când vă gândiți să separați proteinele, vă gândiți să le separați folosind un gel? Folosind în mod specific SDS-PAGE? Dacă ați răspuns „da”, este pentru un motiv bun. SDS-PAGE este omniprezent în laboratoarele de biologie moleculară, deoarece este bun la separarea proteinelor. Cu toate acestea, SDS-PAGE durează mult timp și necesită multă muncă. Deci, să vă extindem setul de instrumente și să ne uităm la un alt mod de separare a proteinelor: electroforeza cu gel capilar.
electroforeza în gel capilar (CGE) a.k.a. electroforeza prin cernere capilară a.k.a.SDS-electroforeza gelului capilar separă proteinele într-un gel prin coloane umplute cu un mediu de separare.
cerințe de echipament
în electroforeza cu gel capilar, analiții (proteinele pe care doriți să le studiați) migrează printr – o soluție electrolitică prin capilare prin forța de tragere a unui câmp electric-nu spre deosebire de pagina SDS mai familiară. Pentru a efectua CGE aveți nevoie de: un flacon de probă, flacoane sursă și destinație, matrice de cernere, coloană capilară, un detector pe coloană, un dispozitiv de ieșire și manipulare a datelor și o sursă de alimentare de înaltă tensiune.
Protocol pe scurt
într-un experiment CGE, eșantionul dvs. începe de la flaconul sursă și se îndreaptă spre flaconul de destinație. Iată protocolul pe scurt:
Pasul 1: flacoanele sursă și destinații, precum și capilarul care le conectează sunt umplute cu o soluție electrolitică și proba introdusă în capilar.
Pasul 2: odată aplicat câmpul electric, analiții migrează din partea flaconului sursă spre partea flaconului de destinație.
Pasul 3: detectorul pe coloană (nu este surprinzător) permite detectarea pe coloană. Detectorul trimite date către un dispozitiv de ieșire și manipulare a datelor, cum ar fi un computer.
Pasul 4: aceste date sunt apoi afișate ca o electroferogramă. Analiții dvs. sunt Citiți ca vârfuri de timpi de retenție diferiți.
pentru a afla mai multe detalii despre cum funcționează, vizitați materialul util al UC Davis.
mai multe despre matricea
matricea dvs. de cernere poate fi compusă dintr-un număr de materiale polimerizate, inclusiv poliacrilamidă reticulată, dextran și poli(etilen glicol sau oxid de etilenă). Coloanele dvs. sunt de obicei realizate din polimeri de cernere înlocuibili. Depinde apoi de dvs. dacă vă creați propriile coloane sau le cumpărați. Beckman Coulter, Agilent tech și Bio-Rad laboratoare vinde kituri de cernere, dar știu că acestea necesită să utilizați instrumentele lor CGE prea.
de ce ar trebui să utilizați CGE
acum ați auzit despre ce este CGE, de ce ar trebui să-l utilizați?
- are o durată de funcționare mai scurtă. Rularea unui CGE durează de 10-100 de ori mai puțin timp pentru a finaliza decât electroforeza pe gel.
- există mai puțini pași într-un experiment CGE decât într-un experiment SDS-PAGE. Acest lucru se datorează faptului că rezultatele finale ale experimentului CGE sunt date de un computer conectat la aparat.
- CGE este, de asemenea, mai potrivit pentru proteine mici decât pagina tradițională SDS.
- vă puteți analiza proteinele în timp real cu CGE.
- echipamentele CGE pot fi utilizate în mod repetat, fără a fi nevoie să faceți geluri nesfârșite.
- în cele din urmă, o mare parte din proces este automat. După ce ați adăugat eșantionul, ați terminat! Aceasta înseamnă că nu trebuie să supravegheați procesul ca și cum ați face un gel sau să-l aduceți la echipamente speciale de detectare imediat ce gelul a funcționat.
de ce nu ar trebui să utilizați CGE
Ei bine, adevărul trebuie spus chiar dacă CGE a fost în jur în forma sa actuală de peste un deceniu și multe progrese tehnice au fost făcute, CGE încă suferă de probleme de reproductibilitate. O altă problemă este că separările CGE sunt efectuate în serie. Aceasta înseamnă că cu CGE nu puteți compara în mod convenabil benzile. În cele din urmă, când vine vorba de geluri 2D, CGE nu poate concura cu separarea tradițională 2D.
pe scurt, în timp ce unii cercetători exclamă cu mândrie utilizările tehnologiei CGE, există încă o serie de probleme cu aceasta. Dar nu respinge CGE încă! Cea mai recentă apăsare în acest domeniu este microcip CGE, care arată multe promisiuni pentru analiza proteinelor de mare viteză. Deci, data viitoare când vă gândiți la separarea proteinelor, nu uitați de CGE.
ați încercat CGE? Cum vă place în comparație cu SDS-PAGE?