chociaż większość prac dotyczących zakażeń chlamydialnych małych przeżuwaczy dotyczy owiec, Chlamydioza ma wpływ na zdrowie gospodarcze i publiczne w wielu gospodarstwach kóz na całym świecie. Poronienia chlamydialne odnotowano po raz pierwszy w Niemczech w 1959 roku.Następnie choroba została zdiagnozowana w Bułgarii, Hiszpanii, USA, Francji, Indiach, Japonii, Wielkiej Brytanii, Czadzie, Grecji i Tunezji. W wielu obszarach aborcja chlamydialna jest drugą przyczyną aborcji zakaźnych po brucelozie i główną przyczyną w większości krajów, w których bruceloza jest kontrolowana
etiologia
choroba jest spowodowana małą Gram-ujemną bakterią, Chlamydia psittaci, która rośnie w cytoplazmie komórek eukariotycznych w unikalnym cyklu rozwoju, w którym oporna forma zakaźna, podstawowe ciała (EB) przeplatają się z metabolicznie aktywną, niezakaźną formą ciała siatkowatego.RB). EB przyłącza się do błony komórki gospodarza i promuje własną endocytozę w ograniczonej wakuoli błonowej zwanej inkluzją, która nie łączy się z lizosomami. Następnie EB przekształca się w RB, który replikuje się przez rozszczepienie binarne. Po kilku podziałach RBs, które wypełniają wszystkie inkluzje, przekształcają się z powrotem w zakaźny EBs. Te EBs są uwalniane przez lizę komórek gospodarza lub wytłaczanie inkluzji z komórki gospodarza .
Taksonomia
Chlamydia psittaci jest jednym z czterech gatunków rodzaju Chlamydia, który obejmuje również Chlamydia trachomatis, Chlamydia pneumoniae i chlamydia pecorum.
Chlamydia trachomatis i Chlamydia pneumoniae są zarówno ludzkimi patogenami. C. psittaci infekuje wiele różnych ptaków, ssaków, a czasami ludzi, a C. pecorum zanieczyszcza przeżuwacze, świnie i koale. U owiec i kóz C. pecorum powoduje zapalenie płuc, zapalenie spojówek i zapalenie stawów, ale bardzo często jest izolowany od bezobjawowych infekcji jelitowych .
z wyjątkiem bardzo rzadkich przypadków szczepy wywołujące aborcję u kóz należą do serotypu C. psittaci-1, który jest również odpowiedzialny za zapalenie płuc, zapalenie spojówek i zapalenie stawów, a czasami infekcje jelitowe bez żadnych objawów klinicznych. Gatunek C. psittaci jest bardzo niejednorodny i przed pojawieniem się czwartego gatunku C. pecorum .
analizy filogenetyczne genów 16S i 23s rRNA sugerują istnienie dziewięciu zróżnicowanych gatunków w chlamydiaceae I lead Everett et al., aby zaproponować utworzenie dwóch nowych rodzajów Chlamydia i Chlamydophila. Rodzaj Chlamydia, który odpowiada dawnemu nazewnictwu Chlamydia trachomatis, obejmuje 3 gatunki: C. trachomatis (szczepy ludzkie), C. suis (szczepy świń związane z C. trachomatis wyizolowane z samoistnych aborcji, infekcji pochwy i pneumoniae) i C. muridarum (szczepy myszy i chomika).
rodzaj Chlamydophila przegrupowuje 6 gatunków: C. pneumoniae, C. pecorum, C. psittaci (poprzednie szczepy ptaków Chlamydia psittaci), C. caviae, czynnik zakaźnego zapalenia spojówek świnki morskiej (GPIC), C. felis (szczepy C. psittaci, które infekują koty) i C. abortus (serotyp klasyczny-1 szczepy Chlamydia psittaci). Wyniki są zgodne z wynikami uzyskanymi w wyniku analiz filogenetycznych pięciu innych genów kodujących (GroEL, kdo-transferaza, MOMP, białko bogate w cysteinę 60-kDa i lipoproteina bogata w cysteinę )oraz właściwości biologicznych szczepów. Analiza polimorfizmu długości restrykcyjnej (RFLP) rybosomalnej międzygenicznej domeny dystansowej genów 16s-23s rRNA zapewnia szybką i powtarzalną metodę identyfikacji i klasyfikacji szczepów chlamydialnych w nowych gatunkach . Jednak niektórzy członkowie środowiska naukowego nie zgadzają się z propozycją nowej taksonomii Chlamydiów, ponieważ nie uwzględnia ona całego genomu bakterii.
objawy kliniczne
Chlamydioza charakteryzuje się aborcją w ostatnich miesiącach ciąży, martwymi narodzinami lub przedwczesnymi narodzinami słabych dzieci z niską wagą urodzeniową. Aborcja występuje bez wcześniejszych objawów klinicznych, nawet jeśli u niektórych kóz może wystąpić uporczywy kaszel bez duszności lub zapalenie stawów i zapalenie rogówki i spojówki. W zakażeniach doświadczalnych u niektórych kóz obserwowano niewielkie upławy na dzień przed aborcją . Zatrzymane łożyska i zapalenie macicy nie są zwykle, nawet jeśli są one częstsze niż u owiec . Po aborcji kozy mogą szybko wyzdrowieć lub mogą występować brązowe wydzieliny z pochwy. W zakażeniach doświadczalnych lub w niektórych naturalnych zakażeń z wysokim wskaźnikiem aborcji tylko 50% lub mniej kóz, które przerwane, odzyskane szybko, podczas gdy choroba po poronieniu u owiec jest niezwykłe. Może to być spowodowane różnicami w zjadliwości między szczepami, ponieważ bardzo niewiele wiadomo o mechanizmach zjadliwości szczepów. W modelach mysich nie wykazano różnic w zjadliwości między szczepami owiec i kóz , ale amplifikowany polimorfizm długości fragmentu (AFLP) ujawnił różnice genomiczne między szczepem kóz AC1 a szczepami C. psittaci o serotypie 1 kozy .
chociaż wykazaliśmy , że obsługa zakażonych kóz może skutkować zakażonymi ogierami, do tej pory nie opisano zapalenia epiddymitis spowodowanego przez C. psittaci. Jest to prawdopodobnie spowodowane bardzo małą liczbą badań nad chlamydiozą kóz, a nie większą podatnością Baranów i buhajów na infekcje chlamydialne.
w nowo zakażonym stadzie częstość aborcji jest ciężka. Często 30% lub więcej, czasami 90% ciężarnych nie może przerwać i produkcji mleka może zmniejszyć. Wysoki wskaźnik aborcji obserwuje się przez 2 lub 3 lata, po czym choroba nabiera charakteru cyklicznego: 10% ciężarnych samic przerywa co roku przez kilka lat, aż do wystąpienia nowego ogniska, a następnie wszystkie roczniaki przerywają. Wysoki poziom odporności wytwarzany po aborcji jest odpowiedzialny za cykliczną ewolucję choroby w stadzie: wyjątek stanowi dwukrotne przerwanie ciąży przez kozę. Papp i Shewen wykazały, że niektóre owce, które przerwane może stać się przewlekle zainfekowane. Antygeny chlamydialne i DNA mogą być wykryte w pochwie, macicy i macicy rury podczas okresu okołoowulacyjnego owiec, które przerwane. Nie przeprowadzono badań w celu określenia częstości występowania przewlekłych zakażeń w stadach kóz.
płód nie wykazuje specyficznych zmian makroskopowych. Dzieci urodzone blisko terminu mogą być pokryte brązowym materiałem. Wyraźne lub poplamione krwią rozproszone obrzęki, poplamione krwią płyny w jamie brzusznej i opłucnej oraz wybroczyny na języku, w jamie policzkowej i kopytach są często obserwowane.
przenoszenie choroby
zakażone powoduje wydalanie dużych ilości chlamydii w łożysku i płynach płodowych w czasie żartowania i w czasie aborcji. Niektóre kozy mogą zrzucić chlamydię w płynach pochwowych od ponad dwóch tygodni przed aborcją do ponad dwóch tygodni po aborcji. Może to tłumaczyć większą częstość poronień w nowo zakażonych stadach kóz, ponieważ podatność na infekcje jest różna w zależności od stanu fizjologicznego zwierzęcia. Kozy, które są w ciąży mniej niż 100 dni są bardziej podatne niż te pod koniec ciąży lub te, które są bezpłodne. Mniejsze ilości Chlamydiae mogą być również przelane w moczu, mleku i Kale w ciągu kilku dni po aborcji.
młode kozy urodzone od zakażonych matek mogą zatrzymać zakażenie w stadzie lub przekazać je innym stadom. Badanie grupy 27 roczniaków w zakażonym stadzie w pierwszym roku życia wykazało, w jaki sposób mogą rozprzestrzeniać się choroby, nie będąc wykrytym przez odpowiedź serologiczną. Te młode kozy można podzielić na 3 grupy w zależności od ciąży/porodu. Pierwsza grupa dzieciała normalnie żywe dziecko, druga grupa była bezpłodna lub przerwała ciążę zbyt wcześnie, aby można było ją wykryć, a w trzeciej grupie kozy przerwały ciążę. Przeciwciała utrwalające dopełniacz (CF) dwóch pierwszych grup zwiększały się do osiągnięcia maksimum (1/80 – 1/160) w czasie hodowli, następnie poziom przeciwciał zmniejszał się aż do momentu zapłodnienia . Trzecia grupa miała miano przeciwciał przeciwko CF, a rola wenerycznego przenoszenia chlamydiozy przez mężczyzn nadal wymaga zbadania. Jednak infekcje narządów płciowych u Baranów i byków powodują niepłodność i bezpłodność u mężczyzn, a nie aborcję u kobiet. Należy zbadać rolę, jaką choroba odgrywa w infekcji jelitowej nieprzejrzystej i jej wpływ na epidemiologię aborcji chlamydialnej. Niedawna identyfikacja markerów molekularnych dla szczepów jelitowych kóz umożliwiłaby takie badania.
rozpoznanie
rozpoznanie zwykle wykonuje się poprzez wykrycie bakterii w rozmazach lub odcisku łożyska w połączeniu z analizą serologiczną co najmniej dziesięciu próbek surowic.
barwienie chlamydii metodą stempla, Gimeneza lub Machiavello jest szybkie i można je łatwo przeprowadzić w większości laboratoriów, ale jego interpretacja jest często trudna, ponieważ wymaga doświadczonej osoby odróżnienia chlamydii od Brucelli i Coxiella. Immunofluorescencja przy użyciu koniugatów immunoglobulin oznaczonych fluorescencyjnie znakowanym izotiocyjanianem zwiększa czułość i swoistość wykrywania chlamydii w rozmazach lub odciskach łożyska.
obecność antygenów chlamydialnych w łożysku gruntowym lub wymazach z pochwy pobranych tuż po aborcji można wykryć metodą ELISA za pomocą zestawów diagnostycznych opracowanych dla zakażeń C. trachomatis u ludzi .
w medycynie ludzkiej, reakcja łańcuchowa polimerazy (PCR) lub jej odmiana, reakcja łańcuchowa ligazy (LCR) są uważane za najbardziej czułe metody diagnostyczne dostępne w diagnostyce chlamydii. Kilka starterów wspólnych dla wszystkich typów chlamydii, jako Omp1, gen kodujący główne białko błony zewnętrznej, lub specyficzny dla szczepów C. psittaci lub C. pecorum lub serotypu-1 C. psittaci, zostało opracowanych do zastosowań weterynaryjnych. Ale ta technika pozostaje droga.
test wiązania dopełniacza (CFT) jest najczęściej stosowanym i uważany za złoty standard w diagnostyce serologicznej. Jednak CFT nie jest bardzo wrażliwy i nie specyficzny, ponieważ test wykorzystuje antygen i wspólny z C. pecorum, który większość kóz przechowuje w jelitach. W związku z tym pozytywne reakcje z mianami między 1:10 A 1: 40 nie są specyficzne dla aborcji, ale mogą odnosić się do zakażenia jelitowego C. pecorum. Test CFT najlepiej wykonać 3 do 6 tygodni po aborcji lub Ocieleniu, gdy odpowiedź przeciwciała jest na najwyższym poziomie. Test CFT nie może być stosowany do indywidualnej diagnozy lub wykrywania zakażenia u młodych lub u mężczyzn .
podjęto kilka prób opracowania bardziej specyficznych technik, które rozróżniałyby infekcje C. psittaci i C. pecorum. Jednak żaden z tych testów nie był wystarczająco wrażliwy i specyficzny. Niedawno opracowano nowy pośredni Test immunosorbentów enzymatycznych (ELISA) oparty na rekombinowanym antygenie, który wykazuje ekspresję części białka o masie 80 – 90 kDa . Test reaguje z surowicy przeciwciał wywołanych wcześnie przeciwko tych wysoce immunogennych multigenic rodziny białek . Test ten ma wysoką czułość i wysoką swoistość .
leczenie
tetracykliny wpływają na replikację chlamydii i mogą być skuteczne w zapobieganiu aborcji. Wstrzyknięcie 20 mg/kg oksytetracykliny drogą domięśniową w 105 i 120 dniu ciąży może zapobiec aborcji, ale nie może zapobiec zrzucaniu chlamydiów w czasie ciąży.
szczepienia
zabite szczepionki mogą zmniejszyć częstość aborcji, ale nie wydalania chlamydii w czasie ciąży. Aborcja wywołuje wystarczająco silną odporność, aby wytrzymać późniejsze wyzwania, opracowano żywą szczepionkę złożoną z wrażliwego na temperaturę mutanta szczepów C. psittaci . Podatne kozy były szczepione przed kryciem i nie stwierdzono ingerencji w późniejszą ciążę. Kozy były chronione przed chlamydialną aborcją i zapobiegano chlamydialnej aborcji. Niemniej jednak, gdy wszystkie kozy w zakażonym stadzie są szczepione w pierwszym roku, a wszystkie zwierzęta zastępcze są szczepione w kolejnych latach, przerwanie aborcji może potrwać około 3 lat. Jest to spowodowane utajonym zakażeniem u kóz, kóz, które zostały zakażone przed szczepieniem, ale nie zostały przerwane. Szczepienie nie zmieni przebiegu utajonego zakażenia. Kozy te mogą aborcji lub może dziecko zdrowe lub zakażone dziecko w terminie i może lub nie może rzucić Chlamydiae. Tak długo, jak kozy z utajoną infekcją są obecne w stadzie, nie zaleca się przerywania szczepień (w przeciwnym razie aborcja rozpocznie się od nowa), ani nie jest możliwe sprzedawanie zaszczepionych zwierząt, z wyjątkiem hodowców, którzy regularnie szczepią swoje stado.
perspektywy na przyszłość
opracowanie szczepionki, równie skutecznej jak wspomniana żywa szczepionka, która chroniłaby i umożliwiała wykrywanie serologiczne zakażonych kóz w szczepionych stadach, byłoby bardzo przydatne do zwalczania choroby. Wyczerpanie „specyficznego antygenu diagnostycznego” z żywej szczepionki nie jest obecnie możliwe, ponieważ nie są jeszcze dostępne odpowiednie metody genetyczne i molekularne i wydaje się trudne do usunięcia tej rodziny białek. Z tych powodów interesująca byłaby szczepionka bezkomórkowa, która chroni przed aborcją i wydalaniem. Wcześniejsze badania wykazały, że zarówno limfocyty T, jak i B biorą udział w odporności ochronnej . W mysich modelach komórki T CD8+ (Lyt 2+ u myszy )odgrywają główną rolę w ochronie po przeniesieniu komórek śledziony. Do tej pory C. antygeny i epitopy komórek T psittaci są nieznane. Chociaż należy zachować ostrożność w ekstrapolacji wyników C. trachomatis na C. psittaci, zidentyfikowano kilka epitopów komórek T NA C. trachomatis major outer membrane protein (MOMP)
rola przeciwciał w zapobieganiu zakażeniu łożyska i płodu przez C. psittaci wykazano u myszy. Pasywne przenoszenie swoistych surowic poliklonalnych indukuje znaczną odporność, aczkolwiek niższą niż ochrona mediowana przez komórki T. Przeciwciała monoklonalne (MAB), które neutralizują C. zakaźność psittaci in vitro nadaje niezwykłą odporność ciężarnym myszom po podaniu dożylnym, ponieważ aborcja i kolonizacja płodu są eliminowane . Odporność humoralna bierze udział w ochronie. Jego skuteczność zależy od stężenia swoistych przeciwciał przeciwko odpowiedniemu epitopowi. Wszystkie izolowane do tej pory ochronne MAB reagują z termoczułymi epitopami konformacyjnymi umieszczonymi na OLIGOMERZE MOMP .
dlatego oligomer MOMP może być potencjalnym składnikiem szczepionki . Nie jest jednak możliwe wyprodukowanie tego antygenu poprzez ekstrakcję z chlamydiae, ponieważ koszt produkcji znacznie przekraczałby koszt, jaki rolnik uznałby za przystępny dla szczepionki przeciwko kozie lub owcy. Dlatego też należy zbadać alternatywne metody produkcji szczepionek.
wytwarzanie rekombinowanego OLIGOMERU MOMP może być trudne. Gen kodujący MOMP, Omp1, jest dobrze scharakteryzowany, ale wysoki poziom ekspresji genu pełnej długości od nieuregulowanego promotora jest toksyczny dla E. coli. Z tego powodu podjęto różne eksperymentalne strategie wytwarzania epitopów ochronnych. Próbowaliśmy naśladować epitopy ochronne monoklonalnymi przeciwciałami anty-idiotypowymi lub mimotopem peptydowym ograniczonym konformacyjnie, ale żaden z nich nie był skuteczny. Zdecydowaliśmy się ocenić szczepienie myszy szczepionką DNA jako szczepienie DNA za pomocą genu MOMP myszy chroniących przed C. trachomatis i indyków przed C. psittaci . Do tej pory uzyskano tylko częściową ochronę, ale dalsze badania (genu docelowego, stężenia DNA, drogi szczepienia itp.) jest konieczne, aby wiedzieć, czy myszy można chronić szczepionką DNA równie skutecznie, jak szczepionką żywą.