Streszczenie
użyliśmy dwuetapowego systemu hodowli klonalnej, aby jednoznacznie wykazać, że pojedyncze prymitywne komórki progenitorowe limfohemopoetycznych mają zdolność do różnicowania wzdłuż linii mieloidalnej lub limfoidalnej B. Wysoce wzbogacone komórki szpiku kostnego mysich platerowano pojedynczo w hodowli przez mikromanipulację w obecności stymulowanego mitogenem pokeweed pożywki uwarunkowanej komórkami śledziony, erytropoetyny, czynnika stalowego (SF) i interleukiny (IL) 7. Czterdzieści pięć procent pojedynczych komórek tworzyło kolonie pierwotne z ekspresją wielu linii hemopoetycznych. Gdy aliquoty z poszczególnych kolonii były replikowane w drugorzędowej hodowli metylocelulozy zawierającej SF i IL-7, 41% Kolonii pierwotnych dało początek koloniom limfocytów. Komórki Kolonii limfocytów były blastopodobne i B220+, sIg-, Mac-1 -, Gr-1 -, ly-1 -, L3T4 -, Ly-2-i CD3 -. 30 do 70% komórek było z grupy Thy-1+. mRNA łańcucha mu wykryto w większości komórek przez hybrydyzację in situ z antysensowną sondą RNA. Gdy kolonie limfocytów pochodzące z pojedynczej komórki połączono i pojedynczo wstrzyknięto myszom scid, IgM typu dawcy było mierzalne w surowicy myszy, a śledziony zawierały komórki typu B dawcy. Następnie przeprowadziliśmy wstępne badania przesiewowe czynników wzrostu w celu zidentyfikowania czynników wzrostu, które mogą zastąpić stymulowane przez mitogen pokeweed pożywkę uwarunkowaną komórkami śledziony w hodowli pierwotnej. Kombinacje dwóch czynników, które obejmowały SF i IL-6, IL-11 lub czynnik stymulujący tworzenie kolonii granulocytów, były skuteczne w hodowli pierwotnej w utrzymaniu potencjału limfoidalnego B. Co ciekawe, IL-3 nie może ani zastąpić, ani działać synergistycznie z SF, aby wspierać potencjał limfatyczny kultur pierwotnych. Nasze obserwacje pokazują, że wiele prymitywnych progenitorów wcześniej uważanych za popełnione na mieloidach posiada również potencjał limfoidalny B. Ten system hodowli powinien okazać się cenny dla wyjaśnienia mechanizmów regulujących wczesne stadia limfohemopoezy.