I. U. B.: 3.4.22.8
C. A. S.: 9028-00-6
reacție enzimatică (imaginea se va deschide într-o fereastră nouă)
clostripaina este o protează activată de cisteină găsită, împreună cu colagenaza și alte proteaze, în Filtratele de cultură ale Clostridium histolyticum. Este unic în specificitatea sa pentru legătura carboxil peptidică a argininei și dependența sa de ionii de tiol și calciu.
Istorie:
bacteria din care este purificată clostripaina a câștigat pentru prima dată atenția în timpul Primului Război Mondial din cauza consecințelor sale grave asupra răniților (Mitchell și Harrington 1971). Cl. hisolyticum este doar unul dintre organismele cu proprietăți patogene consecvente, dar activitatea sa proteolitică în filtratele de cultură fără celule a câștigat atenție încă din 1917 (Weinberg și s Inquxgun 1917 și Mitchell și Harrington 1971).
în 1931, digestia tendoanelor calului a fost descrisă de Weinberg și Randin. Un an mai târziu au identificat o exotoxină, pe care au numit-o „fibrinolitica fermentată”, ca fiind cauza digestiei (Weinberg și Randin 1932). Ulterior s-a constatat că această digestie a fost cauzată de o varietate de enzime proteolitice, inclusiv o proteinază activată de cisteină, clostripain (Kochalaty și Weil 1938 și Maschmann 1938).
în 1948, Kochalaty și Krejci au izolat cu succes clostripaina în formă relativ pură (Mitchell și Harrington 1968). Ogle și Tytell au rafinat tehnica de purificare în 1953 și au raportat pentru prima dată specificitatea acesteia (Ogle și Tytell 1953).
când specificitatea substratului îngust al clostripain a devenit de interes, a existat confuzie în literatura de specialitate cu privire la identitatea clostripain (Mitchell și Harrington 1971). Înainte de descrierea sa ca clostripain de Labouesse și Gros în 1960, și mai târziu Mitchell și Harrington în 1968, a fost denumită g-protează (Bard și McClung 1948 și Oakley și Warrack 1950), amidază-esterază (Nordwig și Strauch 1963) și clostridiopeptidază B (Mitchell și Harrington 1968).
lucrările recente cu clostripain au inclus izolarea celulară și utilizarea acesteia ca țintă model a inhibitorilor de protează pentru tratamentul infecțiilor clostridiale (Wang și colab. 2004, și Gusman și colab. 2001).
specificitate:
Clostripaina hidrolizează selectiv legăturile arginil și lizil la o rată mai mică. De asemenea, poate acționa ca o transpeptidază cu activitate maximă la pH 7,6-9,0 (Anderson 1985 și Fortier și MacKenzie 1986).
Caracteristici Moleculare:
atât lanțurile grele, cât și cele ușoare sunt codificate de o singură genă cu un cadru de citire deschis de nucleotide 1581 (ORF). La exprimarea genei, întregul ORF (Regiunea semnalului, proregiunea și 9 amino acid peptide linker) este transcris. Prelucrarea postranslațională produce enzima activă heterodimerică (Dargatz și colab. 1993).
compoziție:
Clostripain este un heterodimer. Lanțul matur este compus din 526 de reziduuri. Cele două lanțuri sunt ținute împreună de forțe necovalente puternice (Gilles și colab. 1979 și Ullman și Bordusa 2004). Se crede că reziduul catalitic de sulfhidril al sitului activ este Cys41 (reziduu de lanț greu). Precursorul conține o peptidă semnal presupusă de 27 de aminoacizi, o propeptidă de 23 de aminoacizi, o subunitate cu lanț ușor de 131 aminoacizi, o peptidă de legătură cu 9 aminoacizi și o subunitate cu lanț greu de 336 aminoacizi (Ullman și Bordusa 2004).
Numărul de aderare la proteine: P09870
greutate moleculară:
- 53.0 kDa (Teoretic)
- lanț ușor: 12,5 kDa, lanț greu: 45 kDa (Gilles și colab. 1979)
pH optim:
- 7.4-7.8 (activitate împotriva esterului etilic a-benzoil-arginină) (Mitchell și Harrington 1968)
punct izoelectric: 4,8-4,9 (Mitchell și Harrington 1971)
coeficientul de extincție:
- 87,890 cm-1 M-1 (Teoretic)
- E1%,280 = 16,57 (Teoretic)
reziduuri de situs activ:
- cisteină (C41, lanț greu)
activatori:
- cerința de sulfhidril: ditiotreitol, cisteină sau alți agenți reducători
- ionul de calciu este esențial
- agenți reducători
inhibitori:
- EDTA
- agenți oxidanți
- reactivi sulfhidril (cum ar fi TLCK) (Porter și colab. 1971)
- Co2+, Cu2+, Cd2+ și ioni de metale grele
- citrat, Borat și anioni Tris inhibă parțial
Aplicații:
- maparea peptidelor
- analiza secvenței
- izolarea celulelor (Wang și colab. 2004)
- hidroliza/condensarea legăturilor amidice
- sinteza peptidelor (Meiwes și colab. 1991)