the state veterinary diagnostic laboratory, the Texas A& m Veterinary Medical Diagnostic Laboratory, TVMDL, testuje setki tysięcy próbek rocznie. Jednak na skraju każdego sezonu polowań na jelenie, liczba testów zaczyna wzrastać wraz ze wzrostem zapotrzebowania na przewlekłą wyniszczającą chorobę, CWD, testy.
co to jest przewlekła choroba wyniszczająca?
CWD jest postępującą chorobą neurologiczną, która dotyka kilku gatunków szyjki macicy. Gatunkiem typowym jest jeleń białogłowy, jeleń czarnogłowy, jeleń mułowy, Łoś, jeleń czerwony, renifer, sika i łoś. Od czasu pierwszego zgłoszenia w 1967 r. udokumentowano go zarówno w niewoli, jak i na wolności w 25 stanach i trzech prowincjach Kanady.
CWD zyskał pewną uwagę w ostatnich latach, gdy doniesienia o” chorobie zombie Jelenia ” pojawiły się i rozpowszechniły w różnych mediach. Choć chwytliwe, „zombie Deer disease” jest rzeczywiście mylące, ponieważ zwierzęta dotknięte CWD nie są martwe. Po dotknięciu może minąć od dwóch do czterech lat, zanim zakażone zwierzę zacznie wykazywać objawy kliniczne, które mogą naśladować zachowanie „podobne do zombie” w miarę postępu choroby. Dotknięte zwierzęta wykazują oznaki, takie jak utrata masy ciała, ślinienie się, potknięcie i stupor. Ta kombinacja objawów klinicznych kończy się zwierzęciem, które wydaje się” marnować”, ukuwając rzeczywistą nazwę choroby.
podobnie jak gąbczasta encefalopatia bydła, BSE, u bydła i trzęsawki owiec i kóz, CWD jest naturalnie występującą pasażowalną gąbczastą encefalopatią, TSE lub chorobą prionową. Priony są nieprawidłowymi białkami i niezwykle trudnymi do zniszczenia. Po zakażeniu priony początkowo wpływają na węzły chłonne zwierzęcia, a po rozprzestrzenieniu się przez ciało ostatecznie zakażają mózg.
w 2012 roku CWD został po raz pierwszy odkryty w Teksasie w Jeleniu mułowym w górach Hueco. Od tego czasu choroba nadal jest wykrywana w zachodnim Teksasie i Panhandle regionach u mułów jelenie, jelenie i łosie.
chociaż historia CWD w Teksasie była krótka w porównaniu z innymi stanami, badania diagnostyczne nadal rosną, ponieważ agencje państwowe próbują kontrolować chorobę. W Teksasie TVMDL jest jedynym laboratorium zatwierdzonym do badania CWD.
Zgłaszający CWD: kim oni są?
w ubiegłym roku TVMDL wykonało około 26 500 testów CWD. Z ogólnej liczby testów, prawie połowa została wykonana od października do grudnia. Wzrost liczby zgłoszeń CWD zbiega się z sezonem polowań na jelenie w Teksasie.
myśliwi muszą przestrzegać pewnych wytycznych podczas sezonu jeleni ze względu na Texas Parks and Wildlife Department, tpwd, programy mające na celu złagodzenie rozprzestrzeniania się CWD. Na przykład, jeśli jeleń zostaje zabity w strefie poddanej kwarantannie CWD, próbki muszą zostać pobrane i przekazane do badań CWD. Pobieranie próbek odbywa się w stacjach kontroli myśliwych, zakładach przetwórstwa jeleni i czasami wypychaczy.
wnioski o testy CWD są składane przez agencje państwowe, takie jak TPWD i Texas Animal Health Commission, tahc i Deer breeders. TVMDL świadczy usługi dla tych agencji i przemysłu jeleni, aby pomóc w bieżących wysiłkach na rzecz śledzenia rozprzestrzeniania się chorób, takich jak CWD.
wykrywanie choroby
w laboratorium TVMDL testuje próbki za pomocą jednej z dwóch metod: enzymatycznego testu immunosorbentowego, ELISA lub immunohistochemii, IHC. Obie metody badań wymagają tkanek pobranych z węzłów chłonnych jelenia lub obex.
test ELISA
najbardziej pożądaną metodą jest test ELISA. Metoda ta jest bardziej wrażliwa, ponieważ wykorzystuje świeże tkanki w przeciwieństwie do tkanek utrwalonych w środku konserwującym. Cały proces, z wyłączeniem czasu przygotowania próbki, zwykle trwa około trzech godzin. Gdy próbka dotrze do sekcji serologicznej w TVMDL, rozpocznie się pierwsza z trzech faz: przygotowanie próbki.
podczas przygotowywania próbki dokładne objętości i anatomiczne lokalizacje węzłów chłonnych i / lub tkanek obex są cięte i umieszczane w unikalnych rurkach mielących. Rury są umieszczane na homogenizatorze, który upłynnia tkanki i przygotowuje je do drugiej fazy testowania, oczyszczania.
Faza oczyszczania jest półautomatyczna. Przyrząd do obsługi cieczy rozpoczyna się od przetworzenia próbki. Proces ten trawi normalne priony za pomocą proteinazy K i pozostawia po sobie priony chorobotwórcze, jeśli takie istnieją. Następnie ciekły produkt końcowy procesu oczyszczania jest wirowany w celu utworzenia granulatu. Pellet poddaje się obróbce po raz drugi, a następnie rozcieńcza. Pellet przechodzi następnie do końcowej fazy badania i określa, czy występują jakiekolwiek priony CWD.
wykrywanie jest ostatnią fazą procesu testowania ELISA. W tej fazie rozcieńczony osad próbki testuje się przy użyciu testu ELISA typu sandwich. Test ELISA typu sandwich wykorzystuje dwie warstwy przeciwciał do określenia stężenia konkretnego antygenu, w tym przypadku prionu CWD. Podczas procesu dodaje się podłoże zmieniające kolor jako wizualny wskaźnik obecności prionów CWD w próbce. Jeśli próbka rozwija znaczną zmianę koloru, jest uważana za” początkowy reaktor ” IR i jest ponownie testowana. Próbki IR, które nadal wskazują na obecność prionów CWD po ponownym badaniu, są przekazywane do amerykańskiego Departamentu Rolnictwa-Animal and Plant Health Inspection Service, USDA-APHIS, National Veterinary Services Laboratory.
testowanie IHC
druga opcja testowania CWD TVMDL, IHC, wykorzystuje utrwalone lub zachowane tkanki. Jeśli tkanki dotrą do TVMDL świeże lub słabo utrwalone, do procesu dodaje się dzień, aby dać czas na utrwalenie tkanek w formalinie, dopóki nie będą gotowe do badania.
po dobrym zamocowaniu chusteczki umieszcza się w indywidualnie oznakowanych plastikowych kasetach. Kasety są niezbędne do następnego etapu, w którym tkanki są przetwarzane przez około 13 godzin. W tym czasie tkanki są odwodnione, a cała woda jest zastępowana woskiem parafinowym, aby zachować strukturę komórkową tkanki.
po przetworzeniu tkanki są osadzane w formie wosku parafinowego w celu przygotowania ich do sekcji za pomocą mikrotomu. Ten przyrząd tnie blok tkanki woskowej na 5-mikronowe grube sekcje, cieńsze niż pasmo Ludzkich Włosów.
cienki odcinek tkanki jest zamontowany na szkiełku. Po wyschnięciu przez noc szklane szkiełka są przygotowywane do barwienia. Szkiełka są poddawane obróbce w celu usunięcia parafiny i zapewnienia dostępności miejsc wiązania antygenu podczas procesu barwienia. Proces ten identyfikuje antygeny CWD w tkance poprzez wiązanie cząsteczki anty-prionowej z antygenem CWD w tkance dodatniej, a następnie Wiązanie czerwonego chromogenu z tą cząsteczką.
ten półautomatyczny proces barwienia trwa łącznie około sześciu godzin; dwie godziny pracy ręcznej i cztery zautomatyzowane godziny. W tym czasie trzy instrumenty barwiące mogą zabrudzić 90 szklanych szkiełek. Po zakończeniu barwienia wszystkie szkiełka są zakrywane i podawane PATOLOGOM TVMDL, którzy mikroskopowo sprawdzają każdy szkiełek pod kątem obecności CWD.
podobnie jak w przypadku metody testu ELISA, jeśli podejrzewa się, że próbka ma CWD, jest ona wysyłana do laboratorium krajowych służb weterynaryjnych w Ames w stanie Iowa w celu przeprowadzenia badań potwierdzających i ostatecznej diagnozy.
różnica w TVMDL
chociaż inne laboratoria w USA oferują testy CWD, TVMDL wyróżnia się poprzez swoje poświęcenie dla osób w branży jeleni w Teksasie. Agencja ściśle współpracuje z innymi agencjami państwowymi i hodowcami jeleni w celu nawiązania relacji zawodowych i osobistych.
aby uzyskać więcej informacji na temat testów CWD w TVMDL, odwiedź tvmdl.tamu.edu lub zadzwoń do laboratorium College Station pod numer 1-888-646-5623.