produsele farmaceutice cu anticorpi monoclonali (mAb) au atras un interes semnificativ datorită potenței și specificității lor terapeutice puternice pentru tratarea bolilor inflamatorii, oncologice și autoimune. Datorită complexității lor intrinseci datorită unui număr mare de micro-eterogenități, există o nevoie crucială de metode analitice pentru a oferi o caracterizare cuprinzătoare în profunzime a moleculelor candidate.
o multitudine de tehnici analitice sunt furnizate de Biolabii creativi pentru caracterizarea anticorpilor și evaluarea omogenității în toate etapele descoperirii mAb, dezvoltării preclinice și clinice. Aici, introducem aplicarea focalizării izoelectrice capilare (cIEF) pentru analiza eterogenității încărcării anticorpilor. Este utilizat pe scară largă pentru caracterizarea mab-urilor terapeutice. Prin determinarea pI a izoformelor de încărcare mAb, cIEF oferă informații cruciale pentru stabilirea identității, purității, modificărilor post-translaționale și stabilității.
Introducere în cIEF
cIEF se bazează pe principiul electroforezei în gel capilar. Electroforeza este o tehnică de separare bazată pe viteza diferențială de mișcare a speciilor încărcate într-un câmp electric, spre electrodul de sarcină opusă. Pentru a separa moleculele pe baza punctului izoelectric (pI), se stabilește un gradient de pH în interiorul gelului prin utilizarea amestecurilor de amfoliți. Sub câmpul electric, moleculele migrează de-a lungul câmpului electric până când ating pH-ul corespunzător pI, unde sarcinile pozitive și negative din molecule sunt echilibrate. Absorbția UV pe întregul capilar este măsurată pe tot parcursul separării, permițând observarea în timp real și o cuantificare finală.
Fig.1 Principiul focalizării izoelectrice. (Pergande, 2017)
cIEF pentru caracterizarea eterogenității încărcării
mab-urile sunt susceptibile la diverse modificări post-translaționale (de ex., glicozilare, fosforilare, oxidare și tăiere cu lizină), ceea ce duce la variante de încărcare. Unele dintre aceste variante de încărcare pot avea un posibil efect asupra activității biologice și a siguranței moleculei în grade diferite. De exemplu, profilul de glicozilare al mab influențează puternic activitatea biologică a proteinei. În consecință, monitorizarea de rutină a eterogenității încărcării mAb este o parte integrantă a oricărui plan de management al calității produsului și al ciclului de viață. Este, de asemenea, unul dintre cele mai importante aspecte analitice ale studiilor de dezvoltare și comparabilitate biosimilare. Ca tehnică de separare bazată pe Încărcare, cIEF este un instrument puternic pentru a caracteriza profilul de încărcare al mab-urilor, deoarece diferite variante de încărcare pot fi distinse în funcție de pI-ul lor folosind calibrarea internă. Deoarece cIEF oferă reproductibilitate și specificitate foarte ridicate, acesta este unul dintre cele mai populare instrumente pentru analiza mAb.
caracteristicile serviciilor noastre
- caracterizarea variantelor de mărime și încărcare ale mab-urilor intacte și reduse cu cIEF
- analiza variantelor de încărcare ale mab-urilor folosind o abordare ortogonală
- separarea cIEF urmată de analiza spectrometriei de masă (MS)
- servicii personalizate în conformitate cu cerințele specifice
Creative Biolabs oferă, de asemenea, o gamă largă de teste ale funcției anticorpilor pentru a ajuta la înțelegerea efectelor variantelor de încărcare asupra activității și proprietăților anticorpilor, cum ar fi funcțiile efectoare, fcrn și legarea antigenului afinitate și PK, elucidând astfel relațiile structură-funcție. Dacă sunteți interesat de serviciul nostru, vă rugăm să ne contactați pentru a discuta cerințele dumneavoastră.