status Her-2/neu można wykryć analizując liczbę kopii genów przez Southern blotting, PCR lub FISH, lub ilość ekspresji białka można ustalić przez Western blot, PCR lub FISH.blotting, enzym-linked immunosorbent Assay, lub IHC. Dwie najczęściej stosowane obecnie metody to IHC i FISH, ponieważ są one w stanie ocenić Her-2/neu w tkankach archiwalnych osadzonych formaliną.
większość badań Her-2 / neu została przeprowadzona przez IHC, która wykrywa nadekspresję produktu białkowego Her-2 / neu na błonie komórkowej komórek nowotworowych. W badaniu wykorzystano przeciwciało monoklonalne CB11, które, podobnie jak standaryzowany Poliklonalny HercepTest, jest skierowane przeciwko domenie wewnątrzcytoplazmatycznej cząsteczki Her2/neu .
IHC jest powszechnie dostępny i łatwy do wykonania przy rozsądnych kosztach. Jednak ta półilościowa procedura jest nękana przez artefakty techniczne, różnice wrażliwości między różnymi przeciwciałami i subiektywną interpretację, co skutkuje zmiennością między patologami . Badania wykazały nadmierną wrażliwość produktu HercepTest zatwierdzonego przez Amerykańską Agencję ds. żywności i leków, z fałszywie dodatnim wskaźnikiem wynoszącym aż 50% . Thomson i współpracownicy doszli do wniosku, że w przypadkach, w których intensywność plam IHC wynosi 1+ lub 2+, umowa interaobserver jest słaba, a wartość prognostyczna jest niezadowalająca do użytku klinicznego; zalecali dodatkowe badania, najlepiej na rybach .
FISH jest dość obiektywną i ilościową procedurą w wykrywaniu amplifikacji genu Her-2 / neu w jądrach komórek nowotworowych. Wadami tej procedury są jej stromy koszt (10 razy, że IHC), wyrafinowanie, potrzeba mikroskopu fluorescencyjnego, sygnał tymczasowy (wymaga specjalnej kamery), a jego niezdolność do wykrycia i oceny histomorfologii nowotworu.
nadekspresja Her-2/neu wykryta przez IHC jest silnie skorelowana z amplifikacją genów wykrytą przez ryby (aż 98% zgodności) . Jednak 3-15% raków piersi wykazuje umiarkowane zabarwienie błony Her-2 / neu bez oznak amplifikacji. Najczęściej reprezentują one wysoce czułe niespecyficzne zabarwienie (fałszywie dodatnie) i, rzadko, albo wzmocnioną transkrypcję mRNA przy braku amplifikacji, albo amplifikację genu, która jest poniżej poziomu wykrywalności metod hybrydyzacji in situ .
Kakar i współpracownicy doszli do wniosku, że IHC jest odpowiednia do wstępnej oceny Her-2/neu, ale pacjenci, u których guzy uzyskały wynik mniejszy niż 3+ (szczególnie pacjenci interpretowani jako 2+), skorzystaliby z FISH, aby dokładniej ocenić status Her-2/neu i uniknąć niedokładnego prognostykowania i niewłaściwego leczenia .
CISH jest ostatnim postępem w wykrywaniu Her-2 / neu. Wykorzystuje solidną sondę o unikalnej sekwencji opracowaną do hybrydyzacji in situ i jest obiecującą praktyczną alternatywą dla ryb. Po pierwszym badaniu CISH przez Tanner i współpracowników, siedem innych raportów korzystnie potwierdzone wyniki CISH . Zgodność między CISH a rybami wahała się od 85% do nawet 100% . Wszystkie te raporty zauważyć zalety CISH nad rybami: wymaga zwykłego mikroskopu; metoda jest mniej uciążliwe i bardziej ekonomiczne; intensywność sygnału jest stała; i patolodzy są zaznajomieni z sygnałami IHC i są w stanie skorelować wyniki z podstawowych histomorfologii nowotworu. CISH pozwala obserwatorom wybrać pola inwazyjnego raka przewodowego, unikając ognisk raka wewnątrzduchowego, dla których Her-2/neu ma inne znaczenie kliniczne. CISH jest specyficzną, wrażliwą i łatwą do zastosowania metodą wykrywania amplifikacji genu Her-2 / neu i może być stosowany razem z IHC do oceny pacjentów z rakiem piersi . Ross i współpracownicy niedawno przejrzeli aktualny stan testów Her-2 / neu i doszli do wniosku, że CISH jest wygodniejszą techniką opartą na genach, która „czeka w skrzydłach”.
w niniejszym badaniu zgodność pomiędzy 3+ IHC i amplifikowanymi cish wynosiła 100% (40 z 40), co oznacza, że wszystkie przypadki amplifikowane genami wykazują nadekspresję białka Her-2/neu. Natomiast porozumienie w sprawach 2 + IHC i cish-amplified wyniosło tylko 45%, co jest niższe niż wcześniej zgłaszane (93%) . 13,75% (22 ze 160) guzów IHC-dodatnich/cish bez amplifikacji w tym badaniu, z których wszystkie miały 2+ punktów IHC, jest wyższy niż 6% fałszywie dodatni wynik przez Zhao i współpracowników , chociaż porównywalny do wyniku 17% (IHC CB11 versus Fish) uzyskanego przez Tubbsa i współpracowników . Okazuje się, że wynik 2+ IHC jest niejednoznaczny w porównaniu z CISH. Ten podzbiór może skorzystać z dalszych badań odruchu CISH. Wszystkie negatywne przypadki IHC były cish nie amplifikowane, wykazując pełną zgodność wszystkich negatywnych wyników. 86,25% ogólna zgodność między IHC (przy użyciu przeciwciał CB11) i CISH w tym badaniu jest niższa niż w poprzednich raportach (94-96%) . Zgadzamy się z Sapino i współpracownikami, że analizy amplifikacji genów można uniknąć we wszystkich przypadkach 0, 1+ i 3+ IHC, ponieważ wyniki są przewidywalne z IHC i są całkowicie zgodne z CISH . Użyteczność CISH jest zatem w dalszym badaniu Her-2 / neu zmiany na niejednoznacznych przypadkach w IHC, który pozostaje podstawową metodą przesiewową. Połączony algorytm IHC – cish zapewnia ekonomiczne i kompleksowe dane Her-2/neu, aby poprowadzić klinicystów w mapowaniu opcji leczenia.
Kategoria CISH o niskiej amplifikacji (6-10 sygnałów) była najtrudniejsza do zinterpretowania, wymagająca dokładnego wyliczenia kopii genu. Klastrowanie sygnału, prawdopodobnie w wyniku intrachromosomalnego wzmocnienia jednorodnie zabarwionych regionów, było natychmiast widoczne w silnie wzmocnionych przypadkach i było łatwe do oceny .
test na aneuploidię chromosomu 17 nie został przeprowadzony na testach cish bez amplifikacji i niskiej amplifikacji, ponieważ ostatnie badania wykazały, że powoduje to, że analiza jest bardziej kosztowna i czasochłonna bez dodawania odpowiednich danych, oprócz zgłaszania zalecanej liczby amplikonów jądrowych i działania jako inna forma kontroli wewnętrznej dla reakcji hybrydyzacji . Ponadto, chociaż producent (Zymed) zasugerował, aby aneuploidy chromosomu 17 były testowane na wszystkich przypadkach amplifikowanych genami , zgadzamy się z Vera-Roman i współpracownikami, którzy poprawnie wskazali, że ponieważ większość wyników polisomii mieści się w szarej strefie od trzech do pięciu sygnałów, ustawienie progu odcięcia punktów sygnału do wysokości sześciu lub więcej (jak w tym badaniu) praktycznie eliminuje zmienną polisomię.
w tym badaniu nie zaobserwowano guzów amplifikowanych z ujemnym wynikiem IHC. Można to prawdopodobnie wyjaśnić faktem, że było to badanie z jedną instytucją, które mogło mieć jednolicie ustalone i przetworzone bloki parafiny tkankowej guza,a także jednolitą technikę pobierania antygenu, z których oba ułatwiają wysokiej jakości IHC. Zhao i współpracownicy zgłaszali sporadyczne przypadki amplifikowane przez IHC-ujemne CISH i uważali, że stanowią one mały nieokreślony procent, który wzmacniał Her-2/neu bez nadekspresji . W tym samym badaniu i innych badaniach ryb odnotowano również rzadkie nowotwory 3 + IHC, które nie były amplifikowane (fałszywie dodatnie) . Przyczyny rozbieżności między IHC a CISH są podobne do tych między IHC a FISH, jak stwierdzono wcześniej w niniejszym sprawozdaniu.
przyczynami niepowodzenia testów i fałszywej negatywności oferowanych przez poprzednie badania CISH był brak guza na sekcji, niezdolność do oceny z powodu wysokiego tła, niskie natężenie sygnału pomimo powtarzających się prób, brak sygnałów z kontroli wewnętrznej i stosowanie utrwalacza alkohol–formalina–kwas octowy . Zauważono ponadto, że obróbka wstępna cieplna i trawienie pepsyną są najbardziej krytycznymi procedurami dla zoptymalizowanej wydajności CISH i że udane wskaźniki CISH były niskie, gdy stosowano 20-letnie bloki tkankowe .
Sauer i współpracownicy skorelowali wyniki IHC i FISH z rokowaniem klinicznym. Zauważono, że zarówno przypadki IHC/Fish-dodatnie, jak i przypadki tylko Fish-dodatnie miały takie same rokowania dotyczące przeżycia, podczas gdy przypadki tylko IHC-dodatnie miały rokowania podobne do tych w przypadku guzów IHC/Fish-ujemnych. W przeciwieństwie do przypadków IHC-ujemnych/Fish-dodatnich prawdopodobieństwo przeżycia było podobne do prawdopodobieństwa przeżycia przypadków IHC/Fish-dodatnich. Ci sami autorzy doszli do wniosku, że gdyby tylko IHC były stosowane jako podstawowe narzędzie, przypadki IHC-ujemne/Fish-dodatnie zostałyby pominięte; te kobiety nie odniosłyby korzyści ze stosowania trastuzumabu i ich przeżycie byłoby niekorzystne. W przeciwieństwie do tego, guzy tylko dodatnie IHC wydają się należeć do lepszej grupy prognostycznej, a brak ich wykrycia prawdopodobnie nie miałby negatywnego wpływu na przeżywalność .
ponieważ kliniczne badania wyników mają jeszcze zająć użyteczność wyników cish o niskiej amplifikacji i wysokiej amplifikacji, zwłaszcza niepewne znaczenie grupy o niskiej amplifikacji, kategorie te są nadal w ruchu. Niezależnie od tego ograniczenia, nadal istnieje wartość w zgłaszaniu takich wzmocnionych grup oddzielnie w chwili obecnej, do czasu uzyskania jakichkolwiek skojarzeń klinicznych w przyszłości. Intraobserver i interaobserver zmienność na raportowanie niskie amplifikowane i wysokie amplifikowane wyniki CISH nie zostały uwzględnione w tym badaniu, chociaż patolog, który interpretował testy CISH konsekwentnie stosowane kryteria określone przez producentów.
rak piersi u kobiet przed menopauzą ma inny profil biopatologiczny niż u starszych pacjentów, z przewagą niekorzystnych parametrów prognostycznych, w tym większą częstością guzów stopnia 3 i częstszą nadekspresją Her2/neu . Młody wiek służy jako zastępcza miara niekorzystnych profili prognostycznych . Badanie to nie wykazało związku między stanem menopauzy, który arbitralnie ustalono na 50 lat i powyżej, a zmianą Her2 / neu.
amplifikacja Her2/neu była bezpośrednio skorelowana ze stopniem i typem histologicznym raka piersi . Sapino i współpracownicy zasugerowali, że na podstawie stopnia guza i typu histologicznego patolog powinien być w stanie wskazać onkologowi, który rak piersi wymaga analizy Her2/neu . Jednakże, podczas gdy żaden z czterech dobrze zróżnicowanych nowotworów nie wykazał amplifikacji Her2/neu lub nadekspresji, w tym badaniu nie zebrano znaczącej korelacji pod względem statusu Her2/neu I stopnia histologicznego; dlatego nadal SUBSKRYBUJEMY testowanie Her2/neu na wszystkich nowo zdiagnozowanych nowotworach piersi. Ogólnie, rozkład wiekowy pacjentów z rakiem piersi i stopień histologiczny guza nie przewidywał istotnie statusu IHC i Cish Her2 / neu.