laboratorul de diagnostic veterinar de stat, Laboratorul de Diagnostic Medical Veterinar Texas A&m, TVMDL, testează sute de mii de probe anual. Cu toate acestea, în pragul sezonului de vânătoare de cerbi din fiecare an, numărul testelor începe să crească pe măsură ce cererea de boli cronice de risipă, CWD, testarea crește.
ce este boala cronică?
CWD este o boală neurologică progresivă care afectează mai multe specii de cervide. Speciile sensibile la CWD sunt cerbul cu coadă albă, cerbul cu coadă neagră, Cerbul catâr, elanul, cerbul roșu, renii, sika și elanul. De când a fost raportată pentru prima dată în 1967, a fost documentată atât la speciile de cervide captive, cât și la cele libere din 25 de state și trei provincii canadiene.
CWD a câștigat o oarecare atenție în ultimii ani, pe măsură ce rapoartele despre o „boală de cerb zombie” au apărut și s-au răspândit în diferite mass-media. Deși atrăgătoare,” boala cerbului zombie ” este de fapt un termen greșit, deoarece animalele afectate de CWD nu sunt moarte. Odată afectat, poate dura doi până la patru ani pentru ca animalul infectat să înceapă să prezinte semne clinice, care pot imita comportamentul „zombie” pe măsură ce boala progresează. Animalele afectate prezintă semne precum pierderea în greutate, salivarea, poticnirea și stupoarea. Această combinație de semne clinice culminează cu un animal care pare să „risipească”, inventând numele real al bolii.
Similar encefalopatiei spongiforme bovine, ESB, la bovine și scrapie la ovine și caprine, BWD este o encefalopatie spongiformă transmisibilă în mod natural, est sau boală prionică. Prionii sunt proteine anormale și extrem de greu de distrus. Odată infectați, prionii afectează inițial ganglionii limfatici ai animalului și, după răspândirea prin corp, infectează în cele din urmă creierul.
în 2012, CWD a fost descoperit pentru prima dată în Texas în căprioare libere în Munții Hueco. De atunci, boala a continuat să fie detectată în regiunile West Texas și Panhandle în căprioare, căprioare cu coadă albă și elani.
deși istoria CWD din Texas a fost scurtă în comparație cu alte state, testele de diagnostic continuă să crească pe măsură ce agențiile de stat încearcă să controleze boala. În Texas, TVMDL este singurul laborator aprobat pentru testarea CWD.
emitenți CWD: cine sunt ei?
anul trecut, TVMDL a efectuat aproximativ 26.500 de teste CWD. Din numărul total de teste, aproape jumătate au fost efectuate din octombrie până în decembrie. Această creștere a depunerilor CWD coincide cu sezonul de vânătoare de cerbi din Texas.
vânătorii trebuie să respecte anumite linii directoare în timpul sezonului Cerbilor din cauza Texas Parks and Wildlife Department, TPWD, programe care vizează atenuarea răspândirii CWD. De exemplu, dacă un cerb este ucis într-o zonă în carantină CWD, eșantioanele trebuie colectate și trimise pentru testarea CWD. Colectarea probelor se efectuează la stațiile de verificare a vânătorilor, la instalațiile de prelucrare a cerbilor și, uneori, la taxidermiști.
cererile de testare CWD sunt depuse de agențiile de stat, cum ar fi TPWD și Comisia pentru sănătatea animalelor din Texas, TAHC și crescătorii de cerbi. TVMDL oferă servicii acestor agenții și Industriei cerbilor pentru a ajuta la eforturile continue de a urmări răspândirea bolilor precum CWD.
detectarea bolii
o dată la laborator, TVMDL testează probe prin una din cele două metode: testul imunosorbent legat de enzime, ELISA sau imunohistochimie, IHC. Ambele metode de testare necesită țesuturi preluate fie din ganglionii limfatici ai cerbului, fie din obex.
testarea ELISA
metoda cea mai solicitată este testul ELISA. Această metodă este opțiunea mai sensibilă, deoarece folosește țesuturi proaspete, spre deosebire de țesuturile fixate într-un agent de conservare. Întregul proces, excluzând timpul de pregătire a probei, durează de obicei aproximativ trei ore. Odată ce un eșantion ajunge în secțiunea serologie la TVMDL, va începe prima dintre cele trei faze: pregătirea eșantionului.
în timpul preparării probelor, volumele precise și locațiile anatomice ale ganglionilor limfatici și/sau țesuturilor obex sunt tăiate și plasate în tuburi unice de măcinare. Tuburile sunt plasate pe un instrument de omogenizare care lichefiază țesuturile și le pregătește pentru a doua fază de testare, purificare.
faza de purificare este semi-automatizată. Un instrument de manipulare a lichidului începe cu prelucrarea probei. Acest proces digeră prioni normali folosind Proteinaza K și lasă în urmă prioni cauzatori de boli, dacă există. Ulterior, produsul final lichid al procesului de purificare este centrifugat pentru a forma o peletă. Peleta este tratată a doua oară și apoi diluată. Peleta va trece apoi la faza finală de testare și va determina dacă există prioni CWD.
detectarea este faza finală a procesului de testare ELISA. În această fază, peleta de probă diluată este testată folosind un sandwich Elisa. Un sandwich Elisa utilizează două straturi de anticorpi pentru a determina concentrația unui anumit antigen, în acest caz prionul CWD. În timpul procesului se adaugă un substrat care schimbă culoarea ca indicator vizual al prezenței prionilor CWD în eșantion. Dacă un eșantion dezvoltă o schimbare semnificativă a culorii, este considerat un „reactor inițial”, IR, și este retestat. Probele IR care indică încă prezența prionilor CWD după retestare sunt transmise Departamentului Agriculturii din SUA-Serviciul de inspecție a sănătății animalelor și plantelor, USDA-APHIS, Laboratorul Național de Servicii Veterinare.
testarea IHC
a doua opțiune de testare CWD a TVMDL, IHC, utilizează țesuturi fixe sau conservate. Dacă țesuturile ajung la TVMDL proaspete sau nu sunt bine fixate, se adaugă o zi la proces pentru a permite ca țesuturile să fie fixate în formalină până când sunt gata pentru testare.
odată bine fixate, țesuturile sunt plasate în casete de plastic etichetate individual. Casetele sunt necesare pentru următoarea etapă în care țesuturile sunt procesate timp de aproximativ 13 ore. În acest timp, țesuturile sunt deshidratate și toată apa este înlocuită cu ceară de parafină pentru a păstra structura celulară a țesutului.
după prelucrare, țesuturile sunt încorporate într-o matriță de ceară de parafină pentru a le pregăti pentru secționare folosind un Microtom. Acest instrument feliază blocul de țesut de ceară în secțiuni groase de 5 microni, mai subțiri decât un fir de păr uman.
secțiunea subțire a țesutului este montată pe o lamelă de sticlă. După uscare peste noapte, lamelele de sticlă sunt pregătite pentru colorare. Lamelele sunt tratate pentru a îndepărta parafina și pentru a asigura disponibilitatea locurilor de legare a antigenului în timpul procesului de colorare. Acest proces identifică antigene CWD în țesut prin legarea unei molecule anti-prionice la antigenul CWD în țesutul pozitiv și apoi legarea unui cromogen roșu la acea moleculă.
acest proces de colorare semi-automatizat durează aproximativ șase ore în total; două ore de muncă manuală și patru ore automate. În acest interval de timp, cele trei instrumente de colorare pot pata 90 de diapozitive de sticlă. Când colorarea este completă, toate diapozitivele sunt acoperitelipit și dat patologilor TVMDL care inspectează microscopic fiecare diapozitiv pentru prezența CWD.
Similar metodei de testare ELISA, dacă o probă este suspectată de a avea CWD, aceasta este trimisă Laboratorului Serviciului Veterinar Național din Ames, Iowa pentru teste de confirmare și un diagnostic final.
diferența TVMDL
deși alte laboratoare din SUA oferă testarea CWD, TVMDL se diferențiază prin dedicarea sa persoanelor din industria Cerbilor din Texas. Agenția lucrează îndeaproape cu alte agenții de stat și crescători de cerbi pentru a stabili relații de lucru și conexiuni personale.
pentru mai multe informații despre testarea CWD la TVMDL, vizitați tvmdl.tamu.edu sau sunați la College Station laboratory la 1-888-646-5623.