Materialer Og Metoder
etter å ha mottatt skriftlig informert samtykke fra pasienter, undersøkte vi steady-state farmakokinetikken til oralt administrert klonidin i plasma hos 17 gravide kvinner som fikk klonidin under midten av svangerskapet (22-26 svangerskapsuke) eller sent i svangerskapet (34-38 svangerskapsuke). Seks av disse kvinnene deltok i maternal og navlestreng (arteriell og venøs) plasmaprøvesamlinger på leveringstidspunktet for måling av klonidinkonsentrasjoner. Gestasjonsalder var basert på siste menstruasjon eller tidlig ultralyd dating.
Emnevalg. Denne studien ble godkjent Av University Of Washington Investigational Review Board. Forsøkspersonene var kvalifisert til å delta hvis de var gravide, 18 år, hadde en hematokrit ≥på 28% og fikk oral klonidin på grunn av mors hypertensjon.
Doseringsregime. Oral klonidinbehandling ble ikke endret for studieformål. Dosene varierte fra 0,15 til 0,30 mg per dag, gitt i delte doser. Varigheten av den farmakokinetiske studien var avhengig av individets doseringsintervall, som varierte fra 6 til 12 h. i 3 dager før studien ble det gitt orale klonidintabletter fra samme produksjonsparti. Emner registrerte tiden for hver dose på en studiekalender. Emner tok sin morgen klonidin dose innen 30 min av 8: 00 AM. Påfølgende doser ble tatt innen 30 minutter etter planlagte administrasjonstider. Morgenen etter den farmakokinetiske studien ble forsøkspersonene bedt om å faste, med unntak av klare væsker, i 5 timer før klonidin ble administrert til 1 time etter dosering.
Prøveinnsamling. Serielle plasmaprøver ble samlet på følgende tidspunkter: 0, 0.5, 1, 1.5, 2, 3, 4, 6, 8, 10, og 12 timer etter dosering, eller avkortet for å tilsvare pasientens doseringsintervall. Urin ble samlet over ett doseringsintervall for å bestemme klonidin renal clearance og kreatininclearance. Plasmaprøver, maternal og navlestreng (arteriell og venøs), ble samlet på leveringstidspunktet for kvantifisering av klonidinkonsentrasjoner. Alle prøver ble lagret ved -80°C inntil prøveanalyse.
Konsentrasjoner Av Klonidin. Plasmakonsentrasjoner av klonidin ble kvantifisert ved bruk av en validert væskekromatografi/massespektrometri (lc / MS) – analyse. I korte trekk ble 250 µ av plasmaprøver blandet med 500 pg intern standard (klonidin-d4) i 500 µ natriumkarbonat (0,1 M) (pH = 9,3) og 3 ml heptan/isoamylalkohol (98,5:1,5). Standarder ble utarbeidet ved spiking blank plasma med 0, 12.5, 25, 50, 100, 200, 250, 375, 500, og 750 pg klonidin. Prøver ble ristet på en horisontal shaker i 15 min ved romtemperatur. Etter sentrifugering (1500g i 10 min) ble prøvene frosset på tøris og det organiske laget dekantert til et rent kulturrør. To milliliter svovelsyre alikvoter (0,05 M) ble tilsatt til det organiske laget og igjen rystet i 15 min. Etter sentrifugering (1500g i 10 min) ble prøvene frosset på tøris og det organiske laget ble kassert. En 200-µ av 29.29% vandig ammoniumhydroksid ble tilsatt til det vandige laget sammen med 3 ml heptan / isoamylalkohol (98,5: 1,5)og ristet i 15 minutter. Etter sentrifugering (1500g i 10 min) ble prøvene frosset på tøris og det organiske laget dekantert til et rent kulturrør. Det organiske laget ble fordampet under en nitrogenstrøm ved 40°C. resten ble rekonstituert med 75 µ maursyre (12 mM)/metanol (60:40), hvorav 10 µ ble injisert på LC/MS-systemet.
Urinprøver på 250 µ ble blandet med 250 µ maursyre (12 mM) og 50 ng intern standard (klonidin-d4). Standarder ble utarbeidet ved å spike tom urin med 0, 1.25, 2.5, 6.25, 12.5, 18.75, og 25 ng klonidin, henholdsvis. Prøvene ble virvlet, og 1 µ ble injisert på LC/MS.
LC/MS-systemet var Et Agilent 1100 MSD (Agilent Technologies, Santa Clara, CA) bestående av binær pumpe, autosampler, kolonnekammer og massespektrometer. Væskekromatografikolonnen Med høy ytelse var En Phenomenex Synergi Polar RP80A, 250 mm × 2.0 mm, 4 µ(Phenomenex, Torrance, CA). Kolonnen ble opprettholdt ved 40°C. Mobilfasekomponenter var 12 mM maursyre (A) og metanol (B), med en innledende strømningshastighet på 0,25 ml/min. Den innledende mobilfasen ble opprettholdt i 1 min og besto av 40% b for plasmaprøver og 35% B for urinprøver. Prosentandelen B ble økt lineært i løpet av de neste 4 min til 90% for plasma og 60% for urin og deretter opprettholdt konstant i 1 min med en lineær strømningsøkning til 0,3 ml / min for urin og plasma. For returgradienten ble prosentandelen b deretter redusert lineært over 1 min til 40% (plasma) eller 35% (urin), som deretter ble opprettholdt konstant. Strømningshastigheten ble opprettholdt på 0,3 ml / min i 1 min og deretter lineært redusert over 1 min til 0,25 ml / min og deretter opprettholdt konstant. Den totale kjøretiden var 12,5 min. For både plasma-og urinanalyser ble massespektrometeret operert i positiv elektrospraymodus og satt for selektiv ionmonitorering av m / z 230 (klonidin) og m / z 236 (klonidin-d4) med oppholdstid på 289 msek for hver ion.
Farmakokinetiske Parametere. Steady-state farmakokinetiske parametre ble bestemt ved bruk av standard ikke-kompartmentelle teknikker. Arealet under plasmakonsentrasjon-tidskurven over ett doseringsintervall (AUCt) ble beregnet ved hjelp av den lineære trapesformede regelen. Tilsynelatende oral clearance (CL/F) ble beregnet VED CL / F = Dose / AUCt. Klonidin renal clearance (Klrenal) ble beregnet ved Klrenal = Ae,τ/AUCt, Hvor ae,τ = mengden klonidin utskilt uendret i urinen i ett doseringsintervall. Kreatininclearance ble beregnet av CrCl = (Volumeurin × Creatinineurin) / (CreatinineSerum × τ). Klonidin renal clearance justert for glomerulær filtrasjonshastighet (GFR) ble beregnet ved Klrenal justert FOR GFR = Klrenal-fu × CrCl, hvor fraksjonen ubundet i plasma (fu) ble antatt å være 0,80 (Hulter et al., 1979). I alle våre forsøkspersoner tillot det relativt korte doseringsintervallet ikke nøyaktig estimering av halveringstiden for klonidin, som tidligere er rapportert å være 11.1 ± 3.3 og 10.8 ± 2.2 t hos ikke-gravide friske voksne (Cunningham et al., 1994; Fujimura et al., 1994).
Statistikk. Våre farmakokinetiske parametere for klonidin i svangerskapet ble sammenlignet med tidligere publiserte parametere hos friske, ikke-gravide frivillige (CL / F, Porchet et al., 1992; Cunningham et al. 1994) (CLrenal, Fujimura et al., 1994). Lineær regresjon ble brukt til å bestemme korrelasjon mellom kreatininclearance og klonidin renal clearance. Unpaired Studentens t-test ble brukt til å sammenligne de gravide og ikke-gravide gruppene. En p-verdi < 0,05 ble ansett å være signifikant. Alle resultater er rapportert som gjennomsnittlig ± s. D.