studiul
pentru a evalua efectul administrării în masă a medicamentului folosind ivermectină și albendazol pentru eliminarea filariazei limfatice asupra prevalenței și intensității STH, am colectat probe de scaun pe o perioadă de 3 ani în 2 zone diferite din Districtul Foya (Județul Lofa) din nord-vestul Liberiei și din Districtul Harper (Maryland județ) în sud-estul Liberiei (10). Am examinat o singură probă de scaun pentru fiecare subiect prin microscopie (mărire 100 cu un număr dublu de frotiuri Kato-Katz (șablon de 41 mg). Am păstrat alicote de exemplare selectate aleatoriu pe carduri FTA (GE Healthcare, Little Chalfont, Marea Britanie) sau în RNAlater (ThermoFisher, Waltham, MA, SUA) și le-am expediat la școala de Medicină a Universității Washington (St.Louis, MO, SUA) pentru analiză de către qPCR. Doi microscopiști cu experiență (L. G., A. T. Momolu) au examinat probele prin frotiu Kato-Katz în ambele zone de studiu. Pentru detectarea STH de către qPCR, am extras ADN din 100 mg de scaun și l-am testat așa cum este descris de Pilotte și colab. (5) cu un Termocicler Quantstudio 6 Flex (Applied Biosystems, Carlsbad, CA, SUA) și Taqman fast Advanced Mastermix (Applied Biosystems). Am folosit următorii primeri și sonde pentru a detecta ADN-ul Schistosoma mansoni: primer forward 5′-TGTGGGGTCTTTGGTTGTT-3′, primer reverse 5′-CAACATGACTGGGAACAGGA-3′, sondă 5′-AGGTTCAGGTGG/ZEN/GTGTGTTACGAA-31abkfq-3′.
am testat 353 de probe de scaun din Districtul Foya prin frotiu Kato-Katz; 31 (8,8%) au fost pozitive pentru A. ouă lumbricoides, 231 (65,4%) pentru ouă de vierme, 27 (7,6%) pentru ouă asemănătoare T. trichiura și 276 (78,2%) pentru ouă S. mansoni. Am testat 225 de probe din Districtul Harper prin frotiu Kato-Katz; 163 (72,4%) au fost pozitive pentru ouăle A. lumbricoides, 65 (28,9%) pentru ouăle hookworm și 51 (22,7%) pentru ouăle T. trichiura (Tabelul 1). A existat un acord bun între rezultatele testelor Kato-Katz și qPCR pentru exemplarele de la Harper (80,5% -91,6%), dar, în general, qPCR a avut o sensibilitate mai mare. Rezultatele noastre au fost în concordanță cu rezultatele raportate anterior cu probe din alte zone (3,11). Acordul dintre cele 2 teste de diagnostic pentru probele din Foya a variat de la 77,3% la 92,9%, dar sensibilitatea qPCR a fost neașteptat de scăzută, o constatare care a fost valabilă în special pentru infecția cu Ascaris și Trichuris (Tabelul 1). În timp ce probele pozitive pentru Ascaris de Kato-Katz, dar negative de qPCR au avut un număr scăzut de ouă, probele pozitive pentru Trichuris de Kato-Katz, dar negative de qPCR, au avut un număr mai mare; 7 probe conțineau >1.000 de ouă în formă de butoi/g de Scaun (Tabelul 2). Am repetat extracția ADN – ului și qPCR și am folosit, de asemenea, o alternativă qPCR pentru T. trichiura (3), dar aceste teste nu au îmbunătățit acordul dintre microscopie și rezultatele qPCR.
Tabelul 1
| sit și specie | nr. pozitiv * | sensibilitate la frotiu Kato-Katz, % | sensibilitate qPCR, % | valoare McNemar p |
| Districtul Foya, n = 353 | ||||
| Ascaris lumbricoides | 34 | 91.2 | 17.6 | <0.0001 |
| Hookworm† | 247 | 93.5 | 83.4 | <0.0001 |
| Trichuris trichiura | 27 | 100 | 7.4 | <0.0001 |
| Schistosoma mansoni | 307 | 89.9 | 84.0 | 0.0573 |
| Districtul Harper, n = 225 | ||||
| A. lumbricoides | 180 | 90.6 | 98.9 | 0.0013 |
| Hookworm† | 99 | 65.7 | 89.9 | 0.0005 |
| T. trichiura | 86 | 59.3 | 94.2 | 0.0001 |
*probele care au fost testate pozitiv prin oricare dintre metode.
ox.hookworm a fost Necator americanus. Nu a fost detectat nici un Ancylostoma duodenale.
Tabelul 2
| Demografie | microscopie, epg | qPCR, pragul ciclului | |||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Anul | pacientul nr. | vârstă și sex | sat | Tt | Al | Hk | Sm | TT | Al | Na | SM | ||
| 2014 | P320529 | 45 / F | Yallahun | 576 | 0 | 360 | 24 | Neg | Neg | 31.7 | 30.5 | ||
| P320683 | 35 / F | Kpombu | 12 | 0 | 0 | 0 | Neg | Neg | Neg | 28.4 | |||
| P320695 | 16 / M | Kpombu | 24 | 0 | 0 | 72 | Neg | Neg | Neg | 23.8 | |||
| P320620 | 15 / M | Foya-Dundu | 12 | 120 | 0 | 288 | Neg | Neg | 32.2 | 23.5 | |||
| P320746 | 9/F | Bandenin | 24 | 0 | 0 | 0 | Neg | Neg | Neg | 26.51 | |||
| P320452 | 7 / F | Felaloe | 12 | 0 | 0 | 120 | Neg | Neg | Neg | 23.9 | |||
| P320596 | 6 / F | Foya-Dundu | 12 | 0 | 0 | 90 | Neg | Neg | Neg | 27.6 | |||
| P320656 | 6 / F | Kpombu | 120 | 0 | 0 | 504 | Neg | Neg | Neg | 21.3 | |||
| 2016 | P331772 | 36 / M | Kpormbu | 3,048 | 0 | 12 | 24 | Neg | Neg | Neg | Neg | ||
| P331921 | 35 / M | Felaloe | 60 | 0 | 0 | 12 | Neg | Neg | Neg | Neg | |||
| P331783 | 34 / F | Kpormbu | 420 | 0 | 0 | 0 | Neg | Neg | Neg | Neg | |||
| P330724 | 26/M | Keyabendu | 4,224 | 0 | 0 | 456 | Neg | Neg | Neg | 30.4 | |||
| P331791 | 6 / F | Kpormbu | 12 | 0 | 156 | 12 | Neg | Neg | 33.1 | 33.4 | |||
| P331962 | 6/F | Bandenin | 12 | 0 | 0 | 168 | Neg | Neg | Neg | 29.6 | |||
| P331983 | 6/F | Bandenin | 36 | 0 | 0 | 5,304 | Neg | Neg | Neg | 28.1 | |||
| 2017 | P341287 | 61 / M | Mendikorma | 1,464 | 0 | 0 | 0 | Neg | Neg | Neg | 33.1 | ||
| P341282 | 56 / M | Mendikorma | 540 | 0 | 216 | 0 | Neg | Neg | 28.3 | Neg | |||
| P341284 | 50 / M | Mendikorma | 60 | 0 | 0 | 132 | Neg | Neg | Neg | Neg | |||
| P342148 | 45/M | Keyabendu | 1,368 | 0 | 0 | 192 | Neg | Neg | 34.5 | Neg | |||
| P340246 | 39 / M | Kamatahun | 120 | 0 | 0 | 216 | Neg | Neg | Neg | 30.0 | |||
| P340307 | 19 / F | Bambuloe | 2,028 | 0 | 0 | 1,188 | Neg | Neg | Neg | 24.1 | |||
| P340133 | 12 / M | Fokolahun | 1,020 | 16,392 | 0 | 0 | 25.3 | 16.7 | Neg | Neg | |||
| P340183 | 9 / F | Kpelloe Ndama | 72 | 0 | 0 | 0 | Neg | Neg | Neg | 36.0 | |||
| P341308 | 9 / F | Mendikorma | 36 | 0 | 108 | 0 | Neg | Neg | Neg | 28.5 | |||
| P341326 | 9 / M | Mendikorma | 456 | 0 | 0 | 0 | Neg | Neg | 26.5 | 30.4 | |||
| P341327 | 6 / M | Minciună | 2,076 | 0 | 0 | 0 | Neg | Neg | Neg | Neg | |||
| P340147 | 5 / M | Fokolahun | 48 | 0 | 0 | 0 | 30.94 | 26.93 | Neg | Neg | |||
*T. infecția cu trichiura a fost confirmată de qPCR la doar 2 pacienți, dar 25 au avut ouă de Capillaria în scaun. Al, Ascaris lumbricoides; epg, ouă pe gram de scaun; Hk, hookworm; Na, Necator americanus; Neg, negativ; Sm, Schistosoma mansoni; Tt, T. trichiura.
pentru a verifica în continuare dacă probele de scaun Kato-Katz-pozitive, qPCR-negative conțineau ouă de T. trichiura, am examinat frotiurile directe ale probelor de scaun conservate în RNAlater prin microscopie (mărire 100 și 400) (figura). Probele pozitive prin qPCR au conținut ouă (6 măsurate)cu morfologie tipică T. trichiura; aceste ouă au o medie (±ds) lungimea de 52 µm (±2.4 µm) și o lățime de 25,5 µm (±1.3 µm). În contrast, qPCR-probe negative conținute de ouă (31 de măsurat), cu o medie (±ds) lungime de 51,8 µm (±1.5 µm) și lățimea de 32.7 µm (±2.1 µm). Probele qPCR-negative au avut, de asemenea, dopuri mai puțin pronunțate și o coajă groasă, striată, caracteristici care sunt în concordanță cu ouăle de Capillaria hepatica (syn. Calodium hepaticum) și alte specii Capillaria (Trichuridae). Ouă de C. philippinensis sau C. aerofilele care au fost observate anterior în probele de scaun uman au fost fie mai mici, fie mai mari decât ouăle Capillaria găsite în Lofa (12,13). Deoarece dopurile polare ale acestor ouă sunt mai puțin proeminente decât cele ale T. trichiura și pentru că formele lor sunt uneori mai ovale sau rotunde, ele pot fi confundate și cu ouăle A. lumbricoides prin microscopie cu putere redusă, mai ales dacă au fost detectate doar câteva ouă (figura).
ouă de Helminth găsite în probe de scaun de la persoane din județul Lofa, Liberia. A, B) ouă de Trichuris trichiura în probe pozitive pentru T. trichiura prin frotiu Kato-Katz și prin qPCR. C-F) ouă de Capillaria spp. în probele pozitive pentru T. trichiura prin frotiu Kato-Katz, dar negative pentru T. trichiura prin qPCR. G) ou de Capillaria spp. în eșantion pozitiv pentru Ascari lumbricoides de frotiu Kato-Katz, dar negativ pentru A. lumbricoides de qPCR. H) ou de A. lumbricoides în probă pozitivă pentru A. lumbricoides prin frotiu Kato-Katz și qPCR. Barele de scară indică 20 de metri cubi. qPCR, PCR cantitativ.
membrii subfamiliei Capillaridae sunt paraziți animale cu cicluri de viață oarecum divergente și majoritatea nu infectează oamenii. Apar pseudoinfecții cu C. hepatica; ouăle găsite în scaun sunt prezente deoarece au fost consumate în ficatul animal infectat. Cu toate acestea, infecțiile reale cu C. hepatica nu duc la trecerea ouălor în scaun (9). Alte specii, cum ar fi C. philippinensis, provoacă infecții adevărate (și autoinfecție) cu ouă găsite în scaun; infecția este legată de consumul de pește crud. Capilarioza umană nu a fost raportată din Liberia și au fost publicate doar rapoarte de caz izolate din Africa Subsahariană (7-9). Am efectuat secvențierea ADN – ului pentru a caracteriza mai bine speciile Capillaria găsite în Foya. Folosind primerii Kt875351.1 (5′-CCCTAGTTGCGACTTTAAACGA – 3′) și Capillaria 18S1R (5′-TCCACCAACTAAGAACGGCC-3′), am reușit să amplificăm și să secvențiem o porțiune de 288-bp a ADNR 18S din probe T. trichiura qPCR-negative care conțineau doar ouă identificate morfologic ca Capillaria spp. (GenBank accession nr. MG859285). Fragmentul ADN a fost 100% identic cu ortologii C. hepatica (aderarea nr. MF287972. 1), Aonchotheca putorii (C. putorii) (acces nr. LC052356. 2) și Pearsonema plica (C. plica) (acces nr. MF621034. 1), specii de viermi Capillaria care au cicluri de viață diferite și specii gazdă, dar care sunt doar 95% identice cu ortologul lui T. trichiura.
ciclul de viață și importanța medicală a speciilor Capillaria găsite la om în nord-vestul Liberiei rămân să fie elucidate. În studiul nostru, unii subiecți au prezentat încărcături mari de ouă Capillaria care pot indica o infecție adevărată, mai degrabă decât pseudoinfecție. Cu toate acestea, la persoanele cu pseudoinfecții s-a raportat un număr mare de ovule tranzitorii (7). În timp ce consumul de carne de tufiș în Foya este obișnuit, consumul de pește crud sau insuficient, care este necesar pentru transmiterea C. philippinesis, este rar.