Konvertering av kolesterol til pregnenolon er mediert av kolesterol sidekjede spalting (scc) enzym, p450scc. Mangelfull SCC-aktivitet forårsaker medfødt lipoid adrenal hyperplasi (også kjent som 20,22 desmolase mangel), en potensielt dødelig defekt i syntesen av alle steroidhormoner. For å undersøke mulige genetiske defekter som forårsaker denne sykdommen syntetiserte vi fire oligodeoksyribonukleotider som inneholder 63 til 72 baser som tilsvarer deler Av bovin komplementær DNA (cDNA) sekvens For P450scc. De bovine oligonukleotidene ble merket og brukt direkte til å sonde Sørlige blotter av normalt humant genomisk DNA, og avslørte et mønster som indikerer at Det er et Enkelt p450scc-gen i det menneskelige genomet. Hybridisering Til Nordlige blotter av normal human og bovin adrenal messenger RNA indikerer At P450scc messenger RNA er ca 2,0 kilobaser lang i begge arter. Hybridisering av oligonukleotidene til genomisk DNA fra tre urelaterte pasienter MED SCC-mangel oppdaget ikke en sletting i det humane p450scc-genet. Bovin sekvens oligonukleotider ble deretter brukt til å isolere en human p450scc cDNA klon. Det isolerte P450scc cDNA-fragmentet inneholder 818 baser som koder for 239 aminosyrer av proteinet, oversettelsessignalet og 98 baser av 3 ‘ uoversatt region. Sekvensen av denne karboksyterminale halvdelen av det humane p450scc-proteinet er 72% homolog med bovinsekvensen og inneholder en ekstra aminosyre som ikke finnes i bovin P450scc; humane og bovin nukleotidsekvenser er 81% homologe. Repetisjon av genomisk DNA blotting studier med cdna-sonden ga de samme resultatene oppnådd med bovin-sekvens oligonukleotid prober, bekrefter AT scc mangel ikke skyldes en sletting i regionene I p450scc hybridisering med prober. Lange, kjemisk syntetiserte heterologe sekvensoligonukleotider som inneholder ukjent antall basefeil med humane sekvenser, kan således brukes til å studere humane gener slik at tilgang til en cDNA ikke er nødvendig for slike studier.