metanol (60:40), din care 10 centimetrii au fost injectați în sistemul LC/MS.
probele de urină de 250 oqql au fost amestecate cu 250 oqql de acid formic (12 mM) și 50 ng de standard intern (clonidină-d4). Standardele au fost pregătite prin creșterea urinei goale cu 0, 1.25, 2.5, 6.25, 12.5, 18.75, și 25 ng de clonidină, respectiv. Probele au fost vortexate, iar 1 unqql a fost injectat pe LC/MS.
sistemul LC / MS a fost un Agilent 1100 MSD (Agilent Technologies, Santa Clara, CA) format din pompă binară, autosampler, compartiment coloană și spectrometru de masă. Coloana de cromatografie lichidă de înaltă performanță a fost un PHENOMENEX Synergi polar RP80A, 250 mm 2.0 mm, 4 mm (Phenomenex, Torrance, CA). Coloana s-a menținut la 40 C. componentele fazei Mobile au fost acidul formic (a) și metanolul (B) de 12 mM, cu un debit inițial de 0,25 ml/min. Faza mobilă inițială a fost menținută timp de 1 min și a constat în 40% B pentru probele de plasmă și 35% B pentru probele de urină. Procentul de B a fost crescut liniar în următoarele 4 minute până la 90% pentru plasmă și 60% pentru urină și apoi menținut constant timp de 1 minut, cu o creștere a fluxului liniar la 0,3 ml/min pentru urină și plasmă. Pentru gradientul de retur, procentul de B a fost apoi scăzut liniar peste 1 min până la 40% (plasmă) sau 35% (urină), care a fost apoi menținut constant. Debitul a fost menținut la 0,3 ml / min Timp de 1 min și apoi a scăzut liniar peste 1 min până la 0,25 ml/min și apoi s-a menținut constant. Timpul total de rulare a fost de 12,5 min. Atât pentru testele de plasmă, cât și pentru cele de urină, spectrometrul de masă a fost operat în modul electrospray pozitiv și setat pentru monitorizarea selectivă a ionilor m/z 230 (clonidină) și m/z 236 (clonidină-d4) cu timp de staționare de 289 msec pentru fiecare ion.
Parametrii Farmacocinetici. Parametrii farmacocinetici la starea de echilibru au fost determinați utilizând tehnici non-comparative standard. Aria de sub curba concentrației plasmatice în funcție de timp a clonidinei pe un interval de administrare (ASCt) a fost calculată utilizând regula trapezoidală liniară. Clearance-ul aparent oral (CL/F) a fost calculat prin CL/F = doză/ASCt. Clearance-ul renal al clonidinei (CLrenal) s-a calculat prin CLrenal = ae,ect/ASCt, unde Ae,ect = cantitatea de clonidină excretată nemodificată în urină pe parcursul unui interval de administrare. Clearance-ul creatininei a fost calculat prin CrCl = (VolumeUrine Hectolix CreatinineUrine)/(CreatinineSerum XlX). Clearance – ul renal al clonidinei ajustat în funcție de rata de filtrare glomerulară (RFG) a fost calculat prin ajustarea Clrenalului pentru RFG = rccr clrenal-fu, unde s-a presupus că fracția nelegată în plasmă (fu) este de 0,80 (Hulter et al., 1979). La toți subiecții noștri, intervalul relativ scurt de administrare nu a permis estimarea exactă a timpului de înjumătățire plasmatică al clonidinei, care a fost raportat anterior a fi de 11,1 3,3 și 10,8 2,2 ore la adulții sănătoși care nu sunt însărcinați (Cunningham și colab., 1994; Fujimura și colab., 1994).
statistici. Parametrii farmacocinetici ai clonidinei în timpul sarcinii au fost comparați cu parametrii publicați anterior la voluntari sănătoși, care nu sunt însărcinați (CL/F, Porchet și colab., 1992; Cunningham și colab., 1994) (CLrenal, Fujimura și colab., 1994). Regresia liniară a fost utilizată pentru a determina corelația dintre clearance-ul creatininei și clearance-ul renal al clonidinei. Testul T al elevului nepereche a fost folosit pentru a compara grupurile însărcinate și cele care nu sunt însărcinate. O valoare p < 0,05 a fost considerată semnificativă. Toate rezultatele sunt raportate ca medie S. D.