her-2/neu status poate fi detectată prin analizarea numărului de copii ale genei prin Southern blotting, PCR sau FISH sau cantitatea de blotting, test imunosorbent legat de enzime sau IHC. Cele două metode cele mai utilizate în prezent sunt IHC și FISH, deoarece sunt capabile să evalueze Her-2/neu în țesuturile de arhivă încorporate cu parafină fixă cu formalină.
majoritatea studiilor Her-2/neu au fost efectuate de IHC, care detectează supraexprimarea produsului proteic Her-2/neu pe membrana celulară a celulelor tumorale. Acest studiu a utilizat anticorpul monoclonal CB11, care, la fel ca HercepTest policlonal standardizat, este îndreptat împotriva domeniului intracitoplasmatic al moleculei Her2/neu .
IHC este accesibil pe scară largă și ușor de realizat la un cost rezonabil. Cu toate acestea, această procedură semi-cantitativă este asaltată de artefacte tehnice, diferențe de sensibilitate între diferiți anticorpi și interpretare subiectivă, rezultând variabilitatea interobservatorului între patologi . Studiile relevă suprasensibilitatea HercepTest aprobat de Administrația SUA pentru alimente și medicamente, cu o rată fals pozitivă de până la 50% . Thomson și colegii săi au concluzionat că, în cazurile cu o intensitate a petelor IHC de 1 + sau 2+, acordul interobserver este slab, iar valoarea predictivă este nesatisfăcătoare pentru utilizarea clinică; ei au recomandat testarea suplimentară, de preferință cu pește .
FISH este o procedură destul de obiectivă și cantitativă în detectarea amplificării genei Her-2/neu pe nucleele celulelor tumorale. Dezavantajele acestei proceduri sunt costul său abrupt (de 10 ori mai mare decât cel al IHC), sofisticarea, necesitatea unui microscop fluorescent, semnalul temporar (necesită o cameră specială) și incapacitatea sa de a detecta și evalua histomorfologia tumorii.
supraexpresia Her-2/neu detectată de IHC este puternic corelată cu amplificarea genei detectată de pești (până la 98% concordanță) . Cu toate acestea, 3-15% din carcinoamele mamare prezintă o colorare moderată a membranei Her-2/neu fără dovezi de amplificare. Acestea reprezintă cel mai adesea o colorare nespecifică extrem de sensibilă (fals pozitivă) și, rareori, fie o transcriere mARN îmbunătățită în absența amplificării sau amplificării genei care este sub nivelul de detectare a metodelor de hibridizare in situ .
Kakar și colegii săi au concluzionat că IHC este adecvat pentru evaluarea inițială Her-2/neu, dar pacienții ale căror tumori au obținut un scor mai mic de 3+ (în special cei interpretați ca 2+) ar beneficia de FISH pentru a evalua starea Her-2/neu mai precis și pentru a evita prognosticul inexact și tratamentul inadecvat .
CISH este un progres recent în detectarea Her-2/neu. Folosește o sondă robustă cu secvență unică dezvoltată pentru hibridizarea in situ și este o alternativă practică promițătoare la pește. După primul studiu CISH realizat de Tanner și colegi , alte șapte rapoarte au validat favorabil rezultatele CISH . Concordanța dintre CISH și pește a variat de la 85% până la 100% . Toate aceste rapoarte au remarcat avantajele CISH față de pește: necesită un microscop obișnuit; metoda este mai puțin greoaie și mai economică; intensitatea semnalului este permanentă; iar patologii sunt familiarizați cu semnalele IHC și sunt capabili să coreleze constatările cu histomorfologia tumorii subiacente. CISH permite observatorilor să selecteze câmpurile de carcinom ductal invaziv, evitând focarele de carcinom intraductal pentru care Her-2/neu are o semnificație clinică diferită. CISH este o metodă specifică, sensibilă și ușor de aplicat pentru detectarea amplificării genei Her-2/neu și poate fi utilizată împreună cu IHC pentru evaluarea pacienților cu carcinom mamar . Ross și colegii săi au revizuit recent starea actuală a testării Her-2/neu și au ajuns la concluzia că CISH este o tehnică mai convenabilă bazată pe gene, care așteaptă în aripi .
în acest studiu de față, concordanța dintre 3+ IHC și cazurile amplificate de CISH a fost de 100% (40 din 40), denotând toate cazurile amplificate de gene ca fiind supraexprimând proteina Her-2/neu. În schimb, Acordul privind 2 + cazuri amplificate de IHC și CISH a fost de doar 45%, ceea ce este mai mic decât cel raportat anterior (93%) . Cele 13,75% (22 din 160) tumori IHC-pozitive/CISH non-amplificate în acest studiu, toate având scoruri 2+ IHC, sunt mai mari decât rezultatul fals pozitiv de 6% de Zhao și colegi , deși comparabil cu rezultatul de 17% (IHC CB11 versus FISH) obținut de Tubbs și colegi . Aparent, constatăm că scorul 2 + IHC este echivoc în comparație cu CISH. Acest subset ar putea beneficia de testarea ulterioară a reflexului CISH. Toate cazurile IHC negative au fost CISH non-amplificate, arătând acordul complet al tuturor rezultatelor negative. Concordanța globală de 86,25% dintre IHC (folosind anticorpi CB11) și CISH în acest studiu este mai mică decât rapoartele anterioare (94-96%). Suntem de acord cu Sapino și colegii că analiza amplificării genelor poate fi evitată în toate cazurile 0, 1+ și 3+ IHC, deoarece rezultatele sunt previzibile din IHC și sunt complet concordante cu CISH . Utilitatea CISH este, prin urmare, în testarea ulterioară a modificării Her-2/neu asupra cazurilor echivoce în IHC, care rămâne metoda primară de screening. Algoritmul combinat IHC-CISH oferă date economice și cuprinzătoare Her-2 / neu pentru a ghida clinicienii în cartografierea opțiunilor de tratament.
categoria CISH cu amplificare redusă (6-10 semnale) a fost cea mai dificil de interpretat, necesitând o enumerare exactă a copierii genei. Gruparea semnalului, mai probabil un rezultat al amplificării intracromozomale a regiunilor de colorare omogene, a fost imediat evidentă în cazuri foarte amplificate și a fost ușor evaluată .
un test pentru aneuploidia cromozomului 17 nu a fost efectuat pe teste CISH non-amplificate și cu amplificare redusă, deoarece studiile recente au arătat că face analiza mai costisitoare și mai consumatoare de timp fără a adăuga date relevante, în afară de raportarea numărului recomandat de ampliconi nucleari și acționând ca o altă formă de control intern pentru reacția de hibridizare . În plus, deși producătorul (Zymed) a sugerat ca aneuploidia cromozomului 17 să fie testată pe toate cazurile amplificate de gene , suntem de acord cu Vera-Roman și colegii, care au subliniat corect că, deoarece majoritatea rezultatelor polisomiei se încadrează în zona gri de trei până la cinci semnale, stabilirea pragului semnalului de întrerupere indică un maxim de șase sau mai multe (ca în acest studiu) elimină practic variabila polisomică.
acest studiu nu a observat tumori amplificate de CISH negativ IHC. Acest lucru poate fi probabil explicat prin faptul că acesta a fost un studiu cu o singură instituție care ar putea avea blocuri de parafină de țesut tumoral fixe și prelucrate uniform, precum și o tehnică uniformă de recuperare a antigenului, ambele facilitând IHC de înaltă calitate. Zhao și colegii au raportat cazuri ocazionale IHC-negative amplificate de CISH și au considerat că acestea reprezintă un mic procent nedeterminat care a amplificat Her-2/neu fără supraexpresie . Același studiu și alte studii de pește au remarcat, de asemenea, tumori rare 3+ IHC care nu au fost amplificate (fals pozitive) . Motivele prezentate pentru discrepanțele IHC–CISH sunt similare cu cele dintre IHC și FISH, astfel cum s-a precizat anterior în prezentul raport.
cauzele eșecului testării și negativității false oferite de studiile anterioare CISH au fost absența tumorii pe secțiune, incapacitatea de a înscrie din cauza fundalului ridicat, o intensitate scăzută a semnalului în ciuda studiilor repetate, absența semnalelor de la controlul intern și utilizarea fixativului alcool–formalină–acid acetic . S-a remarcat, de asemenea, că pretratarea termică și digestia cu pepsină sunt cele mai critice proceduri pentru performanța cish optimizată și că ratele de succes ale CISH au fost scăzute atunci când au fost utilizate blocuri de țesut vechi de 20 de ani .
Sauer și colegii săi au corelat rezultatele IHC și FISH cu prognosticul clinic. Ei au remarcat că cazurile IHC / FISH-pozitive, precum și cazurile FISH-pozitive-only au avut același prognostic în ceea ce privește supraviețuirea, în timp ce cazurile IHC-pozitive-only au avut un prognostic similar cu cel al tumorilor IHC/FISH-negative. În schimb, cazurile IHC-negative/pozitive la pești au avut o probabilitate de supraviețuire similară cu cea a cazurilor IHC / pozitive la pești. Aceiași autori au concluzionat că, dacă s-ar folosi doar IHC ca instrument principal, cazurile IHC-negative/pozitive la pești ar fi omise; aceste femei nu ar avea beneficiul trastuzumab și supraviețuirea lor ar fi afectată negativ. În schimb, tumorile numai pozitive IHC par să aparțină unui grup de prognostic mai bun, iar eșecul de a le detecta probabil nu ar avea un efect negativ asupra supraviețuirii .
deoarece studiile clinice nu au abordat încă utilitatea rezultatelor CISH slab amplificate și înalt amplificate, în special semnificația incertă a grupului slab amplificat, aceste categorii sunt încă în flux. Fără a aduce atingere acestei limitări, există încă valoare în raportarea separată a acestor grupuri amplificate în prezent, în așteptarea asociațiilor clinice care vor fi obținute în viitor. Variabilitatea Intraobserver și interobserver privind raportarea rezultatelor CISH amplificate și amplificate nu au fost incluse în acest studiu, deși patologul care a interpretat testele CISH a aplicat în mod consecvent criteriile stabilite de producători.
cancerul de sân la femeile aflate în premenopauză are un profil biopatologic diferit de cel al pacienților vârstnici, cu o predominanță a parametrilor prognostici nefavorabili, incluzând o frecvență mai mare a tumorilor de gradul 3 și o supraexprimare mai frecventă a Her2/neu . Vârsta tânără servește ca o măsură surogat a profilurilor prognostice adverse . Acest studiu nu a reușit să stabilească asocierea dintre starea menopauzei, care a fost stabilită în mod arbitrar la 50 de ani și peste, și modificarea Her2/neu.
amplificarea Her2/neu a fost direct corelată cu gradul și tipul histologic al cancerului de sân . Sapino și colegii săi au sugerat că, pe baza gradului tumorii și a tipului histologic, patologul ar trebui să poată indica oncologului care cancer de sân necesită analize Her2/neu . Cu toate acestea, în timp ce niciuna dintre cele patru tumori bine diferențiate nu a prezentat amplificare sau supraexpresie Her2/neu, nu s-a adunat nicio corelație semnificativă în acest studiu în ceea ce privește statutul Her2/neu și gradul histologic; prin urmare, încă ne abonăm la testarea Her2/neu pe toate cancerele de sân nou diagnosticate. În general, distribuția în funcție de vârstă a pacienților cu cancer de sân și gradul histologic al tumorii nu au prezis în mod semnificativ IHC și starea Cish Her2/neu.