discuție
viermii adulți C. sinensis care au fost incubați în bulion au produs mai mult de 4000 de ouă/vierme/zi la început. Ulterior, numărul de ouă a scăzut la puțin peste 1.000 în ziua 7 și la 300-400 în ziua 14. Numărul a devenit mai mic decât 100 la ziua 28 în mediul de bulion. Numărul a fost similar între ele între 3 medii de bulion. Contrar acestui fapt, numărul din soultion Locke a fost de 220 XTX 44 și 1023 XTX 64 în ziua 1 și, respectiv, 3. Aceste numărări au fost mai mici decât cele din mediile de bulion la început, dar viermii au produs mai multe ouă în ziua 21 și mai târziu. Viermii din mediul de bulion și-au produs ouăle mai energic în faza timpurie a incubației, în timp ce cei din soluția Locke au produs mai puține ouă zilnic, dar pentru o perioadă mai lungă. Numărul zilnic de ouă de 4.000 de către un vierme adult a fost compatibil cu numărul mediu estimat de 3.770 de ouă de la un om infectat .
pe baza numărului de ouă, numărul total de ouă produse de un vierme adult incubat, care a fost recuperat de la iepuri după 8 săptămâni de infecție, a fost estimat la 37.274 2.988 în medie. Aceste numărări totale de ouă au fost similare indiferent de soluția de cultivare sau de mediul de cultivare. Numărul zilnic de ouă a scăzut rapid și uterul a devenit gol în timpul cultivării. Prin urmare, numărul zilnic actual de ouă a reprezentat faptul că viermii cultivați in vitro au produs numai ouăle intrauterine care au fost preformate în uter în timp ce trăiau la iepuri înainte de cultivare. Pe baza datelor, se estimează că un gravid C. sinensis conține aproximativ 37.000 de ouă în uter și produce aproximativ 4.000 de ouă în fiecare zi. În consecință, ouăle pot rămâne în uter în jur de 10 zile pentru maturarea intrauterină. Majoritatea ouălor din uter au fost găsite mature și miracidiul s-a dezvoltat deja, dar unele dintre ele au fost imature în principal în uterul proximal. Aceste ouă imature nu au reușit să se dezvolte în continuare în timpul cultivării. Aceste constatări sugerează că viermii cultivați nu sunt în măsură să formuleze noi ouă viabile, iar maturarea ouălor imature preformate este, de asemenea, imposibilă prin cultivarea in vitro.
ouăle C. sinensis au dimensiuni cuprinse între 28-31, 13-16, având un operculum la capătul conic și un mic buton abopercular . În studiul de față, ouăle expulzate au prezentat contur anormal, deoarece viermele a supraviețuit mai mult. Lungimea medie a oului a fost redusă treptat și semnificativ în soluția de Locke (27,49 0,48 0,48 XCT) și în toate mediile de bulion. Reducerea lungimii a dus la reducerea valorii FMI. FMI a fost propus ca parametru pentru analiza biometrică pentru a aproxima volumul ouălor pentru flukes heterophyid și opisthorchiid . În cadrul prezentei anchete, valorile FMI au scăzut în ziua 60 în soluția Locke și în ziua 90 în mediile de bulion. Scăderea valorilor FMI sugerează reducerea volumului ouălor prin contracția lungimii și degenerarea conținutului. Majoritatea ouălor produse după 60 de zile de cultivare in vitro au fost deformate, iar raportul lungime/lățime a fost mai mic de 1,7, iar valoarea FMI a fost mai mică de 7.000. Majoritatea acestor ouă au fost determinate neviabile atunci când au fost colorate cu albastru trypan. Cultivarea timp de 60 de zile ar putea fi perioada maximă de viabilitate a ouălor.
observarea microscopică ușoară a evidențiat acumularea de vacuole și mase întunecate în interiorul cojii de ou, deoarece cultivarea a durat mai mult de 60 de zile. Vacuolele și masele întunecate păreau a fi celule vitelline deformate așa cum se arată în O. viverrini . Aceste materiale din ouă au sugerat că celulele vitelline sau alte materiale care formează ouă au fost degenerate, iar ouăle au fost abortive. Ouăle mature care formează miracidium pot supraviețui mult timp, dar cele avortate nu. Degenerarea materialelor interioare ar fi putut induce deformarea și reducerea volumului ouălor. Un studiu a constatat ouă deformate atunci când adulții maturi Echinostoma caproni gravid stocate în soluția Locke până la 4 luni la 4 c . O posibilă explicație pentru modificările de mai sus poate fi tăbăcirea necorespunzătoare a chinonei, care este asociată procesului de formare a cojii de ou . Este posibil ca cultivarea in vitro pe termen lung să fi afectat acest proces enzimatic mediat de fenol-oxidază, rezultând o coajă de ou deformată . Astfel, cultivarea prelungită in vitro a C. sinensis poate deforma ouăle, precum și viabilitatea acestora.
ouăle Mature de C. sinensis conțin un buton abopercular foarte discret. O. viverrini, un fluke hepatic strâns legat, arată, de asemenea, un buton abopercular foarte mic până la ușor dezvoltat al ouălor . În studiul de față, butonul abopercular al cojii de ou a devenit mai proeminent în majoritatea ouălor după 60 de zile de incubație. Apariția unui astfel de proeminentbutonul popercular a fost evident în majoritatea ouălor degenerate. Krejci și Fried au demonstrat că butonul abopercular poate fi superficial sau profund infolded în coaja de ou în cazul Echinostoma caproni și E. trivolvis respectiv. În studiul de față nu s-a observat înclinarea butonului abopercular din jurul cochiliei. Butonul abopercular proeminent poate fi o extensie a butonului normal inconspicuos existent ca răspuns la fiziologia în schimbare a viermilor muribunzi. Luate împreună, este dificil pentru flukes să producă ouă viabile normale prin cultivarea in vitro.
structura suprafeței ouălor, observată de SEM, părea a fi o caracteristică morfologică adecvată pentru înțelegerea stării cojii ouălor. Printre opisthorchiide, suprafața ouălor C. sinensis este extrem de sculptată pentru a face riduri intercalate de înălțime variabilă, ceea ce ajută la capacitatea de a acumula fibre acvatice naturale și de a crește posibilitatea contactului cu gazdele de moluște , . În studiul de față, scăderea ridurilor de suprafață a fost observată de SEM a ouălor avortate. Această diminuare a ridurilor cu butonul abopercular proeminent poate fi un rezultat al procesului de degenerare a cojii de ou.
studiul de față a avut câteva limitări. Nu au existat date directe privind viabilitatea ouălor pentru a fi comparate cu modificările morfologice. Incubarea in vitro a ouălor poate oferi informații exacte viabilității ouălor, dar cea a ouălor C. sinensis este încă incapabilă. De asemenea, datele privind morfologia și fiziologia viermilor incubați au fost limitate.
în concluzie, c cultivat. viermii sinensis din mediul de bulion trec ouă viabile timp de 60 de zile, care sunt preformate în uter în timpul supraviețuirii lor la iepuri. Ouăle imature preformate nu sunt capabile să dezvolte miracidium prin cultivarea in vitro. Un adult matur C. sinensis conține aproximativ 37.000 de ouă în uter și produce aproximativ 4.000 de ouă zilnic. Ouăle deformate cu valoarea FMI mai mică de 7.000 și raportul lungime/lățime mai mic de 1,7 sunt neviabile.