farmaceutyki przeciwciała monoklonalnego (mAb) przyciągają znaczne zainteresowanie ze względu na ich silną moc terapeutyczną i swoistość w leczeniu chorób zapalnych, onkologicznych i autoimmunologicznych. Ze względu na ich wewnętrzną złożoność ze względu na dużą liczbę mikro-heterogeniczności, istnieje zasadnicza potrzeba metod analitycznych, aby zapewnić kompleksową dogłębną charakterystykę cząsteczek kandydujących.
Twórczy Biolabs zapewnia mnóstwo technik analitycznych do charakterystyki przeciwciał i oceny jednorodności na wszystkich etapach odkrywania mAb, rozwoju przedklinicznego i klinicznego. Przedstawiamy tutaj zastosowanie kapilarnego ogniskowania izoelektrycznego (cIEF) do analizy heterogeniczności ładunku przeciwciała. Jest szeroko stosowany do charakterystyki terapeutycznych MAB. Określając pI izoform ładunku mAb, cIEF dostarcza informacji kluczowych dla ustalenia tożsamości, czystości, modyfikacji potranslacyjnych i stabilności.
Wprowadzenie do cIEF
cIEF opiera się na zasadzie elektroforezy na żelu kapilarnym. Elektroforeza jest techniką separacji opartą na różnej prędkości ruchu naładowanych gatunków w polu elektrycznym, w kierunku elektrody o przeciwnym ładunku. Aby oddzielić cząsteczki w oparciu o punkt izoelektryczny (pI), gradient pH wewnątrz żelu ustala się za pomocą mieszanin ampholytowych. Pod polem elektrycznym cząsteczki migrują wzdłuż pola elektrycznego, aż osiągną pH odpowiadające pI, gdzie ładunki dodatnie i ujemne w cząsteczkach są zrównoważone. Absorpcja UV przez całą kapilarę jest mierzona w całym separacji, umożliwiając obserwację w czasie rzeczywistym i ostateczne oznaczanie ilościowe.
rys.1 Zasada ogniskowania izoelektrycznego. (Pergande, 2017)
cIEF dla charakterystyki heterogeniczności ładunku
MAB są podatne na różne modyfikacje potranslacyjne (np., glikozylacja, fosforylacja, utlenianie i obcinanie lizyny), co prowadzi do wariantów ładunku. Niektóre z tych wariantów ładunku mogą mieć możliwy wpływ na aktywność biologiczną i bezpieczeństwo cząsteczki w różnym stopniu. Na przykład profil glikozylacji MAB ma duży wpływ na biologiczną aktywność białka. W związku z tym rutynowe monitorowanie heterogeniczności MAB charge jest integralną częścią każdego planu zarządzania jakością i cyklem życia produktu. Jest to również jeden z najważniejszych aspektów analitycznych badań rozwoju i porównywalności biopodobnych. Jako technika separacji opartej na ładunku, cIEF jest potężnym narzędziem do scharakteryzowania profilu ładunku MAB, ponieważ różne warianty ładunku można odróżnić według ich pI za pomocą wewnętrznej kalibracji. Ponieważ cIEF zapewnia bardzo wysoką odtwarzalność i specyficzność, jest to jedno z najpopularniejszych narzędzi do analizy mAb.
cechy naszych usług
- charakterystyka wielkości i wariantów wsadu nienaruszonych i zredukowanych MAB z użyciem cIEF
- Analiza wariantów wsadu MAB z zastosowaniem podejścia ortogonalnego
- separacja cIEF, a następnie analiza spektrometrii mas (MS)
- usługi dostosowane do indywidualnych wymagań
Creative Biolabs oferuje również szeroką gamę testów funkcji przeciwciał, aby pomóc zrozumieć wpływ wariantów ładunku na aktywność i właściwości przeciwciał, takich jak funkcje efektorowe, fcrn i wiązanie antygenu powinowactwa i PK, wyjaśniając w ten sposób relacje struktura-funkcja. Jeśli jesteś zainteresowany naszymi usługami, skontaktuj się z nami, aby omówić swoje wymagania.