deși majoritatea lucrărilor privind infecțiile cu chlamydia ale rumegătoarelor mici se referă la oi, chlamydioza are un impact economic și asupra sănătății publice în numeroase ferme de caprine din întreaga lume. Avorturile chlamydiale au fost raportate pentru prima dată în Germania în 1959.După aceea, boala a fost diagnosticată în Bulgaria, Spania, SUA, Franța, India, Japonia, Regatul Unit, Ciad, Grecia și Tunisia. În multe domenii, avortul chlamydial este a doua cauză a avorturilor infecțioase după bruceloză și principala cauză în majoritatea țărilor în care bruceloza este controlată
etiologie
boala se datorează unei mici bacterii Gram-negative, Chlamydia psittaci, care crește în citoplasma celulelor eucariote într-un ciclu unic de dezvoltare în care o formă infecțioasă rezistentă, corpurile elementare (EB) alternează cu o formă neinfecțioasă activă metabolic corpurile reticulate (RB). EB se atașează de membrana celulei gazdă și își promovează propria endocitoză într-un vacuol limitat cu membrană numit incluziune, care nu fuzionează cu lizozomi. Apoi EB se transformă în RB, care se reproduce prin fisiune binară. După mai multe diviziuni, RBs, care umple toată incluziunea, se transformă înapoi în EBs infecțioase. Aceste EBs sunt eliberate prin liza celulei gazdă sau extrudarea includerii din celula gazdă .
taxonomie
Chlamydia psittaci este una dintre cele patru specii din genul Chlamydia, care include, de asemenea, Chlamydia trachomatis, Chlamydia pneumoniae și Chlamydia pecorum.
Chlamydia trachomatis și Chlamydia pneumoniae sunt ambii agenți patogeni umani. C. psittaci infectează o mare varietate de păsări, mamifere și ocazional oameni, iar C. pecorum contaminează rumegătoarele, porcinele și koala. La oi și capre, C. pecorum provoacă pneumonie, conjunctivită și artrită, dar este foarte des izolat de infecțiile intestinale asimptomatice .
cu excepția cazurilor foarte rare, tulpinile care induc avortul la caprine aparțin serotipului 1 C. psittaci, care este, de asemenea, responsabil pentru pneumonie, conjunctivită și artrită și, uneori, infecții intestinale fără semne clinice. Specia C. psittaci este foarte eterogenă și înainte de apariția celei de-a patra specii C. pecorum .
analizele filogenetice ale genelor ARNr 16S și 23S sugerează existența a nouă specii diferențiate în Chlamydiaceae și Lead Everett și colab., pentru a propune crearea a două noi genuri Chlamydia și Chlamydophila. Genul Chlamydia, care corespunde denumirii vechi Chlamydia trachomatis include 3 specii: C. trachomatis (tulpini umane), c suis (tulpini porcine legate de C. trachomatis izolate din avorturi spontane, infecții vaginale și pneumoniae) și C. muridarum (tulpini de șoarece-hamster).
genul Chlamydophila regrupează 6 specii: C. pneumoniae, C. pecorum, C. psittaci (tulpini aviare anterioare Chlamydia psittaci), C. caviae, agentul conjunctivitei de incluziune a cobaiului (GPIC), C. felis (tulpini C. psittaci care infectează pisicile) și C. abortus (serotip clasic-1 tulpini de Chlamydia psittaci). Rezultatele sunt în concordanță cu cele obținute prin analize filogenetice ale altor cinci gene codificatoare (GroEL, kdo-transferază, MOMP, proteine bogate în cisteină 60-kDa și lipoproteine bogate în cisteină) și proprietățile biologice ale tulpinilor . Analiza polimorfismului lungimii de restricție (RFLP) a domeniului distanțier intergenic ribozomal al genelor ARNr 16S-23S oferă o metodă rapidă și reproductibilă pentru identificarea și clasificarea tulpinilor chlamydiale la noua specie . Cu toate acestea, unii membri ai comunității științifice nu sunt de acord cu propunerea pentru o nouă taxonomie chlamydială, deoarece nu ia în considerare întregul genom al bacteriilor.
semne clinice
Chlamydioza se caracterizează clinic prin avort în ultimele luni de sarcină, nașteri morți sau nașteri premature ale copiilor slabi cu greutate scăzută la naștere. Avorturile apar fără semne clinice specifice anterioare, chiar dacă unele capre pot dezvolta tuse persistentă fără respirație sau artrită și keratoconjunctivită. În infecțiile experimentale, s-a observat o ușoară descărcare vaginală cu o zi înainte de avort la unele capre . Placentele reținute și metrita nu sunt obișnuite, chiar dacă sunt mai frecvente decât la oi . După avort, caprele se pot recupera rapid sau pot prezenta descărcare brună din vagin. În infecțiile experimentale sau în unele infecții naturale cu o rată ridicată de avorturi, doar 50% sau mai puțin din caprele care au avortat, s-au recuperat rapid, în timp ce boala post-abortivă la oi este neobișnuită. Acest lucru s-ar putea datora diferențelor de virulență dintre tulpini, deoarece se cunoaște foarte puțin despre mecanismele de virulență ale tulpinilor. Nici o diferență de virulență nu a putut fi demonstrată la modelele de șoarece între tulpinile de ovină și caprină , dar polimorfismul amplificat al lungimii fragmentelor (AFLP) a evidențiat diferențe genomice între tulpina de caprină AC1 și serotipul de ovină-1 tulpinile C. psittaci .
deși am demonstrat că întreținerea caprelor infectate ar putea duce la sires infectate , până în prezent nu a fost descrisă epiddimită datorată C. psittaci în sires. Acest lucru se datorează, probabil, numărului foarte mic de studii privind chlamydioza caprină, mai degrabă decât o susceptibilitate mai mare a berbecilor și taurilor la infecțiile cu chlamydia.
într-o turmă nou infectată, rata avortului este severă. Frecvent 30% sau mai mult, uneori 90% dintre gravide pot avorta și producția de lapte poate scădea. Rata ridicată a avortului este observată timp de 2 sau 3 ani după care boala capătă o natură ciclică: 10% dintre femeile însărcinate vor avorta în fiecare an timp de câțiva ani până când apare un nou focar și apoi toți anii vor avorta. Nivelul ridicat de imunitate produs după avort este responsabil de evoluția ciclică a bolii în efectiv: este excepțional ca o capră să avorteze de două ori. Papp și Shewen au arătat că unele dintre oile care au avortat pot deveni infectate cronic. Antigenele chlamydiale și ADN-ul pot fi detectate în vagin, uter și tuburi uterine în timpul perioadei peri-ovulatorii a oilor care au avortat. Nu s-au făcut cercetări pentru a determina incidența infecțiilor cronice la efectivele de capre.
fătul nu prezintă leziuni macroscopice specifice. Copiii livrați aproape de termen pot fi acoperiți de material maro. Se observă adesea edeme difuze clare sau colorate în sânge , fluide colorate în cavitățile abdominale și pleurale și peteșii pe limbă, în cavitatea bucală și pe copite.
transmiterea bolii
infectate elimină un număr mare de Chlamydiae în placentă și fluide fetale în momentul glumei și în momentul avortului. Unele capre pot vărsa Chlamydia în fluidele vaginale de la mai mult de două săptămâni înainte de avort la mai mult de două săptămâni după avort. Acest lucru poate explica incidența mai mare a avortului la efectivele de capre nou infectate, deoarece susceptibilitatea la infecție variază în funcție de starea fiziologică a animalului. Caprele care sunt mai puțin de 100 de zile însărcinate sunt mai susceptibile decât cele de la sfârșitul gestației sau cele care sunt sterpe. Cantități mai mici de Chlamydiae pot fi, de asemenea, vărsate în urină, lapte și fecale în câteva zile după avort.
caprele tinere născute din mame infectate pot reține infecția în efectiv sau o pot transmite altor efective. Studiul unui grup de 27 de ani dintr-o turmă infectată în primul an de viață a demonstrat cum ar putea răspândi boala prin faptul că nu au fost detectați prin răspunsul lor serologic. Aceste capre tinere ar putea fi împărțite în 3 grupe în funcție de gestație/parturiție. Primul grup a copilat în mod normal un copil viu, al doilea grup a fost sterp sau a avortat prea devreme în timpul sarcinii pentru a fi detectat, iar în al treilea grup caprele au avortat. Anticorpii de fixare a complementului (CF) din primele două grupuri au crescut pentru a atinge un maxim (1/80 – 1/160) în momentul reproducerii, apoi nivelurile de anticorpi au scăzut până la momentul glumei . Al treilea grup a avut un titru de anticorpi CF rolul transmiterea venerică a chlamydiozei de către bărbați trebuie încă investigată. Cu toate acestea, infecțiile genitale la Berbeci și tauri duc la infertilitate și sterilitate masculină, mai degrabă decât la avort la femei. Rolul pe care îl joacă boala îninfecția intestinală inadecvată și influența acesteia în epidemiologia avortului chlamydial trebuie explorate. Identificarea recentă a markerilor moleculari pentru tulpinile intestinale caprine ar permite astfel de studii.
diagnostic
diagnosticul se efectuează de obicei prin detectarea bacteriilor în frotiuri sau impresii ale placentei combinate cu analiza serologică a cel puțin zece probe de ser.
colorarea chlamidiei prin metodele Stamp, Gimenez sau Machiavello este rapidă și poate fi întreprinsă cu ușurință în majoritatea laboratoarelor, dar interpretarea sa este adesea dificilă, deoarece necesită o persoană cu experiență pentru a diferenția Chlamydia de Brucella și Coxiella. Imunofluorescența folosind conjugate de imunoglobulină marcate cu izotiocianat marcat fluorescent, crește sensibilitatea și specificitatea detectării chlamidiei în frotiuri sau impresii de placentă.
prezența antigenelor chlamydiale în placenta măcinată sau în tampoanele vaginale prelevate imediat după avort poate fi detectată de ELISA cu kituri de diagnostic dezvoltate pentru infecțiile umane cu C. trachomatis .
în medicina umană, reacția în lanț a polimerazei (PCR) sau variația acesteia, reacția în lanț a ligazei (LCR) sunt considerate cele mai sensibile metode de diagnostic disponibile pentru diagnosticarea chlamidiei. Mai mulți primeri comuni tuturor tipurilor de Chlamydia, ca Omp1, gena care codifică proteina principală a membranei exterioare sau specifică C. psittaci sau C. pecorum sau a tulpinilor de serotip – 1 C. psittaci au fost dezvoltate pentru aplicații veterinare. Dar această tehnică rămâne costisitoare.
testul de fixare a complementului (CFT) este cel mai utilizat și considerat a fi standardul de aur pentru diagnosticul serologic. Cu toate acestea, CFT nu este foarte sensibil și nu este specific, deoarece testul folosește un antigen i comun cu C. pecorum, pe care majoritatea caprelor îl adăpostesc în intestinul lor. Prin urmare, reacțiile pozitive cu titruri între 1:10 și 1:40 nu sunt specifice avortului, dar se pot referi la o infecție intestinală cu C. pecorum. Testul CFT trebuie efectuat, de preferință, la 3 până la 6 săptămâni după avort sau miel, când răspunsul anticorpilor este la nivelul maxim. Testul CFT nu poate fi utilizat pentru diagnosticarea individuală sau pentru detectarea infecției la tineri sau la bărbați .
au fost întreprinse mai multe încercări de a dezvolta tehnici mai specifice, care să facă distincția între infecțiile cu C. psittaci și C. pecorum. Cu toate acestea, niciunul dintre aceste teste nu a fost suficient de sensibil și specific. Recent, a fost dezvoltat un nou test imunosorbent indirect legat de enzime (ELISA) bazat pe un antigen recombinant care exprimă o parte dintr – o proteină de 80-90 kDa . Testul reacționează cu anticorpii serici provocați devreme împotriva acestor proteine familiale multigenice foarte imunogene . Acest test are o sensibilitate ridicată și o specificitate ridicată .
tratamentul
tetraciclinele afectează replicarea chlamidiei și pot fi eficiente în prevenirea avorturilor. Injectarea a 20 mg/kg de oxitetraciclină administrată pe cale intramusculară la 105 și 120 de zile de sarcină poate preveni avortul, dar nu poate preveni vărsarea chlamydială la glumă.
vaccinarea
vaccinurile ucise ar putea reduce incidența avortului, dar nu și excreția Chlamydiae la glumă. Avortul induce o imunitate suficient de puternică pentru a rezista provocărilor ulterioare , a fost dezvoltat un vaccin viu constituit cu un mutant sensibil la temperatură al tulpinilor C. psittaci . Caprele sensibile au fost vaccinate înainte de împerechere și nu s-a observat nicio interferență cu gestația ulterioară. Caprele au fost protejate împotriva avortului chlamydial și a fost prevenită vărsarea chlamydială la glumă. Cu toate acestea, atunci când toate caprele dintr-un efectiv infectat sunt vaccinate în primul an și toate animalele de înlocuire sunt vaccinate în anii următori, ar putea dura aproximativ 3 ani înainte ca avorturile să se oprească. Acest lucru se datorează infecției latente la caprine, caprine care au fost infectate înainte de vaccinare, dar nu au avortat. Vaccinarea nu va schimba cursul unei infecții latente. Aceste capre pot avorta sau pot copil sănătos sau infectat copil la termen și poate sau nu poate vărsat Chlamydia. Atâta timp cât caprele cu o infecție latentă sunt prezente într-o turmă, nu este recomandabil să se oprească vaccinarea (altfel Avorturile ar începe din nou) și nici nu este posibil să se vândă animale vaccinate, cu excepția crescătorilor care își vaccinează turma în mod regulat.
perspective viitoare
dezvoltarea unui vaccin, la fel de eficient ca vaccinul viu menționat, care să protejeze și să permită detectarea serologică a caprelor infectate în efectivele vaccinate, ar fi foarte utilă pentru controlul bolii. Depleția „antigenului specific diagnosticului” din vaccinul viu nu este în prezent o opțiune, deoarece metodologiile genetice și moleculare adecvate nu sunt încă disponibile și pare dificil să ștergeți această familie de proteine. Din aceste motive, un vaccin acelular, care protejează împotriva avortului și excreției, ar fi de interes. Studiile anterioare au arătat că atât limfocitele T, cât și cele B sunt implicate în imunitatea protectoare . La modelele murine, celulele T CD8+ (Lyt 2 + la șoarece) joacă un rol major în protecția după transferul celulelor splinei amorsate . Până în prezent, C. antigenii și epitopii celulelor T psittaci sunt necunoscuți. Deși este necesară prudență în extrapolarea rezultatelor C. trachomatis la C. psittaci, mai mulți epitopi ai celulelor T au fost identificați pe C. trachomatis major outer membrane protein (MOMP)
rolul anticorpilor în prevenirea infecției placentare și fetale de către C. psittaci a fost demonstrat la șoareci. Transferul pasiv al serurilor policlonale specifice induce o imunitate semnificativă, deși mai mică decât protecția mediată de celulele T. Anticorpi monoclonali (Mab) care neutralizează C. infectivitatea psittaci in vitro conferă o imunitate remarcabilă șoarecilor gravide după provocarea intravenoasă, deoarece avortul și colonizarea fetală sunt eliminate . Imunitatea umorală este implicată în protecție. Eficacitatea acestuia depinde de concentrația anticorpilor specifici împotriva epitopului adecvat. Toate Mab-urile de protecție izolate până în prezent reacționează cu epitopi conformaționali termosensibili localizați pe un oligomer MOMP .
prin urmare, oligomerul MOMP ar putea fi o componentă potențială a vaccinului . Cu toate acestea, nu este fezabil să se producă acest antigen prin extracție din chlamydiae, deoarece costul de producție ar depăși cu mult costul pe care un fermier l-ar considera accesibil pentru un vaccin caprină sau ovină. Prin urmare, trebuie investigate metode alternative de producere a vaccinului.
generarea OLIGOMERULUI MOMP recombinant poate fi dificilă. Gena care codifică MOMP, Omp1, este bine caracterizată, dar expresia la nivel înalt a genei de lungime completă de la un promotor nereglementat este toxică pentru E. coli. Din acest motiv, au fost întreprinse diferite strategii experimentale pentru generarea epitopilor de protecție. Am încercat să imităm epitopii protectori cu anticorpi monoclonali anti-idiotipici sau mimotopi peptidici constrânși conformațional, dar niciunul dintre ei nu a fost eficient. Am decis să evaluăm vaccinarea șoarecilor cu vaccin ADN ca vaccinare ADN cu șoareci protejați de gena MOMP împotriva C. trachomatis și curcani împotriva C. psittaci . Până în prezent s-a obținut doar protecție parțială, dar cercetări suplimentare (pe gena țintă, concentrația ADN-ului, calea de vaccinare etc.) este necesar pentru a ști dacă șoarecii ar putea fi protejați cu un vaccin ADN la fel de eficient ca și cu vaccinul viu.