ce este ADN-ul Circular Extrachromosomal și ce face?

se știe că ADN-ul din nucleul celular este ambalat sub formă de cromozomi liniari. Timp de mulți ani, cercetătorii au observat lungimi mai mici de ADN alături de cromozomii care sunt organizați în forme circulare. Unele dintre aceste particule, care au fost denumite ADN circular extrachromozomal (eccDNAs) sau microDNAs, sunt de obicei mici (<1 kb), rare de gene și neamplificate. Abundența totală a eccDNA în celule poate fi de până la câteva sute pe celulă. moleculele eccDNA sunt, de asemenea, prezente în circulație în formă fără celule și oferă posibilitatea de a servi ca biomarkeri pe bază de sânge. În tumori, poate fi detectat un alt tip de ADN circular extrachromozomal, care pare a fi exclusiv celulelor canceroase. Denumite anterior minute duble, dar acum denumite ADN extrachromozomal (ecDNA) deoarece de obicei nu sunt dublete, aceste particule ecDNA sunt adesea foarte mari (dimensiunea medie 1.3 Mb), foarte amplificat cu multe copii pe celulă și conține multe gene și regiuni de reglementare, cu o îmbogățire marcată pentru oncogene. Important, în celulele canceroase, ecdn-urile par a fi mai active transcripțional decât omologii lor cromozomiali și au fost suspectate că conferă celulelor canceroase un avantaj de creștere și supraviețuire. În prezent, relația dintre eccDNA în celulele normale și ecDNA în cancer, dacă există, nu este înțeleasă. Fiind o astfel de formă enigmatică de material genetic, am pus întrebări despre eccDNAs și ecDNAs unui grup de experți în domeniu care au studiat fațetele eccDNAs și ecDNAs, variind de la proprietățile lor biofizice, mecanismele de producție, rolurile fiziologice, rolurile în biologia cancerului și potențialul de diagnostic.

ce fac eccdna-urile? Care a fost cea mai mare surpriză pentru tine despre eccDNA până acum?

Anton Hensson: ecDNA este un vehicul pentru amplificări proto-oncogene în cancer. Acest lucru este cunoscut de ceva timp. Ceea ce a fost surprinzător este frecvența ecDNA în cancer și capacitatea ecDNA de a forma structuri foarte complexe, inclusiv părți din cromozomi diferiți, precum și capacitatea lor de a reintroduce în genom.

Paul Mischel: îmi voi concentra comentariile asupra domeniului meu de cercetare, ecDNA în cancer. Cea mai mare surpriză, pentru mine, este ce rol critic joacă ecDNA în cancerul uman. Datele noastre sugerează că ecDNA joacă un rol critic în conducerea comportamentului agresiv al unora dintre cele mai maligne forme de cancer prin cel puțin trei mecanisme de intercalare: 1) deoarece ecdn-urile nu au centromeri, acestea sunt supuse moștenirii non-mendeliene (adică nonchromozomale), care permite tumorilor să obțină un număr foarte mare de copii oncogene, menținând în același timp eterogenitatea genetică intratumorală; 2) eterogenitatea genetică intratumorală generată de acest mecanism de moștenire permite tumorilor să evolueze rapid ca răspuns la condițiile în schimbare, inclusiv tratamentele, reprezentând capacitatea remarcabilă a unor tipuri de cancer de a-și schimba genomul la rate care; 3) nivelul ridicat al șablonului ADN obținut prin moștenirea și selecția non-mendeliană, cuplat cu organizarea cromatinei modificată generată de arhitectura circulară pe care am demonstrat-o (identificată în munca realizată îndeaproape cu Dr.Howard Chang), are ca rezultat transcrierea masivă a oncogenelor. Luate împreună, aceste caracteristici încep să explice de ce unele tipuri de cancer par să explodeze și să se schimbe genomic, de ce nu suferă măturări selective pure și de ce orice celulă din tumoare pare să poată recapitula întreaga tumoare, cu întregul său spectru de eterogenitate, în unele tipuri de cancer. De asemenea, oferă o perspectivă asupra motivului pentru care terapiile țintite împotriva oncogenelor amplificate pe ecDNA nu au fost la fel de reușite pe cât s-a anticipat.

Anindya Dutta: eccdn – urile lungi vizibile în cancere prin cariotipare, denumite și minute duble sau ecdn-uri, au fost cunoscute pentru a transporta oncogene care sunt amplificate pentru a promova cancerul. Rezultatele recente sugerează că există o populație mare de eccdna mai mici, < 1000 bp lung, care constituie 90% din eccDNA în celulele normale și liniile celulare canceroase. Celulele canceroase conțin, de asemenea, ecdn-uri mai lungi, care nu sunt întotdeauna vizibile prin cariotipare, care variază în mărime de la 1 kb la cea a minutelor duble. Cercurile care sunt suficient de lungi pentru a conține gene complete pot supraexprima genele și le pot amplifica. Acest lucru este foarte important pentru cancerele care conțin ecdna lungi. Funcția cercurilor mici este neclară, dar am arătat că pot exprima ARN-uri într-o manieră dereglată și că ARN-urile sunt procesate în microARN-uri și ARN-uri mici interferente pentru a reprima genele celulare.

pentru mine, cea mai mare surpriză rămâne descoperirea noastră originală despre cât de omniprezente sunt eccDNAs, chiar și în țesuturile normale și faptul că majoritatea sunt mozaic somatic (diferite între diferite celule) chiar și în cancere. Numai atunci când acestea oferă un avantaj selectiv celulelor, așa cum fac eccdna-urile care transportă oncogene în cancere, același eccDNA este văzut în multe celule dintr-un cancer.

Birgitte Regenberg: pentru a afla asta: 1) eccDNA este un element genetic comun în celulele eucariote, 2) eccDNA poate apărea din toate părțile genomurilor eucariote, 3) selecția poate duce la co-amplificarea potențiatorilor și oncogenelor pe eccDNA complexe în tumori, 4) anumite loci par să formeze eccDNA recurent și la o rată ridicată în drojdie (CUP1 și HXT6 HXT7). Ultimul rezultat este cu adevărat interesant, deoarece sugerează că eccDNA poate juca un rol important în evoluție, oferind o adaptare rapidă la schimbările din mediu (cupper ridicat, CUP1 și glucoză scăzută, HXT6 HXT7).

Dennis Lo: Grupul meu a devenit interesat pentru prima dată de eccDNA când am început să căutăm molecule circulare de ADN în plasma umană. Călătoria noastră a început cu investigarea ADN-ului mitocondrial (mtDNA), care există în interiorul unei mitocondrii ca o bucată circulară de moleculă de ADN de aproximativ 16 kb. Rezultatele noastre au demonstrat că atât moleculele de ADNmt circulare, cât și cele liniare există în plasma umană. O surpriză din această lucrare este demonstrația noastră că moleculele circulare de ADNmt și moleculele liniare de ADNmt au diferite țesuturi de origine. Prin urmare, moleculele circulare de ADNmt provin predominant din sistemul hematopoietic, în timp ce moleculele liniare de ADNmt provin predominant din ficat.

de atunci ne-am extins activitatea pentru a căuta eccDNA în plasmă. În special, am demonstrat că moleculele eccDNA fetale sunt detectabile în plasma femeilor însărcinate. Grupul nostru a fost interesat de mulți ani în distribuția dimensiunii ADN-ului circulant. Este interesant de observat că moleculele eccDNA din plasma maternă (cu vârfuri de dimensiuni proeminente la 202 bp și 338 bp) au o distribuție mai mare a dimensiunii decât moleculele ADN liniare (dimensiunea modală la 166 bp). Lucrările noastre anterioare privind moleculele ADN liniare din plasmă au demonstrat că moleculele ADN fetale liniare din plasma maternă au o distribuție de dimensiuni puțin mai scurtă decât moleculele ADN liniare de origine maternă. O altă surpriză a muncii noastre este că am observat o scurtare similară a moleculelor eccdna fetale circulante în comparație cu cele de origine maternă.

care este ipoteza dvs. preferată cu privire la mecanismul de producție a eccDNAs în interiorul celulelor? Ce dovezi există pentru a susține această ipoteză?

Anindya Dutta: cred că eccdna-urile sunt produse ca un produs secundar al reparării ADN-ului. Principalele dovezi pentru aceasta sunt că acestea sunt crescute de agenți care cresc deteriorarea ADN-ului și am raportat că anumite gene de reparare a ADN-ului, cum ar fi MSH3 (implicate în repararea nepotrivirii) sunt necesare pentru a produce eccDNAs.

Birgitte Regenberg: Prefer un model în care orice formă de deteriorare a ADN-ului poate duce la circularizarea ADN-ului prin mecanismele cunoscute de reparare a ADN-ului. Aceasta implică formarea lor prin recombinare omoloagă, microhomologie și capăt nonhomolog care se unește împreună cu alte căi de reparare a ADN-ului. Majoritatea dovezilor noastre se bazează pe omologie în jurul punctului de întrerupere cromozomial care a dus la eccDNA și cred că studiile mutanților sunt încă necesare pentru a stabili cauzalitatea. Re-replicarea ar putea produce, de asemenea, ADN circular, așa cum se explică în modelul de amplificare inversat-repetat dependent de origine (de la Maitreya Dunham), dar trebuie să explorăm cât de important este acest mecanism. Pe lângă procesele aleatorii, se formează câteva cercuri recombinare direcționată (cercurile de excizie a receptorului celulelor T) și retrotranspoziție atunci când eccDNA repetate terminale lungi apar din circularizarea ADN liniar extrachromozomal în timpul ciclului de viață transpozițional al retrotranspozonilor.

Anton Henssen: Pe baza literaturii publicate și a observațiilor noastre, cred că ar putea exista multe mecanisme diferite care să contribuie la generarea eccDNA. EccDNA poate fi creat prin procese catastrofale de rearanjare a genomului, cum ar fi cromotripsis, dar există și alte procese de instabilitate genomică care pot contribui la formarea lor.

Paul Mischel: din nou, îmi voi concentra răspunsurile asupra ecDNA în cancer. Există o viziune istorică a formării ecDNA, sau la acel moment numită formare dublă de minute, în care se întâmplă ceva care are ca rezultat îndepărtarea unei întinderi de ADN din locația sa cromozomială nativă, urmată de replicare și amplificare ca ecDNA. Cercetătorii, inclusiv Robert Schimke, Geoff Wahl, Nicholas Vogt și Bernard Malfoy, printre alții, au contribuit la această cunoaștere. Mecanismele moleculare precise, relația lor cu posibile anomalii în deteriorarea ADN-ului și sistemul de răspuns, rămân incomplet înțelese. Este un domeniu de cercetare activă, inclusiv în laboratorul nostru. În plus, David Pellman și alții au sugerat că cromotripsisul, care apare atunci când un cromozom rămas se „blochează”, plasat într-un micronucleu și tăiat efectiv, ar putea forma ecDNA. Lucrările experimentale recente de la Peter Ly și Don Cleveland, în care au proiectat un cromozom Y cromotriptic, sugerează că cromotripsisul poate duce la formarea ecDNA ca mecanism de amplificare a genelor. Prin urmare, este foarte posibil ca mai multe mecanisme să conducă la formarea ecDNA, care este apoi acționată prin selecție. Va fi important să se dezvolte o înțelegere mecanicistă mai profundă a proceselor care contribuie la formarea ecDNA.

Dennis Lo: în lucrarea noastră de analiză a distribuției mărimii care implică molecule eccDNA în plasma maternă, am observat o serie de dovezi indicative ale semnăturilor nucleozomale. De exemplu, am observat o periodicitate de 10 bp în distribuția mărimii în vecinătatea vârfurilor de dimensiuni proeminente de 202 bp și 338 bp. Presupunerea noastră este că dimensiunea de 202 bp este aproximativ cea a unui nucleu nucleozomal plus două legături, în timp ce dimensiunea de 338 bp este aproximativ cea a două nuclee nucleozomale plus două legături. O altă observație notabilă este că printre cele mai frecvent observate molecule eccDNA din plasma maternă, am observat patru seturi de motive trinucleotidice la locul joncțional al unei molecule eccDNA. La un astfel de site, primul și al treilea motiv sunt repetări directe, în timp ce al doilea și al patrulea sunt un alt set de repetări directe. Sperăm că aceste observații vor contribui la o mai bună înțelegere a mecanismului de producție a eccDNA. Înțelegem pe deplin că nu avem toate informațiile pentru a construi un model complet, dar credem că domeniul în ansamblu avansează spre acest lucru.

ce se știe despre eccDNAs și cancer? În ce moduri contribuie eccDNAs la proprietățile maligne ale celulelor canceroase?

Paul Mischel: am învățat următoarele: 1) ecdn-urile par a fi exclusive pentru cancer sau, cel puțin, nu am văzut-o încă în celulele normale, 2) ecdn-urile conduc la un număr ridicat de copii oncogene și mențin eterogenitatea genetică intratumorală prin mecanismul lor de moștenire non-mendeliană, nonchromozomală; 3) ecdn-urile, din cauza acestui mecanism de moștenire, își pot schimba genomul rapid, inclusiv pentru a se sustrage terapiilor; 4) Nivelul ridicat al șablonului ADN al ecDNA, cuplat cu arhitectura cromatinei modificată, conduce transcrierea oncogenă masivă și poate remodela epigenome în moduri care contribuie la tumorigenesis.

Anton Henssen: ecDNA nu este doar un vehicul pentru amplificarea oncogenă, dar poate contribui și la remodelarea genomului prin reintegrarea sa în genomul liniar. Am arătat că reintegrarea circulară a ADN-ului duce la perturbarea regiunilor genomice importante din punct de vedere funcțional și că această perturbare ar putea contribui la multe caracteristici maligne ale celulelor canceroase.

Birgitte Regenberg: știm că amplificarea unui număr de oncogene pe eccDNA se corelează cu cancerul, iar pacienții cu cancer cu anumite amplificări eccDNA au prognostic slab. Supraexprimarea oncogenelor precum MYC și EGFR asupra eccDNA este probabil să reprogrameze celulele și să inducă starea tumorigenă.

Anindya Dutta: cercurile din cancere sunt mai lungi decât cele din celulele normale și s-a sugerat că au un nume diferit: ecDNAs. Acum știm că acestea sunt prezente în aproape toate cazurile de cancer, dar nu sunt suficient de mari pentru a fi detectabile ca minute duble de citogenetică. Ecdn – urile lungi poartă gene complete, iar atunci când aceste gene sunt oncogene sau gene generatoare de cancer, ecdn-urile permit supraexprimarea și amplificarea lor. De exemplu, ecDNAs poartă următoarele oncogene: oncogena MDM2 (descoperită inițial într-un minut dublu) inactivează supresorul tumoral p53, în timp ce oncogena EGFR face ca celulele gliomului și glioblastomului să fie hiper-receptive la EGF. Deoarece ecdn-urile nu sunt separate în mod egal între celulele fiice, distribuția aleatorie a cercurilor între celulele fiice face mai ușor pentru unele dintre fiice să obțină mai multe copii ale cercurilor și astfel să obțină un avantaj de creștere prin exprimarea mai multor oncogene codificate. Astfel, moștenirea non-mendeliană a cercurilor ADN face mai ușor pentru celula canceroasă să amplifice cercurile care conferă cancerului un avantaj de creștere.

credeți că eccDNAs ar putea servi drept biomarkeri pentru evaluarea bolii, în ce moduri și cum?

Dennis Lo: cred că moleculele eccDNA din plasmă ar fi o direcție interesantă pentru cercetarea biomarker. O provocare este că concentrația lor globală pare a fi substanțial mai mică decât cea a moleculelor de ADN liniar din plasmă. Distribuția de dimensiuni mari a moleculelor eccDNA în plasmă are un avantaj că moleculele mai lungi ar putea transporta mai multe informații genetice și epigenetice din țesutul de origine.

Anindya Dutta: am arătat deja că eccDNAs sunt 1) eliberate în sânge din tumori și din făt și 2) pot fi detectate și cuantificate în bazinul ADN-ului circulant fără celule. Deoarece sunt mai lungi (medie: 250 baze) decât ADN-ul circulant fără celule liniare (medie: 150 de baze) și eccdn-urile mai stabile, fără celule circulante, ar putea fi utile pentru detectarea mutațiilor în oncogene (în cancere) sau pentru detectarea mutațiilor în gene importante din punct de vedere al dezvoltării (pentru testarea non-invazivă-prenatală). Dimensiunea mai lungă a cercurilor observate în cancere în raport cu țesutul normal poate fi, de asemenea, utilă ca instrument de screening în biopsia lichidă a cancerelor.

Birgitte Regenberg: Da, cred că eccDNA poate servi ca biomarker pentru o serie de boli care sunt legate de mutație și rearanjare genomică. EccDNA din gena receptorului celulelor T este deja utilizată pentru detectarea bolii imunodeficienței combinate severe, iar datele recente au arătat că eccDNA de la un făt poate fi detectată în plasma mamei. Se pare că alte eccDNA din plasmă pot servi drept markeri pentru monitorizarea cancerelor, deși concentrația de eccDNA în plasmă este probabil să fie limitată.

Anton Henssen: în oncologia pediatrică, ecDNA sub formă de cromozomi dubli care conțin MYCN este deja un biomarker stabilit pentru evaluarea riscului clinic la pacienții care suferă de neuroblastom. Cred că, în mod similar, alte ecDNAs ar putea servi ca biomarkeri pentru diferite proprietăți ale bolii în multe entități tumorale.

Paul Mischel: da, există date considerabile care sugerează că ecDNA poate fi un biomarker al tipurilor de cancer mai agresive și poate oferi o nouă perspectivă despre capacitatea unor tipuri de cancer de a evolua atât de rapid, inclusiv ca răspuns la terapii. Există, de asemenea, motive imperioase pentru a crede că pacienții ale căror tipuri de cancer sunt determinate de ecDNA ar putea avea nevoie să fie tratați într-un mod diferit.

care este abordarea dvs. preferată pentru a analiza eccDNA și care sunt avantajele?

Birgitte Regenberg: cele mai multe eccDNA există în număr redus de copii și nu este capturat de secvențierea genomului întreg. Pentru a măsura atât eccDNA copie înaltă și joasă, laboratorul meu a dezvoltat metode pentru a izola, secvență, și asambla eccDNA (Circle-Seq și Circle-Map, în colaborare cu L. Maretty, D. Botstein, și M. Mohiyuddin). Aceste metode ne permit să profilăm eccDNA peste genomi în orice celulă și condiție dată. Astfel, putem obține o perspectivă asupra modului în care eccDNA se corelează cu vârsta și boala (colaborări cu J. S. Johansen și Y. Lou), iar la nivel de bază înțelegeți cum se formează, evoluează și pier într-o populație de celule.

Anindya Dutta: laboratorul meu a folosit în cea mai mare parte amplificarea cercului de rulare a cercurilor rezistente la exonuclează cu hexamere aleatorii urmate de secvențierea capătului pereche (căutător de cercuri) pentru a identifica joncțiunile caracteristice cercurilor. Deoarece majoritatea experimentelor genomice nu includ amplificarea cercului rulant, nu putem reanaliza datele genomice generate de alte grupuri pentru a identifica cercurile. Cu toate acestea, recent am arătat că analiza cromatinei accesibile Transpozazei folosind secvențierea (mai ieftină) sau secvențierea întregului genom (mult mai scumpă) poate detecta cercuri de ADN. Sperăm că aceste tehnici utilizate pe scară mai largă vor permite identificarea cercurilor în seturile de date deja existente. În plus, o lucrare recentă de la Dennis Lo și colegii săi, arată că cercurile pot fi detectate prin digestie cu enzime comune de restricție de tăiere și secvențierea fragmentelor pentru joncțiuni.

Dennis Lo: Mai întâi am trata ADN-ul plasmatic cu o exonuclează care ar elimina o mare parte din moleculele ADN liniare din probă. Apoi, am tăiat cercurile, folosind fie enzime de restricție, fie o transpozază, pentru a forma molecule liniare de ADN pentru analize suplimentare (de exemplu, secvențierea ADN-ului). Credem că metoda bazată pe transpozază are un avantaj că, spre deosebire de abordarea bazată pe enzime de restricție care necesită existența situsului de recunoaștere a enzimelor de restricție în molecula eccDNA, metoda transpozazei poate acționa potențial asupra oricărei molecule eccDNA.

Paul Mischel: Colegul meu Vineet Bafna a dezvoltat un set de instrumente puternic, inclusiv Amplicon Architect și amplicon Reconstructor pentru a analiza structura ecDNA. De fapt, se desfășoară lucrări continue cu Dr.Bafna și Dr. Verhaak pentru a analiza mai bine ecDNA în bazele de date de secvențiere a genomului integral disponibile publicului. Howard Chang și Bing Ren, folosim aspecte ale setului de instrumente „epigenetice” pentru a caracteriza ecDNA în cancer.

Anton Henssen: Ne place să izolăm și să secvențăm în mod specific ecDNA cu secvențiere cu citire lungă, ceea ce oferă posibilitatea de a cartografia cu exactitate structura ecDNA.

care sunt întrebările de cercetare legate de eccDNA pe care sunteți cel mai dornic să le explorați?

Paul Mischel: suntem foarte interesați să înțelegem o serie de probleme critice legate de ecDNA, care nu sunt enumerate în ordinea importanței. În primul rând, cum se formează ecDNA și care sunt „jucătorii” moleculari cheie implicați în formarea sa? În al doilea rând, care sunt mecanismele moleculare implicate în întreținerea și funcționarea ecDNA? Sunt utilizate diferite componente? Sunt aceleași componente utilizate diferit? În al treilea rând, care sunt implicațiile clinice pentru pacienți? Poate fi folosit ecDNA pentru a ne spune ceva important despre cursul clinic? În al patrulea rând, putem găsi puncte de intervenție care pot fi utilizate pentru a dezvolta noi tratamente care vor ajuta pacienții ale căror tipuri de cancer sunt determinate de ecDNA?

Anton Henssen: în calitate de medic om de știință, sunt foarte dornic să explorez posibilitățile de a folosi înțelegerea noastră despre ecDNA pentru a găsi noi abordări diagnostice și terapeutice pentru pacienții care suferă de cancere bazate pe ecDNA.

Dennis Lo: Aș dori să explorez capacitatea eccDNA în plasma maternă pentru detectarea sau monitorizarea tulburărilor asociate sarcinii (de exemplu, preeclampsia). De asemenea, sunt interesat să dezvolt abordări mai noi și potențial mai cuprinzătoare pentru analiza eccDNA. Sunt conștient de faptul că metodologiile disponibile în prezent ar putea avea anumite prejudecăți în subseturile selectate ale moleculelor eccdna circulante.

Anindya Dutta: vreau să găsesc funcțiile eccDNAs prezente în celulele normale. Deoarece sunt atât de omniprezente și mozaic somatic, va fi foarte interesant dacă contribuie la eterogenitatea intercelulară în țesuturile normale sau contribuie la o formă de patologie. De asemenea, vreau să delimitez ce căi sunt implicate în formarea cercurilor în celulele normale și canceroase, în speranța că interferarea cu aceste căi în cancere ne va permite să ajutăm la eliminarea cancerelor de potențial loci de amplificare a genelor și, astfel, să ajutăm în terapie. În cele din urmă, vreau să văd adoptarea secvențierii eccDNA în biopsiile lichide ale cancerelor și în testarea prenatală neinvazivă a bolilor genetice la făt.

Birgitte Regenberg: pe lângă înțelegerea modului în care eccDNA ar putea contribui la variația genetică și evoluția genomurilor eucariote, sunt dornic să înțeleg modul în care eccDNA este format și menținut într-un genom. Patru factori pot determina cifra de afaceri a unui ADN circular într-o linie celulară: rata prin care se formează din locusul său cromozomial, capacitatea sa de a se replica, modul său de segregare, precum și avantajul sau dezavantajul de creștere pe care îl oferă celulei sale gazdă. Mai mult, celulele eucariote pot avea potențial mecanisme de degradare sau secreție a eccDNA. Acest lucru este deosebit de important pentru celulele meiotice din organismele multicelulare, deoarece eccDNA din linia germinală ar putea avea efecte negative mari în următoarea generație. Datele recente din drojdie sugerează că celulele meiotice au evoluat într-adevăr mecanisme pentru a sechestra un subset de eccDNA (de la laboratorul de la Berkley) și se pare că același lucru va fi valabil și pentru celulele germinale din organismele multicelulare, cum ar fi oamenii.

contribuții autor

toți autorii au confirmat că au contribuit la conținutul intelectual al acestei lucrări și au îndeplinit următoarele 4 Cerințe: (a) contribuții semnificative la conceperea și proiectarea, achiziționarea de date sau analiza și interpretarea datelor; (b) redactarea sau revizuirea articolului pentru conținut intelectual; (c) aprobarea finală a articolului publicat; și (d) acordul de a fi responsabil pentru toate aspectele articolului, asigurându-se astfel că întrebările legate de acuratețea sau integritatea oricărei părți a articolului sunt investigate și soluționate în mod corespunzător.

dezvăluiri ale autorilor sau potențiale conflicte de interese

la prezentarea manuscrisului, toți autorii au completat formularul de dezvăluire a autorului. Dezvăluiri și / sau potențiale conflicte de interese:

angajare sau conducere

R. W. K. Chiu, Chimie Clinică, AACC; Y. M. D. Lo, Chimie Clinică, AACC, DRA Limited, Take2 Holdings.

Consultant sau rol consultativ

R. W. K. Chiu, Graal; Y. M. D. Lo, Graal, Decheng Capital; P. Mischel, Boundless Bio, Inc.

proprietate stoc

R. W. K. Chiu, Graal, DRA Limited, Take2 Holdings; Y. M. D. Lo, Graal, DRA Limited, Take2 Holdings; P. Mischel, Boundless Bio, Inc.

Honoraria

niciuna declarată.

finanțarea cercetării

R. W. K. Chiu, Graal; A. Dutta, Institutele Naționale de sănătate; Y. M. D. Lo, Graal, Hong Kong cercetare granturi Consiliului tema pe bază de sistem de cercetare T12-403/15N și T12-401 / 16W.

Expert mărturie

nici unul declarat.

brevete

R. W. K. Chiu, PCT/CN2020 / 081066; A. Dutta, SUA PPA 62832443; Y. M. D. Lo, brevete Multiple și aplicații de brevet în aplicațiile de diagnosticare a ADN-ului fără celule; P. Mischel, SD-2019-149-1, SD-2019-149-2, SD-2019-149-3.

alte remunerații

A. Dutta, Gordon Research Conference, Cold Spring Harbor Lab, Academia BIH, Shenzhen Medical School.

abrevieri Non-standard

• ADN eccdna

  ADN circular extracromozomal

• ADN ecDNA

  ADN extracromozomal

• ADNmt

  ADN mitocondrial